동적 광산란 현미경을 사용하여 진한 용액의 입도 분포를 직접 측정하기위한 프로토콜이 제시된다.
A protocol for measuring polydispersity of concentrated polymer solutions using dynamic light scattering is described. Dynamic light scattering is a technique used to measure the size distribution of polymer solutions or colloidal particles. Although this technique is widely used for the assessment of polymer solutions, it is difficult to measure the particle size in concentrated solutions due to the multiple scattering effect or strong light absorption. Therefore, the concentrated solutions should be diluted before measurement. Implementation of the confocal optical component in a dynamic light scattering microscope1 helps to overcome this barrier. Using such a microscopic system, both transparent and turbid systems can be analyzed under the same experimental setup without a dilution. As a representative example, a size distribution measurement of a temperature-responsive polymer solution was performed. The sizes of the polymer chains in an aqueous solution were several tens of nanometers at a temperature below the lower critical solution temperature (LCST). In contrast, the sizes increased to more than 1.0 µm when above the LCST. This result is consistent with the observation that the solution turned turbid above the LCST.
Particle size is one of the most fundamental properties of colloidal and polymer solutions. Numerous techniques are used to measure the particle size. Particle sizes of 1.0 µm or larger can be measured directly using an optical microscope. For smaller particles, alternative techniques, such as laser diffraction, electron microscopy, or atomic force microscopy, are used2,3. Dynamic light scattering is a commonly-used technique for the measurement of particle size distributions in solutions4. The results obtained using this technique are not derived from images of the particles but from the characteristic time of the fluctuations in scattered light intensity. These fluctuations originate from Brownian motion, which is characterized by a diffusion constant. The size distribution is obtained from the distribution of diffusion constants using the Einstein-Stokes equation. Due to its simplicity, dynamic light scattering is widely used for the routine assessment of solutions, such as paints and food colloids.
Pretreatment is required for most of the techniques used for the particle size measurement of solution samples. In the case of electron microscopy and atomic force microscopy, the sample must be analyzed under vacuum conditions. Therefore, it is difficult to observe the samples in their native forms. Furthermore, for laser diffraction and dynamic light scattering, only diluted samples that are free from multiple scattering and light absorption can be measured. To overcome this difficulty, several new techniques have been proposed for the measurement of dynamic light scattering from undiluted, concentrated solutions, such as cross-correlation spectroscopy5,6, low-coherence dynamic light scattering7,8, diffusing-wave spectroscopy9,10, and differential dynamic microscopy11,12.
We have developed a new apparatus called a dynamic light scattering microscope1. This apparatus enables us to measure turbid samples without dilution by means of a confocal optical system in which multiple scattering is eliminated using a pinhole. However, the measurement procedure and data analysis are slightly more complicated than those of commercially-available instruments. This video explains the measurement procedure and data analysis in detail using the analysis of the temperature-responsive polymer, poly(N-isopropylacrylamide), as an example.
시간 상관 함수의 초기 크기는 주로도 2에 도시 된 바와 같이, 중심점에 따라 (a). 이 겉보기 용액 (계면에서 박막 제외) 균질하다는 사실을 8 모순. 초기 진폭이 변화는 반사 광량의 변화에 기인한다. 일부 헤테로 다인 이론 (16)는 초기 진폭 A, 산란광 강도, I S, 반사광 강도, I는 R, 다음 식을 만족하는 것으로 예상 한
이 방정식은 내가 r에 큰이되고 있음을 보여주고, 작은 A는된다. 따라서, 인터페이스에 가까운 초점 위치를 설정함으로써 감소된다. 겉보기 확산 상수 D A는 캘리포니아N 단 분산 용액의 경우에는 시간 상관 함수 피팅에 의해 획득 될 :
어디에 . 여기서, n은 용매 (물, 1.33)의 굴절률이며, θ는 산란 각 (180)은이고, λ는 빛 (514.5 ㎚)의 파장이다. 우리는 후방 산란 기하학을 적용하기 때문에, Q의 값은 고정된다. 그러나,이 점은 상이한 파장의 광을 이용하여 해결된다. 연속파 레이저 소스의 종류는 DLS 현미경을 구성하는 데 사용할 수 있습니다. 작은 부피 조사 덕분에, 코 히어 런스 팩터 (17)보다 0.99로 추정 무시할 수있다. 다 분산 용액의 경우, D (A)의 분포 함수는 상기 역 라플라스 변환함으로써 얻어진다. 부분 헤테로 다인 일eory 또한 D, A는 실제의 확산 정수 D와 동일한 아니라는 것을 예측한다. 이러한 두 확산 상수는 다음 방정식을 만족
확산 상수 D는 아인슈타인 스톡스 식 4를 이용하여 유체 역학적 반경 R에서 H로 변환된다. A = 1이 관계의 A = D D이되면. 이 경우에, 데이터 변환 처리는 일반적인 동적 광산란에 대한 것과 동일하다. 도 2 (b)에 도시 된 적색 라인이 경우에 해당한다. 반대로, 이러한 관계는 한계에서 D의 A = 0.5 D된다 → 0 A가 작은 (실제적으로 0.2 미만)을 때 같이 따라서, 크기는 실제 크기보다 두 배 큰 것으로 추정된다 도 2 (b)의 청색 라인 </strong>. 우리는 상당히 작다는 것을 알고있는 경우도 2 (c)에 나타낸 바와 같이, 횡축은, 이동 될 수있다. 원칙적으로, 우리는 어떤 값을 D로 D A를 변환 할 수 있습니다. 간단한 근사화 D A를 0.5 ~ D가 성립 때문에 그러나 실제로는 0.2 초기 진폭을 작게 설정하는 것이 좋다.
동적 광 산란 현미경 기술의 두드러진 특징으로는 PNIPA 용액을 사용하여 입증되었다. 아래 및 LCST 상기 PNIPA의 형태 광범위 15,18 산란 소각 중성자를 이용하여 연구되었다. 반면, 동적 광산란 때문에 탁도 (19)의 LCST 상기 PNIPA 분석에 활용되지 않았다. 도 3에 도시 된 바와 같이,이 문제는, 동적 광 산란 현미경에 의해 해결된다 (a) 및 (b). 이러한 집합체의 크기는 여러 가지입니다 &# 181; m, 소각 X 선 / 중성자 산란 또는 종래의 광 산란 기법 중 하나에 의해 얻어 질 수있다. 이 시스템을 사용하여 시간 – 분해 측정 온도 변화시 응집 공정에 관한 정보를 제공한다.
동적 광 산란 현미경의 단점은도 3에 도시되어있다. LCST 아래의 결과를, 시간 상관 함수 강하게 먼지 존재하는 미량 (도 3의 검은 선)에 의해 영향을 받는다. 예를 들어, 시간 상관 함수도 1.0의 순서에 상관 회 완전히 소멸하지 않는다. 이 장치는 (약 1.0 μm의) 조사 볼륨 통상 동적 광산란 장치 (약 100 μm의)과 그 조사보다 훨씬 작기 때문이다. 산란광의 강도가 약한 경우에는, 그러한 신호들에 의해 야기 된 것과 같은 잡음에 의해 가려솔루션에 먼지 쇼핑몰 양. 크기의 일반적인 순서를 의미하지만 따라서,도 3의 (b)에 도시 된 세 개의 피크는 정량적 중요성을 가질 수 없다. 그런 약한 산란이 종래의 동적 광산란 장치에 의해 측정 할 수있다.
우리는 동적 광산란 현미경은 우리가 같은 설정으로 투명하고 혼탁 모두 샘플을 측정 할 수 있음을 증명하고있다. 샘플에서의 광로 길이가 짧기 때문에,이 기술은 탄소 나노 튜브 현탁액 (20)와 같은 강한 빛 흡수의 샘플에 적용될 수있다. 또한, 그 때문에 높은 공간 해상도로,이 기술은 생물 세포에 적용 할 수있다. 생물에의 응용의 경우,이 방법은 또한 형광 및 라만 이미징과 같은 다른 이미징 기술과 결합 될 수있다. 따라서, 우리는 동적 광산란 현미경 연구 분야의 넓은 범위에 대한 강력한 도구 믿는다.
The authors have nothing to disclose.
This work has been financially supported by Grants-in-Aid for Scientific Research from the Ministry of Education, Culture, Sports, Science, and Technology (No. 25248027 to M.S.).
N-isopropylacrylamide, 98% | Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. | I0401 | |
toluene, 99% | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 201-01876 | |
petroleum ether, distillation temperature 30 ~ 60 °C | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | 169-22565 | |
N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine, 99% | Sigma | T9281 | |
ammonium persulfate, 98% | Sigma | 248614 | |
polystyrene latex suspension, 1 wt% | Duke Scientific Corporation | 3500A | |
argon | Koike Sanso Kogyo Co., Ltd. | purity > 99.999 vol.% | |
cavity slide | Matsunami Glass Ind.,Ltd. | 83-0336 | |
inverted microscope | Nikon Instech Co., Ltd. | ECLIPSE Ti-U | |
Thermo Plate | Tokai Hit CO.,Ltd | TP-108R-C | |
Ar-Kr ion laser | Spectra-Physics | Stabilite 2018 | |
avalanche photodiode | ALV-GmbH | ALV-High Q.E. Avalanche Photo Diode | |
correlator | ALV-GmbH | ALV-5000/EPP |