Vasodilatation isolierter Gefäße und die Isolierung der extrazellulären Matrix von Fest-Haut Mäuse

Dorothee Weihrauch; John G. Krolikowski; Deron W. Jones; Tahniyath Zaman; Omoshalewa Bamkole; Janine Struve; Paul S. Pagel; Nicole L. Lohr; Kirkwood A. Pritchard, Jr.

doi:10.3791/55036

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Methodenartikel

Vasodilatation isolierter Gefäße und die Isolierung der extrazellulären Matrix von Fest-Haut Mäuse

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DOI:

10.3791/55036

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24. März 2017

Dorothee Weihrauch¹ , John G. Krolikowski¹^,² , Deron W. Jones³ , Tahniyath Zaman³ , Omoshalewa Bamkole¹ , Janine Struve⁴ , Paul S. Pagel⁵ , Nicole L. Lohr⁶ , Kirkwood A. Pritchard, Jr.³

¹Department of Anesthesiology, Medical College of Wisconsin, ²Clement J. Zablocki Veterans Affairs Medical Center, ³Department of Surgery, Division of Pediatric Surgery, Children's Research Institute, ⁴Department of Orthopedic Surgery, Medical College of Wisconsin, ⁵Deptarment of Anesthesiology, Clement J Zblocki Veteran Affairs Medical Center, ⁶Department of Medicine, Division of Cardiology, Medical College of Wisconsin

In diesem Artikel

Zusammenfassung

Wir beschreiben die Isolierung der kardialen extrazellulären Matrix von C57Bl/6J-Kontrollmäusen, Enghautmäusen und Engerhautmäusen, die mit dem IRF5-Hemmpeptid behandelt wurden. Wir beschreiben auch die Vasodilatationsstudien an den isolierten Gefäßen von C57Bl/6J, Engehautmäusen und Engerhautmäusen, die mit dem IRF5-inhibitorischen Peptid behandelt wurden.

Zusammenfassung

Der Interferon-Regulationsfaktor 5 (IRF5) ist entscheidend für Zellen, um zu bestimmen, ob sie entzündungsfördernd oder entzündungshemmend reagieren. Die Fähigkeit von IRF5, Zellen von einem Signalweg auf einen anderen umzuschalten, ist als therapeutisches Ziel sehr attraktiv. Wir haben ein Köderpeptid IRF5D mit einer molekularen Modellierungssoftware für das Design kleiner Moleküle und Peptide entwickelt.

IRF5D hemmte IRF5, reduzierte Veränderungen in der extrazellulären Matrix und verbesserte die endotheliale Vasodilatation bei der Engerhautmaus (Tsk/+). Die K_d von IRF5D für rekombinantes IRF5 beträgt 3,72 ± 0,74 x ^10-6M, bestimmt durch Bindungsexperimente mit Biolayer-Interferometrie-Experimenten. Die Proliferation und Apoptose der Endothelzellen (EC) blieb bei steigenden Konzentrationen von IRF5D (0 bis 100 μg/ml, 24 h) unverändert. Tsk/+ Mäuse wurden mit IRF5D (1 mg/kg/d subkutan, 21 d) behandelt. Die IRF5- und ICAM-Expression war nach der IRF5D-Behandlung verringert. Die Endothelfunktion wurde durch Vasodilatation der Gesichtsarterien von Tsk/+-Mäusen, die mit IRF5D behandelt wurden, im Vergleich zu Tsk/+-Mäusen ohne IRF5D-Behandlung verbessert. Als Transkriptionsfaktor transportiert IRF5 vom Zytosol in den Zellkern. Die Translokation wurde immunhistochemisch an kardialen Myozyten untersucht, die auf den verschiedenen kardialen extrazellulären Matrizen kultiviert wurden. Die IRF5D-Behandlung der Tsk/+-Maus führte zu einer reduzierten Anzahl von IRF5-positiven Zellkernen im Vergleich zu den Tieren ohne IRF5D-Behandlung (50 μg/ml, 24 h). Diese Ergebnisse zeigen die wichtige Rolle, die IRF5 bei Entzündungen und Fibrose bei Tsk/+-Mäusen spielt.

Einleitung

Regulation von Zellwachstum und Zelltod-Immunantworten ist, um die Rolle des Transkriptionsfaktor-Familie von Interferon regulatorischer Faktoren zentral. IRF5 wird als entscheidend für die Regulation von Immunantworten zwischen Typ 1, eine entzündliche Reaktion fördern und Typ 2, eine Immunantwort Targeting Gewebereparatur hervorgehoben. IRF5 ist der Schlüssel in der Krebs - ¹ und Autoimmunität ^{^2,} ^{^3,} ^{^4,} ^5.

Die straffe Haut Maus (Tsk / +) ist ein Modell für Gewebefibrose und Sklerod....