Het oor model van de kale SKH1-Hr uur muis maakt intravitale fluorescentiemicroscopie microcirculatie en fototoxische trombus inductie zonder voorafgaande chirurgische preparaten in de onderzochte microvasculaire bed. Daarom is het oor van de haarloze muis is een uitstekend in vivo model voor de complexe interacties te bestuderen tijdens microvasculaire trombusvorming, trombus evolutie, en trombolyse.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Opklaren en Trombus inductie in de oorlel van een Hairless Mouse
* These authors contributed equally
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Trombotische complicaties van vasculaire ziekten zijn een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de geïndustrialiseerde landen. Vanwege de complexe interacties tussen cellulaire en niet-cellulaire bloedcomponenten bij thrombusvorming, kan betrouwbare studies van de fysiologie en pathofysiologie van trombose alleen worden uitgevoerd in vivo. Daarom worden in dit artikel een oor model in haarloze muizen en richt zich op de in vivo analyse van de microcirculatie, trombusvorming en trombus evolutie. Via intravitale fluorescentiemicroscopie en intraveneuze (iv) toepassing van de respectieve fluorescerende kleurstoffen, kan een herhaalde analyse van de microcirculatie in de oorschelp gemakkelijk worden uitgevoerd, zonder de noodzaak van chirurgische voorbereiding. Bovendien kan dit model worden aangepast voor in vivo studies van verschillende zaken, zoals wondgenezing, reperfusieletsel, of angiogenese. Kortom, het oor van haarloze muizen is een ideaal model voor de in vivo onderzoek microcirculatie in fysiologische of pathofysiologische aandoeningen en de evaluatie van de reactie op andere systemische of topische behandelingen.
Inleiding
Het doel van dit artikel is de techniek van intravitale microscopie toegepast op de oorschelp van de haarloze muis voor de directe observatie en analyse van microcirculatie, trombusvorming en trombus evolutie beschrijven. Met een incidentie van 1 op 1000, veneuze trombose nog steeds een veel voorkomende oorzaak van morbiditeit. Hoewel diagnostiek, preventiestrategieën en therapieën zijn in de afgelopen jaren zijn ontwikkeld, een derde van de veneuze trombose manifesteert zich als een longembolie 1. Arteriële trombose speelt een cruciale rol in hart- en vaatziekten, die de meest voorkomende doodsoorzaak in geïndustrialiseerde landen zijn. Arter....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle in vivo-experimenten (7221.3-1-006 / 15) werden uitgevoerd in overeenstemming met de Duitse wetgeving inzake de bescherming van dieren en de NIH Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren (Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council).
1. Algemene houden van de dieren
- Voer de experimenten met mannelijke SKH1-Hr uur muizen van 4 tot 6 weken. Dieren worden gebruikt met een gewicht tussen 20 en 25 g.
- Bewaar de dieren in een pathogeenvrije faciliteit en onder gestandaardiseerde omstandigheden van 24 tot 26 ° C en 60% relatieve vochtigheid, met constante toegang tot water e....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Effecten van Cannabinoid Treatment thrombogenese
Na injectie van 0,05 ml FITC-dextran, fototoxisch trombus inductie leidt tot een endotheliale laesie en de vorming van een pariëtale plaatjesprop (figuren 2 en 3). In deze studie thrombus-inductie na ip injectie van cannabinoïden (5 mg / kg lichaamsgewicht) of vehikel tot een trombotische occlusie vat alle venules (figuur 4). Bij m.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Er zijn een aantal cruciale stappen voor de succesvolle trombus inductie in de oorlel van SKH1-Hr hr muizen. Voor het oplossen van problemen, worden de respectievelijke stappen van het protocol aangegeven tussen haakjes.
Onderzoek omstandigheden zijn ideaal bij jonge dieren op de leeftijd van 4-6 weken en met een lage verhoorning van de opperhuid. Bij oudere dieren, de kwaliteit van visualisatie van de vaten slechter en meer vergelijkbaar vanwege de hogere afstand tussen het huido.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs hebben geen bevestigingen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| SKH-1/hr muizen | Charles River | 477 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| standaard laboratoriumvoer | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| operatie stereomicroscoop | Leica | M651/M655 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| intravitale microscoop | Zeiss | Axiotech Vario 100 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| objectief (20X/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| objectief (63X/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| zwart-wit CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| natriumchloride | Braun | 5/12612055/1011 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| dexapanthenol 5% oogzalf | Bayer | 6029009.00.00 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| DMSO | Sigma | 472301 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| Hechtstrips | Leukosilk | 4683400 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| hematologie analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| EDTA-bloedbuis | Sarstedt | 201,341 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| wattenstaafjes | Sanyo | 604-A-1 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| infraroodlicht | Beurer | 5/13855 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| eenmalig gebruik spuit | Braun | 2020-08 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| insulinespuit | Braun | 9161502 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| wegwerp hypodermische naalden | Braun | 465 7640 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| eind-tot-eind capillair | Sarstedt | 19,447 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| verwarmingsplaat | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| schaar 14,5 cm | Aesculap | BC259R | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| naaldhouder | Aesculap | BM081R | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| microforceps | Aesculap | BD331R | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| microschaar | Aesculap | OC496R | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| elektrocauterisatie | Servoprax | H40140 | kan worden gekocht bij andere leveranciers |
| acrylglas pad | geïntegreerde verwarming, 0,5 cm hoge vlakte |
Referenties
- White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
- Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
- Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
