종<em> 생체</em>은 Cerebrovasculature의 이미징 : CNS 질환에 관련성
Summary
이 원고는 세로 두 광자 현미경을 사용하여 생체 내에서 아밀로이드 플라크 축적 동안 cerebrovasculature의 리모델링을 추적하는 절차를 설명합니다. 얇아진 두개골 제제는 알츠하이머 질환의 마우스 모델에서 뇌 손상의 진행을 평가하기 위해, 형광 염료의 시각화를 가능하게한다.
Abstract
뇌 혈관의 리모델링은 뇌 병변의 일반적인 특성이다. 생체 내 이미징 기술은 뇌 가소성 손상이 초과 발생 및 신경 세포의 활동이나 혈액의 흐름과 관련하여 감지 할 기본입니다. 생체 이광자 현미경 살아있는 뇌 큰 휴대 장치의 구조 및 기능 가소성 연구를 허용한다. 특히, 박형화 두개골 윈도우 준비 중요한 뇌 염증을 유발하지 않고 관심 (ROI)의 피질 영역의 가시화를 허용한다. 피질 ROI 반복적 촬상 세션은 다수의 CNS 질환의 진행 시간 경과 질병 특징의 특성을 제공 가능하다. 두뇌의 250 μm의 내 pial 구조에 접근이 기술은 유전자 세포 마커 및 / 또는 중요한 염료로 인코딩 된 형광 프로브의 검출에 의존한다. 후자 (즉, 형광 덱스 트란)을 루민 매핑하는 데 사용되는뇌 혈관 구조의 알 함. 본원에 기술 된 프로토콜에 밀접한 알츠하이머 병 (AD)의 진행을 평가하기 아밀로이드 침착 생체 마커, 메 톡시 O4의 사용이다. 또한 혈관 변화 아밀로이드 침착을 추적하기 위해 사용 된 후 수집 화상 처리를 설명한다. AD의 모델에 초점을 맞추고 있지만, 현재의 기술 된 프로토콜은 뇌 병리 변화가 발생하는 기타 CNS 장애와 관련이있다.
Introduction
뇌 혈관 해부학 기능적 신경 세포에 결합 된 멀티 – 셀 구조이다. 선박의 동적 리모델링 뇌 발달에 걸쳐 및 중추 신경계 (CNS)의 1,2- 병상의 진행 중에 발생한다. 널리 뇌 손상, 알츠하이머 병 (AD), 간질 등 여러 CNS 질환, 외상성 뇌 손상의 특징은 3,4- 뇌염 것을 허용한다. 발병에서 만성 단계로, CNS 질환을 모델링 할 때 따라서, 생체 내에서 뇌 혈관의 변화를 추적하는 것이 중요하게된다. 뇌 혈관 변형이 자주 신경 손상이나 소성 병용 발생으로, 신경 혈관의 영상은 중추 신경계 질환의 병태 생리를 해독하는 키 입력 포인트를 나타냅니다.
이 프로토콜의 마우스 모델에서 cerebrovasculature의 개조를 추적 길이 이광자 기반 절차를 설명AD 인해 아밀로이드 플라크 침착 5-7에 크고 작은 구경 혈관에서 뇌 혈관의 결함에 의해 표시 진보적 인 병리. 이 과정은 질환의 과정을 통해 신경 혈관 리모델링에 대한 아밀로이드 침착 및 위치 추적과 성장의 시각화를 허용한다. 중요한 형광 염료는 형질 전환 AD 마우스 (8)의 cerebrovasculature 및 아밀로이드 플라크의 시각화를위한 각 영상 세션 전에 주입된다. 얇아진 두개골 두개 창을 통해 반복적 ROI 영상 세션은 비 침습적 인 선택의 방법은 살아있는 쥐의 뇌에서 신경 혈관 리모델링 2,5,9,10을 평가.
아래의 절차는 수술 프로토콜, 이미지 수집 및 처리에 대해 간략하게 설명합니다. 대부분 큰 leptomeningeal 및 관통 동맥에서 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA)의 초기 진행이 특징입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
생체 이광자 현미경 오픈 두개골 기술은 큰 이미지 필드 13,14 무제한 촬상 세션의 이점을 제공한다. 그러나이 기술은 또한 관심 (14)의 영역에 염증을 생산, 종종 호환되지 않거나 영향을 미치는 신경 혈관 읽기 아웃 15. 반대로, 얇아진 두개골 두개의 기술은 신뢰성 뇌 혈관 구조 촬상 플라크 축적 10,14있게 신경 염증을 초래하지 않는다. 이 기술에 의해 제공 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 리그 프랑세즈 CONTRE 난 épilepsie (MA-L에), (FJ에) 연구소 국립 드 라 상테 등 드 라 공들인 MEDICALE 부여 AVENIR R12087FS은 몽펠리에 대학에서 부여 (FJ에) 및 허가를 인정하고 싶습니다 연맹에서 (NM에) 라 공들인 쉬르 르 Cerveau을 붓는다. 우리는 몽펠리에의 생체 내 이미징 코어 플랫폼 기능의 IPAM에서 Chrystel Lafont의 기술 지원을 인정합니다. 우리는 또한 원고를 교정하기위한 메리 Vernov (웨일 코넬 의과 대학)을 주셔서 감사합니다.
Materials
| methoxy-X04 | tocris | 4920 | use 10 mg/Kg |
| FITC-Dextran 70Kda | sigma | 46945 | use 100 mg/Kg |
| gelfoam/Bloxang | Bausch and Lomb | ||
| micorsurgical blade | surgistar | 6900 | must be sharp and not dented |
| povidone-iodine | betadine | antisceptic solution | |
| binocular stereomicroscope | olympus | SX10 | optimal image contrast is crucial for this procedure |
| 2-photon microscope | zeiss | Zeiss LSM 710mp | |
| fine scissors-toughcut | Fine science tools | 14058-09 | this scissors are optimized for cutting skin and soft tissue |
References
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