Abstract
प्रमस्तिष्क धमनी वृत्त (Circulus धमनी प्रमस्तिष्क) या विलिस (गाय) का चक्र एक संचार ऑप्टिक chiasma और हाइपोथेलेमस कि मस्तिष्क और आसपास के ढांचे को रक्त की आपूर्ति आसपास के सम्मिलन है। यह मस्तिष्क amyloid वाहिकारुग्णता (सीएए) -associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial aneurysms सहित कई cerebrovascular विकारों में फंसाया गया है। उनकी रोकथाम के लिए दवा उपन्यास लक्ष्यों की पहचान के लिए इन रोगों अंतर्निहित आणविक तंत्र का अध्ययन पशु मॉडल की आवश्यकता है। इन मॉडलों में से कुछ, ट्रांसजेनिक हो सकता है, जबकि दूसरों Cerebro-वाहिका के अलगाव, यहाँ वर्णित विधि CoW.The किसी भी माउस वंश में गाय अलगाव के लिए उपयुक्त है और स्क्रीनिंग (जीन, प्रोटीन के उत्पादन की अभिव्यक्ति के लिए काफी क्षमता है सहित शामिल होगी, posttranslational प्रोटीन संशोधनों, secretome विश्लेषण, आदि) माउस cerebro- के बड़े जहाजों पर अध्ययनवाहिका। यह भी पूर्व vivo अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता अंग स्नान पृथक माउस घ्राण धमनियों लिए प्रणाली विकसित की आदत डाल द्वारा।
Introduction
प्रमस्तिष्क धमनी वृत्त (Circulus धमनी प्रमस्तिष्क), भी विलिस (गाय), Willisor विलिस बहुभुज के पाश के चक्र के रूप में जाना जाता है) ने 1664 में पहली बार थॉमस विलिस द्वारा वर्णित किया गया था यह एक संचार ऑप्टिक chiasma और हाइपोथेलेमस कर सकते हैं कि आसपास स्थित सम्मिलन है मस्तिष्क और आसपास के ढांचे को रक्त की आपूर्ति करने के लिए एक केंद्रीय हब के रूप में माना जाता है। रक्त आंतरिक मन्या और कशेरुका धमनियों के माध्यम से इस संरचना में प्रवेश करती है और यह आंतरिक मध्य और पीछे मस्तिष्क धमनियों के माध्यम से चक्र से बाहर बहती है। इन धमनियों के प्रत्येक चक्र के दोनों तरफ छोड़ दिया और शाखाओं का अधिकार है। आधारी, पोस्ट संप्रेषण, और (चित्रा 1 और चित्रा 2) पूर्वकाल पूरा धमनियों संवाद स्थापित वृत्त। बहिर्वाह धमनियों में से किसी में बिगड़ा रक्त के प्रवाह का खतरा, मन्या और मस्तिष्क धमनियों से चक्र में प्रवेश जिससे गारंटी है कि पर्याप्त रक्त बी करने के लिए आपूर्ति की है खून के विलय से कम से कम हैबारिश। इस संरचना भी आंतरिक मन्या धमनी के गंभीर ओक्लूसिव रोगों में जमानत के लिए रक्त के प्रवाह के लिए मुख्य मार्ग के रूप में कार्य करता है।
cerebrovascular विकारों के कई प्रकार गाय में अपने मूल है। सबसे आम मस्तिष्क amyloid वाहिकारुग्णता (सीएए) -associated vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial aneurysms कर रहे हैं। 1, 2, 3 इन विकारों hypoperfusion को वैसोडायलेटेशन के कारण पैदा हो सकती है, और इन्ट्रासेरेब्रल और / या subarachnoid हेमोरेज अंततः इस्कीमिक या रक्तस्रावी स्ट्रोक या में अनुवाद पर सबसे अच्छा, एक क्षणिक ischemic हमले। न्यूरोइमेजिंग, संभवतः एंजियोग्राफी के साथ संयुक्त सहित नैदानिक प्रक्रियाओं, हाल के अग्रिमों में, एक मस्तिष्क बायोप्सी के लिए आवश्यकता के बिना यह संभव इन प्रमुख cerebrovascular रोग चिकित्सकीय निदान करने के लिए बनाया है। फिर भी, प्रभावी और विशिष्ट उपचार (औषधीय या endovascular) वर्तमान में कमी कर रहे हैं और वहाँ इसलिए नए को परिभाषित करने की जरूरत हैआणविक लक्ष्य।
मानव में इन बीमारियों की रोकथाम के लिए दवा उपन्यास लक्ष्यों की पहचान पशु मॉडल और गाय सहित Cerebro-वाहिका को अलग-थलग करने के तरीकों की आवश्यकता होगी। इस तरह के मॉडल, भड़काऊ परिवर्तन सहित विशिष्ट परिवर्तन, के सबूत और सुराग प्रदान करना चाहिए intracranial धमनी धमनीविस्फार, CAA या intracranial atherosclerosis के पशु मॉडल में बड़े जहाजों की दीवारों में होने वाली। 4, 5, 6
हम इस तरह के रूप में CAA (ई) और संबंधित रोगों अल्जाइमर रोग में पोत सूजन के अध्ययन की सुविधा के लिए माउस गाय अलगाव के लिए एक विधि की स्थापना की है। माउस गाय को अलग-थलग करने के लिए इस विधि रोग प्रगति के दौरान भड़काऊ cerebrovascular जीन अभिव्यक्ति के आकलन के लिए विकसित किया गया था। साथ में leptomeningeal और pial धमनियों की दीवारों के भीतर amyloid बीटा बयान का पता लगाने के साथ, इस विधि के लिए यह आसान रोकते कर सकता हैमेरा Cerebro-वाहिका दीवार में भड़काऊ जीन अभिव्यक्ति और Aβ पेप्टाइड संचय के बीच संभव रिश्ता। leptomeningeal और subarachnoid अंतरिक्ष में pial सहित मस्तिष्क के संवहनी नेटवर्क, बड़े विलिस के चक्र बनाने धमनियों का एक विस्तार है। विधि यहाँ वर्णित किसी भी माउस वंश की गाय को अलग-थलग करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और माउस Cerebro-वाहिका के बड़े जहाजों पर स्क्रीनिंग (जैसे, जीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन के उत्पादन और posttranslational प्रोटीन संशोधनों) के सभी प्रकार के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
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Protocol
सभी प्रक्रियाओं पशु प्रयोग के लिए स्थानीय आचार समिति (Ile डी फ्रांस-पेरिस-समिति, प्राधिकरण 4270) के अनुमोदन के साथ, देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए यूरोपीय समुदाय मानकों के अनुसार प्रदर्शन किया गया।
1. संज्ञाहरण
- pentobarbital की एक घातक खुराक दिखे सर्जरी से पहले वयस्क चूहों में intraperitoneally (27 गेज सुई और 1 मिलीलीटर सिरिंज) (1 मिलीग्राम / 10 ग्राम शरीर के वजन करने के लिए)।
2. पोत छिड़काव
ध्यान दें: पोत छिड़काव के दौरान आंखों के लिए पशु चिकित्सक मरहम लागू करने के लिए कोई जरूरत नहीं है। यह प्रक्रिया तेजी से (5-10 मिनट) है और पशु की मौत में समाप्त होता है। एक पैर की अंगुली चुटकी के साथ प्रतिक्रिया की कमी की पुष्टि करें।
- आईरिस कैंची का प्रयोग, एक चीरा, के बारे में 4 सेमी लंबा, पेट की दीवार और पेरिटोनियम में, बस रिब पिंजरे के नीचे हैं।
- डायाफ्राम में एक छोटा सा चीरा (कुछ मिलीमीटर लंबे) और फिर continuई रिब पिंजरे के पूरी लंबाई के साथ डायाफ्राम के चीरा फुफ्फुस गुहा का पर्दाफाश करने के लिए।
- उरोस्थि दूर लिफ्ट और hemostat के साथ उरोस्थि की नोक दबाना; गर्दन पर hemostat जगह है। ध्यान से दिल को जोड़ने के उरोस्थि वसा ऊतकों ट्रिम।
- दिल के शीर्ष में बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से 15 गेज छिड़काव सुई गुजरती हैं।
- अंत में, एक दुकान बनाने के लिए जिगर पालियों में से एक में कटौती करने के लिए कैंची का उपयोग करें।
नोट: यदि कोई वैकल्पिक आउटलेट सही आलिंद के लिए एक चीरा बनाने के लिए परितारिका कैंची का उपयोग करके बनाया जा सकता है। - एक पंप 2.5 मिलीग्राम / मिनट की दर से संचालन के साथ फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के 25 से 50 मिलीलीटर के साथ पशु छिड़कना। जिगर रक्त के रूप में चूनी पीबीएस के साथ बदल दिया है चाहिए।
- लगभग पांच मिनट के बाद, एक बार जिगर से तरल पदार्थ पूरी तरह से स्पष्ट है, छिड़काव बंद करो।
- immunostaining या नियमित रूप से धुंधला की योजना बनाई है, तो paraformaldehyde की 50 मिलीलीटर के साथ पशु छिड़कना(पीएफए, पीबीएस में 4%) 15 मिनट के लिए।
नोट: सावधानी, पीएफए धुएं विषाक्त कर रहे हैं। पीएफए के साथ पशु का छिड़काव एक हवादार धूआं हुड में बाहर किया जाना चाहिए।
3. मस्तिष्क के अलगाव और विलिस के सर्किल
- मस्तिष्क का अलगाव
- शल्य कैंची की एक जोड़ी के साथ सिर निकालें।
- आईरिस कैंची के साथ एक midline चीरा, नाक को गर्दन से त्वचा के साथ।
- त्वचा खोपड़ी बेनकाब और परितारिका कैंची के साथ किसी भी अवशिष्ट मांसपेशियों और वसा ऊतकों को हटाने के लिए बंद ट्रिम।
- एक तरफ रंध्र मैग्नम में परितारिका कैंची के तेज अंत प्लेस और ध्यान बाहरी कर्णद्वार (भी कान नहर के रूप में जाना जाता है) के लिए खोपड़ी के भीतरी सतह के साथ उन्हें स्लाइड।
- चीरा contralateral पक्ष पर 3.1.4 में वर्णित प्रतिलिपि और एक midline बाण सिवनी की शुरुआत करने के लिए अंतर-पार्श्विका हड्डी की भीतरी सतह के साथ कटौती करें।
- आईरिस संयंत्रललाट हड्डी में कैंची, आंखों के बीच सही, बाण के सिवनी में और फिर उन्हें खुले दो में खोपड़ी विभाजित करने के लिए।
- मस्तिष्क लिफ्ट से बाहर, घ्राण बल्ब हथियाने और आइरिस कैंची का उपयोग कर अपने उदर सतह पर तंत्रिका कनेक्शन काट दिया।
- मस्तिष्क निकालें और गाय अलगाव के लिए ठंडा पीबीएस युक्त एक 60 मिमी पेट्री डिश में जगह है। पूरी तरह से पीबीएस में मस्तिष्क विसर्जित कर दिया। मस्तिष्क 4% पीएफए के साथ तय किया गया था (बाद सेक्शनिंग और immunostaining या नियमित रूप से धुंधला के लिए), यह 4% पीएफए के एक स्नान में 4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए रख सकते हैं।
- विलिस के चक्र का अलगाव
नोट: एक विदारक माइक्रोस्कोप गाय अलगाव के लिए आवश्यक है। मस्तिष्क पूरी प्रक्रिया के दौरान 4 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाना चाहिए।- गाय कल्पना करने के लिए उल्टा (यानी, अपने पृष्ठीय सतह पर) मस्तिष्क रखो।
- एक छोटे संदंश का प्रयोग करें घ्राण पालियों के आधार पर पूर्वकाल मस्तिष्क धमनियों (एसीए) को हड़पने के लिए (
- उठा और छाल से गाय के गठन के प्रमुख धमनियों को दूर करने के संदंश के तेज सिरों का प्रयोग करें।
- , मस्तिष्क से उन्हें काट करने के लिए संदंश के साथ मध्य मस्तिष्क की धमनियों (एमसीए) द्वारा मनोरंजक पीछे से संवाद स्थापित करने की धमनियों (पीसीए) के शुरू होने से ऊपर उठा। पूर्वकाल धमनियों (एसीए और एमसीए) ऊपर उठाओ और उन्हें एक पूर्वकाल पृष्ठीय दिशा में ऑप्टिक chiasm पर धीरे से खींच। गाय के विघटन को रोकने के लिए, अन्य धमनियों के साथ सौदा करने की प्रक्रिया में व्यवधान डाला।
- दोहराएँ 3.2.2 और बेहतर और पीछे अनुमस्तिष्कीय धमनियों (एससीए) के लिए 3.2.3 कदम / (पीसीए) (सी, चित्रा 1) और आधारी धमनी (बीए) (घ, चित्रा 1) के लिए, उन्हें एक dorsal- में खींच पूर्वकाल दिशा। प्रक्रिया में वर्णित मैं के अंत में बंदn 3.2.4।
- संदंश के साथ धीरे खींच कर पूरे गाय निकालें। ठंडा पीबीएस के साथ भरा एक 60 मिमी पेट्री डिश में गाय की जगह और दो संदंश के साथ किसी भी शेष जुड़ी मस्तिष्क के ऊतकों को हटाने, छोटे पिन के साथ जगह में गाय पकड़े।
- या प्रोटीन निकासी - आरएनए शुद्धि के लिए बाद के प्रसंस्करण (लगभग 500 एनजी शाही सेना निष्कर्षण पैदावार शाही सेना की बड़ी मात्रा में) के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर काटा गाय रखें।
नोट: गाय, 24 घंटे के लिए रखा जा सकता है पूर्व vivo अंग स्नान पृथक माउस घ्राण धमनी लिए प्रणाली विकसित की आदत डाल द्वारा 7।
चित्रा 1: माउस ब्रेन गाय पर प्रकाश डालते गाय दो आंतरिक मन्या धमनियों (एमसीए) है, जो दो पूर्वकाल मस्तिष्क धमनियों (एसीए) से प्राप्त कर रहे हैं से बनाई है की एक उदर दृश्य के योजनाबद्ध आरेख;। आधारीधमनी (बीए) पीछे (पीसीए) और बेहतर (एससीए) में शाखाओं मस्तिष्क धमनियों, और दो कशेरुका धमनियों (VA)।
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Representative Results
पीबीएस perfused माउस को मार डाला है और प्रोटोकॉल की धारा 3.2 में वर्णित के रूप में गाय अलग है। जब विच्छेदन सही ढंग से किया जाता है, गाय एक टुकड़ा में बाहर आ जाना चाहिए और वाहिका में अवशिष्ट रक्त के अभाव के कारण थोड़ा पारदर्शी होना चाहिए।
चित्रा 2: अलगाव के बाद माउस गाय। (ए) एक 10 सेमी पेट्री डिश में गाय का अवलोकन। (बी) गाय की विभिन्न शाखाओं का विवरण। एमसीए मध्य मस्तिष्क धमनियों के लिए, पूर्वकाल मस्तिष्क धमनियों, आधारी धमनी के लिए बीए के लिए एसीए, पीछे मस्तिष्क धमनियों और बेहतर मस्तिष्क धमनियों के लिए एससीए के लिए पीसीए। यहां यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।
mRNA का स्तर एक संदर्भ जीन प्रतिलेख को सामान्य बनाने के रिश्तेदार (यहाँ, GAPDH के) के साथ RT-qPCR द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है। ठेठ परिणाम चित्रा 3 ए और बी में दिखाए जाते हैं।
चित्रा 3:। विलिस के माउस सर्किल में neuronal और सिकुड़ा जीन और मस्तिष्क की अभिव्यक्ति RT-qPCR परिणाम एक संदर्भ जीन (GAPDH) के लिए उन लोगों के खिलाफ सामान्यीकृत थे। वे ± 6 से 12 स्वतंत्र प्रयोगों के एसडी मतलब के रूप में व्यक्त कर रहे हैं; मस्तिष्क के साथ गाय की तुलना: एनएस, महत्वपूर्ण नहीं, *, पी <0.05, **, पी <0.005, और ***, पी <0.001 (ए) सिकुड़ा जीनों की अभिव्यक्ति:। एसएमए (चिकनी पेशी actin), smoothelin, एसएम-एमएचसी (चिकनी मांसपेशियों-मायोसिन भारी श्रृंखला 11) और ई selectin (बी) न्यूरोनल जीनों की अभिव्यक्ति:। मॉग (माइलिन oligodendrocyte ग्लाइकोप्रोटीन) और MAP2 (microtubule जुड़े प्रोटीन 2)।
गाय की कमी मस्तिष्क में endothelial मार्कर ई selectin की अभिव्यक्ति पैटर्न बहुत गाय के नमूने के लिए प्राप्त की, संभवतः एक मस्तिष्क केशिका नेटवर्क के अस्तित्व को दर्शाती है कि के समान है। तालिका 1:। विलिस के माउस सर्किल में neuronal और सिकुड़ा जीनों की अभिव्यक्ति के लिए मतलब बिंदु को पार और ब्रेन गणना प्रतिदीप्ति की एक निरंतर स्तर पर पार अंक (सीपी) द्वारा निर्धारित सटीक चक्र की तुलना के आधार पर कर रहे हैं। बिंदु को पार प्रवर्धन की अवस्था का अधिकतम दूसरा व्युत्पन्न करने के लिए इसी चक्र संख्या है। उच्चतर मूल्यों सी.पी. अभिव्यक्ति के निचले स्तर के साथ जुड़े रहे हैं। किसी जीन के लिए, अभिव्यक्ति undetectable हो सकता है अगर सी.पी. 35. (ए) संदर्भ जीन के सी.पी. से अधिक माना जाता है: GAPDH; और सिकुड़ा जीन की: SMA, smoothelin, SM-एमएचसी और ई selectin (बी) के संदर्भ जीन की CP:। GAPDH; और neuronal जीन: मॉग और MAP2। ए। मतलब सी.पी. GAPDH SMA Smoothelin SM-एमएचसी ई-Sel मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन गाय 20.86 0.93 12 22.02 0.67 12 25.29 1.89 12 23.37 0.80 12 30.56 1.66 12 दिमाग 18.71 0.72 6 33.91 2.06 6 31.08 3.17 6 26.05 0.73 6 28.45 0.63 6 बी <टीडी> मतलब सी.पी. GAPDH मॉग MAP2 मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन मतलब एसडी एन गाय 21.04 0.41 6 32.13 1.63 6 30.21 0.85 6 दिमाग 19.09 0.49 6 26.43 0.88 6 23.30 0.99 6
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Discussion
हम यहाँ विलिस के चक्र के अलगाव के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य प्रोटोकॉल का वर्णन। सबसे आम cerebrovascular गाय को शामिल विकारों CAA-जुड़े vasculopathies, intracranial atherosclerosis और intracranial धमनीविस्फार, जो सभी के धमनी वाहिकाओं की दीवारों को प्रभावित कर रहे हैं। जोखिम वाले कारकों को अच्छी तरह से जाना जाता है, लेकिन इन मस्तिष्क विकारों की आणविक रोगजनन समझ खराब रहता है और उनकी घटना की भविष्यवाणी के लिए विशिष्ट जैविक मार्कर कमी कर रहे हैं। वहाँ ट्रांसजेनिक चूहों से गाय को अलग-थलग आणविक परिवर्तन के साथ स्थूल टिप्पणियों से जोड़ने के लिए के लिए तरीकों में काफी रुचि है। उदाहरण के लिए, एक माउस मॉडल, जिसमें एक विशेष जीन (के रूप में Hosaka एट अल। 8 से वर्णित) बाहर खटखटाया है में लगातार aneurysms उत्प्रेरण और गाय का विश्लेषण करके, यह संभव प्रोटीन इस जीन द्वारा इनकोडिंग को लक्षित है कि क्या उपचार निर्धारित करने के लिए किया जाना चाहिए सकता है intracranial aneurysms और / या subarachnoid हेमोरेज रोका जा सके। Obviouधूर्त, इस विधि को भी ई के विभिन्न ट्रांसजेनिक माउस मॉडल में CAA-जुड़े vasculopathies की प्रगति पर एक विशेष दवा के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
यह माउस धमनियों को अलग करने से पूरे माउस microvessels शुद्ध करने के लिए आसान है, लेकिन इस तरह के नमूने फिर भी चूहों की तुलना में चूहों में अधिक कठिन है। दरअसल, चूहे गाय बहुत stiffer तानिका में अंतर्निहित है, यह एक ही बार में पूरे ढांचे को अलग करना संभव बना रही है। चूहों में जहाजों के छोटे आकार की समस्या के अलावा, इस प्रक्रिया भी मस्तिष्क के हटाने से पहले पीबीएस के साथ उनकी छिड़काव निम्नलिखित वाहिकाओं की पारदर्शिता के कारण मुश्किल है। इसलिए हम अर्क के बिना अभ्यास, संज्ञाहरण के बाद 3 कदम से शुरू यह आसान रक्त वाहिकाओं भेद करने के लिए बनाने के लिए सलाह देते हैं। अंत में, के रूप में माउस मस्तिष्क वाहिकाओं बहुत ठीक कर रहे हैं और आसानी से तोड़, विच्छेदन बाहर बहुत सावधानी से भागने के बिना, किया जाना चाहिए, यह सुनिश्चित करने के लिए कि पूरे ढांचेएक टुकड़ा में अलग है, पहली एसीए हथियाने के द्वारा। गाय तैयारी की पवित्रता न्यूरोनल और पोत जीनों की अभिव्यक्ति के स्तर की तुलना द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है। 10 जीन भाव - अभ्यास के साथ, एक भी गाय केवल 5 के अध्ययन के लिए पर्याप्त आरएनए प्रदान करता है। बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग के लिए, कई माउस गायों जमा किया जाना चाहिए।
Gauthier एट अल। 9 microvessels के छोटे टुकड़े को अलग-थलग कि चिकनी मांसपेशियों या endothelial कोशिकाओं है कि संस्कृति जब में बनाए रखा जा सकता पैदावार (collagenase / dispase के उपयोग के लिए उन्हें फंसाने के लिए मस्तिष्क की और कांच के मोती के टुकड़े को पचाने के लिए के आधार पर) के लिए एक विधि का वर्णन किया एक उचित माध्यम में रखा। हमारे विधि का लाभ यह है कि बड़े जहाजों को अलग, पोत संरचना में फेरबदल के बिना है। गाय की विशेष शाखाओं के विच्छेदन भी एक विशेष शाखा के जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल और cerebrovascular diseas के लिए संभव संवेदनशीलता के बीच संबंध का निर्धारण करने के लिए ब्याज की हो सकती है,ऐसे intracranial धमनीविस्फार के रूप में es,। इस तरह के दृष्टिकोण क्यों कुछ एसीए शारीरिक और आनुवंशिक रूपों एसीए aneurysms के एक उच्च व्यापकता के साथ सहसंबद्ध होते हैं के रूप में एक स्पष्टीकरण प्रदान कर सकता है। इस विच्छेदन, अन्य शाखाओं से अलग कर देना गाय अलगाव की प्रक्रिया के शुरू में, दबाव प्रत्येक विशिष्ट शाखा के आधार पर संदंश के साथ लगाए गए किए जाने की आवश्यकता है।
इस प्रकार, यह संभव गाय 10 से कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए या जीन अभिव्यक्ति 11 और प्रोटीन के उत्पादन में 12 या posttranslational प्रोटीन संशोधन के लिए स्क्रीन करने के लिए बनाने के अलावा, इस विधि पूर्व vivo अध्ययन, के लिए बस अंग स्नान के लिए प्रणाली विकसित की आदत डाल द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता पृथक माउस घ्राण धमनियों। 7 एंटीबायोटिक दवाओं युक्त मध्यम संस्कृति में पूरे गाय के ऊष्मायन के बाद, secretome इस विशिष्ट संरचना द्वारा जारी प्राप्त की और विश्लेषण किया जा सकता है। सीएए के माउस मॉडल में इस secretome के विश्लेषण से यह PO करना होगाssible, उदाहरण के लिए, CAA से संबंधित इन मस्तिष्क धमनियों की सूजन की स्थिति का निर्धारण करने के लिए। जिसके परिणामस्वरूप वातानुकूलित माध्यम भी प्रत्येक पोत दीवार सेल प्रकार phenotype पर secretome के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। रोग गाय की तैयारी भी, या सीए 2 सांद्रता, प्रतिदीप्ति प्रतिध्वनि ऊर्जा हस्तांतरण (झल्लाहट) के साथ detectable आधारित biosensors ऐसे चक्रीय ग्वानोसिन मोनोफास्फेट (cGMP), चक्रीय adenosine monophosphate (शिविर) के रूप में जैव रासायनिक संकेतों में संभव मतभेद की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। वायरस दिया biosensors मस्तिष्क टुकड़ा एक संरक्षित आकृति विज्ञान के साथ प्रयोगात्मक सुलभ परिपक्व रहने वाले न्यूरॉन्स युक्त तैयारी पर इस्तेमाल किया गया है, पिरामिड cortical न्यूरॉन्स और striatal मध्यम काँटेदार न्यूरॉन्स के बीच डी 1 जवाब में गहरा मतभेद का पता लगाने के लिए अग्रणी। 13
ट्रांसजेनिक चूहों में cerebrovascular रोग की मॉडलिंग झल्लाहट आधारित दूसरा दूत सेंसर प्रोटीन 14 व्यक्तपृथक गाय में जैव रासायनिक संकेतों के इमेजिंग के लिए आगे जैव रसायन, pathophysiology, और इन रोगों के pharmacotherapy में और अधिक जानकारी प्रदान करना चाहिए।
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Acknowledgments
इस काम पेरिस छठी विश्वविद्यालय और एक पियरे Fabre अभिनव अनुदान द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors - Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump - MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
References
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