ADSC листов Трансплантация для предотвращения стриктуры после продолжительного пищеводного эндоскопическую подслизистую Вскрытие

Summary

Это исследование сообщает об успешном метод эндоскопического жировой ткани стромальные клетки (ADSC) -sheet трансплантации для профилактики пищеводного стриктуры после продолжительного эндоскопическую подслизистую диссекции (ОУР) в качестве модели свиней.

Abstract

В прошлые годы, конструкция сотового листа стимулировало широкий интерес к регенеративной медицине, особенно для реконструктивных процедур по хирургии. Развитие разнообразных технологий, сочетающих полученных из жировой ткани стромальных клеток (ADSCs) с различными биоматериалов привело к строительству многочисленных видов тканевой инженерии заменителей, таких как кости, хряща и жировой ткани от грызуна, свиньи или человека ADSCs. Расширенная пищеводного эндоскопической подслизистой диссекции (ОУР) отвечает за формирование стриктура пищевода. профилактика Стриктура остается сложной, без каких-либо эффективных процедур. Предыдущие исследования сообщили об эффективности трансплантации клеток слизистой оболочки листов в собачьей модели и в организме человека. ADSCs приписываются противовоспалительные свойства, местные иммунные эффекты Модулируемая индукции неоваскуляризации и дифференциации способностей в мезенхимальных и не-мезенхимальных родословных. Это оригинальное исследование описывает эндоскопическую траnsplantation из тканевой инженерии конструкции ADSC, чтобы предотвратить стриктура пищевода в свином модели. ADSC конструкция состояла из двух аллогенных ADSC листов слоистых друг на друга на опорной бумаги мембраны. В ADSCs метили с PKH67 флуорофора, чтобы позволить зонд на основе конфокальной лазерной эндомикроскопии (PCle) мониторинг. В день трансплантации, проводили в 5-ти см и геми-окружная ОУР как известно, индуцирует стриктура пищевода. Животные были немедленно эндоскопически пересаживают с 4 ADSC конструкций. Полная адгезия ADSC конструктов было получено через 10 мин нежного применения. Животных забивали на 28-й день все животные были успешно пересаженной. Трансплантация была подтверждена на 3-й день с положительной оценкой PCle. По сравнению с трансплантированных животных, у контрольных животных развились тяжелые стриктуры, с большим развитием фиброзной ткани, более частой алиментарной неприятности, и снижение веса. В нашей модели, трансплантация allogeniс ADSCs, организованные в виде листов двойных клеток, после продолжительного ОУР был успешным, и в значительной степени связано с более низкой скоростью стриктуры пищевода.

Introduction

Управление поверхностных опухолей пищевода изменилась с развитием новых эндоскопических методов. В настоящее время эндоскопическая резекция является первой линии терапии. В самом деле, это связано с более низкими показателями заболеваемости и смертности , чем хирургии с онкологическими равными результатами ^{1, 2, 3.} Эндоскопическая резекция слизистой оболочки (EMR) и эндоскопическая подслизистая резекция (ОУР) являются наиболее широко используемые методы. В случае длительного поверхностных опухолей, является предпочтительным ESD. По сравнению с ЭМИ, ESD позволяет единым блоком резекции, независимо от размера и формы поражения ^{4, 5, 6.} Основная задержка осложнением ОУР является формирование стриктура пищевода, которое обычно происходит от одной до двух недель после резекции. Последние опубликованные исследования показали, что образование стриктур коррелирует сразмер резекции. Японский эндоскопическое общество рекомендует избегать ESD размером более ¾ окружности пищевода, потому что они связаны с развитием стриктуры более чем в 90% случаев и несут ответственность за серьезных проблем кормления и серьезным ухудшением качества жизни.

Предотвращение стриктура пищевода остается сложной. Механизмы, участвующие в формировании стриктуры лишь частично известны. Стриктуры образований похоже, является результатом объединения двух различных механизмов: (1) про-воспалительный клеточный набора и (2) чрезмерное развитие фиброза ^7. Было предложено несколько профилактических процедур. Тем не менее, результаты оказались неудовлетворительными, с мало пользы и серьезных побочных эффектов ^{8, 9.} В последнее время японская команда, Охки и др. , Предложил пересадить сотовый лист однослойный аутологичных клеток слизистой оболочки полости рта в esophageal шрам. Трансплантация была проведена сразу после ОУР ^{10, 11.} Они продемонстрировали эффективность этого инновационного подхода, во-первых, в собачьей модели, а затем у больных.

Полученных из жировой ткани стромальные клетки (ADSCs) перспективны в регенеративной медицине. Их применение в нескольких областях показал интересные результаты, особенно в процессе заживления ран. ADSC терапия имеет ряд преимуществ, потому что клетки легко изолированы и связаны с противовоспалительными свойствами, локальные эффекты иммуномодуляторов, индукция неоваскуляризации и дифференцировку возможностями в мезенхимальных и не-мезенхимальных линий ^{12, 13, 14.}

В предыдущем исследовании, наша команда продемонстрировала эффективность двойной трансплантации эндоскопической ADSC листов для стриктура пищевода предention после продолжительного ОУР в свином модели ^15. В этой статье представлены отчеты о строительстве ADSC листов и эндоскопической техники трансплантации.

Protocol

Все животные были обработаны в соответствии с Комитетом по этике исследований животных (Руководящие принципы Министерства сельского хозяйства на французском языке). Протокол получил одобрение местным комитетом по этике, уполномоченного на экспериментам животных на Парижской Декарта университ…

Representative Results

Культура ADSCs и процедуры для получения ADSC листа показан на рисунке 1. На рисунке 2 показано построение трансплантата, состоящий из двух листов ADSC слоистых друг на друга на своей мембране опоры для бумаги. ADSCs ранее были помечены флуорофора PKH67 , чтобы …

Discussion

В этой модели свиньи, трансплантация ADSC-лист был технически успешным, и естественных условиях оценка PCle в разрешенных для мониторинга приживления клеток. Клинические, эндоскопические, рентгенологические и гистологические оценки продемонстрировали эффективность эндоскопи?…

Materials

Transparent endoscopic cap Q180 compatible	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope	Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II	Olympus Optical Co
Injection needle 18 G	Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350	ERBE Technology
Indigo carmin 1%	Life
Endoscopic hybrid knife	Life
Minisonde Z pCLE green probe	Mauna Kea Technology		You must learn how tu use the probe. The manipulation could be difficult
Fetal bovine serum	Sigma Aldrich	12105C
Trypsin	Sigma Aldrich	T146
Alpha minimum essential medium	Thermo Fisher	22561-021
Phosphate-Buffered Salines	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 dye kit	Sigma Aldrich	Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish	Upcell Thermo Scientific	174900	Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 minutes before seeding cells
Esomeprazole 40 mg	Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/ mL	Lavoisier
Amoxicilline 1 g	Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/ mL	Fresenius
Hydrophobic paper	Carrefour