Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas
Summary
A procedure to implant green fluorescent protein-expressing pancreatic cancer cells (PANC-1 GFP) orthotopically into the pancreas of Balb-c Ola Hsd-Fox1nu mice to assess tumor progression and metastasis is presented here.
Abstract
O câncer de pâncreas continua a ser um dos cancros para os quais a sobrevivência não melhorou substancialmente nos últimos décadas. Apenas 7% dos pacientes diagnosticados vai sobreviver mais do que cinco anos. De modo a compreender e imitar o microambiente de tumores pancreáticos, utilizou-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que permite imagem não invasiva de progressão do tumor em tempo real. Células de cancro do pâncreas que expressam a proteína fluorescente verde (GFP PANC-1) foram suspensos em matriz da membrana basal, de alta concentração, (por exemplo, Matrigel HC) com meio isento de soro e, em seguida, injectado no cauda do pâncreas por laparotomia. A suspensão de células na matriz de membrana basal elevada concentração torna-se uma substância do tipo gel, uma vez que atinja a temperatura ambiente; Portanto, gelifica quando entra em contacto com o pâncreas, criando uma vedação no local da injecção e impedir qualquer fuga de células. O crescimento do tumor ea metástase para outros órgãos são monitorados em directoanimais usando fluorescência. É fundamental utilizar os filtros apropriados para a excitação e de emissão de GFP. Os passos para a implantação ortotópica são detalhados neste artigo para que os pesquisadores podem facilmente replicar o processo em ratinhos nus. Os passos principais deste protocolo são preparação da suspensão de células, a implantação cirúrgica, e todo o corpo fluorescente imagiologia in vivo. Este modelo ortotópico foi concebido para investigar a eficácia de novos terapêutica em tumores primários e metastáticos.
Introduction
O câncer de pâncreas é diagnosticada com maior frequência em comparação com outros tipos de câncer e é o 4º principal causa de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. A partir do momento do diagnóstico, mais de 90% dos pacientes morrem dentro de cinco anos 1,2. Actualmente, a remoção cirúrgica do tumor é a única cura para o cancro do pâncreas, mas menos do que 20% dos doentes são elegíveis para se submeter a cirurgia, principalmente devido ao momento do diagnóstico da doença é em fase avançada e tem metástase 3,4. A falta de sintomas específicos faz com que o câncer de pâncreas uma doença silenciosa; alguns dos sintomas incluem dor abdominal, dor nas costas, perda de apetite, náuseas e icterícia; que pode ser facilmente interpretado como doenças digestivas comuns 4. Por esta razão, é importante desenvolver novas ferramentas farmacológicas para auxiliar no diagnóstico e tratamento de cancro pancreático.
A utilização de modelos animais nos permite compreender a biologia do pancrecâncer e atic proporciona um insight sobre a aplicação deste conhecimento para os seres humanos. Modelos ortotópicos xenoenxerto de câncer de pâncreas são realistas, porque os tumores crescem no órgão de origem 5. Em contraste com os modelos heterotópicos, onde as linhas de células tumorais ou fragmentos são implantados subcutaneamente, modelagem ortotópico permite a recriação do microambiente tumoral e imita a interacção das células tumorais com os seus arredores 6. O modelo de xenoenxerto de tumores descrito aqui deriva a partir da linha celular de cancro pancreático humano PANC-1 GFP, que é geneticamente manipulada para expressar a proteína fluorescente verde (GFP). Detecção de GFP permite para uma imagiologia e monitorização do crescimento do tumor e metástases 7 não-invasiva. O desenvolvimento do tumor ocorre rapidamente, de forma espontânea, e se assemelha a de tumores primários de pacientes com câncer pancreático humanos 8. modelos ortotópicos proporcionar uma previsão mais exacta da eficácia do fármaco em resposta a agentes terapêuticos, enquantosimulando o microambiente do tumor.
Como mencionado acima, este modelo animal permite a detecção de fluorescência do crescimento de tumores e metástases em tempo real. detecção fluorescente permite uma imagem mais direta / live comparação com luminescência. Com a fluorescência, a luz emitida é um resultado de uma excitação por luz de um outro comprimento de onda menor; Considerando que, a emissão de luz, a luz emitida é o resultado de uma reacção química e pode não ter forte emissão 9. Além disso, todo o corpo in vivo de imagens de fluorescência não é prejudicial para o animal e permite aos investigadores para monitorizar o crescimento do tumor ao longo do tempo em resposta a tratamentos terapêuticos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Descreve-se um modelo murino ortotópico de cancro do pâncreas que expressa GFP, permitindo, assim, a monitorização não invasiva do crescimento do tumor usando todo o corpo in vivo imagiologia fluorescente (Figura 1). Esta técnica permite monitorar o desenvolvimento do tumor em tempo real (Figura 3); ele pode ser uma ferramenta importante para pesquisadores para estudar a eficácia terapêutica de novos agentes contra o câncer de pâncreas. Outro aspecto importante deste …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank the Western University of Health Sciences for the Intramural Grant.
Materials
| RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-077 | |
| Penicillin Streptomycin | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare or Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB Syringe 27G1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | ||
| Surgical Scissors, 5.5"straight mayo | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 GFP cell line | Anticancer, Inc | ||
| Small Animal Imaging System: | |||
| iBOx Scientia, UVP : | UVP, LLC Upland, CA. | Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals | |
References
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