Het oor model van de kale SKH1-Hr uur muis maakt intravitale fluorescentiemicroscopie microcirculatie en fototoxische trombus inductie zonder voorafgaande chirurgische preparaten in de onderzochte microvasculaire bed. Daarom is het oor van de haarloze muis is een uitstekend in vivo model voor de complexe interacties te bestuderen tijdens microvasculaire trombusvorming, trombus evolutie, en trombolyse.
Trombotische complicaties van vasculaire ziekten zijn een belangrijke oorzaak van morbiditeit en mortaliteit in de geïndustrialiseerde landen. Vanwege de complexe interacties tussen cellulaire en niet-cellulaire bloedcomponenten bij thrombusvorming, kan betrouwbare studies van de fysiologie en pathofysiologie van trombose alleen worden uitgevoerd in vivo. Daarom worden in dit artikel een oor model in haarloze muizen en richt zich op de in vivo analyse van de microcirculatie, trombusvorming en trombus evolutie. Via intravitale fluorescentiemicroscopie en intraveneuze (iv) toepassing van de respectieve fluorescerende kleurstoffen, kan een herhaalde analyse van de microcirculatie in de oorschelp gemakkelijk worden uitgevoerd, zonder de noodzaak van chirurgische voorbereiding. Bovendien kan dit model worden aangepast voor in vivo studies van verschillende zaken, zoals wondgenezing, reperfusieletsel, of angiogenese. Kortom, het oor van haarloze muizen is een ideaal model voor de in vivo onderzoek microcirculatie in fysiologische of pathofysiologische aandoeningen en de evaluatie van de reactie op andere systemische of topische behandelingen.
Het doel van dit artikel is de techniek van intravitale microscopie toegepast op de oorschelp van de haarloze muis voor de directe observatie en analyse van microcirculatie, trombusvorming en trombus evolutie beschrijven. Met een incidentie van 1 op 1000, veneuze trombose nog steeds een veel voorkomende oorzaak van morbiditeit. Hoewel diagnostiek, preventiestrategieën en therapieën zijn in de afgelopen jaren zijn ontwikkeld, een derde van de veneuze trombose manifesteert zich als een longembolie 1. Arteriële trombose speelt een cruciale rol in hart- en vaatziekten, die de meest voorkomende doodsoorzaak in geïndustrialiseerde landen zijn. Arteriële trombose op basis van de breuk van atherosclerotische plaques is betrokken bij hartaanvallen, mesenteriale infarcten, en beroerte. Elke operatie bloot subendotheliale structuren bloedcomponenten, verandert de dynamiek van de bloedstroom, en immobiliseert de patiënt. In endoprosthetische operatie aan de onderste ledematen, orgel transplantation en flap chirurgie trombose zijn frequente oorzaken van complicaties. Microvasculaire trombose in het bijzonder veroorzaakt vaak onherstelbare schade, als gevolg van het gebrek aan klinische symptomen. Ook microvasculaire trombose speelt een cruciale regel in verschillende ziekten, waaronder trombotische trombocytopenische purpura, sepsis, diffuse intravasale stolling, antifosfolipidensyndroom en veneuze insufficiëntie, onder anderen.
Verschillende nieuwe geneesmiddelen voor de behandeling en preventie van trombose werden ontwikkeld in de afgelopen jaren, maar antiplatelet drugs en antistollingsmiddelen hebben nog steeds bijwerkingen, gebrek antagonisten, en zijn voorzien van lange duur effecten. Deze tekortkomingen leiden tot problemen in dringende medische zorg. Aldus is meer onderzoek nodig om de complexe processen die optreden tijdens trombose, die nauwelijks kan worden gesimuleerd in vitro bloot te leggen.
De haarloze SKH1-Hr hr muis werd ontdekt 1926 in een dierentuin in Londen.Vanwege een gendefect op chromosoom 14, het dier verliest zijn vacht na postnatale dag 10. Dit geeft een goed gevasculariseerde auricula toegankelijk intravitale microscopie van de vaten. De gemiddelde dikte van het oor is 300 urn. Het bestaat uit twee lagen van de dermis, die worden gescheiden door kraakbeen. Aan de convexe dorsale zijde van het kraakbeen, 3 vaatbundels voert de oorlel. Apicale vasculaire bogen en basale shunts sluit de drie bundels. De venules hebben diameters tussen 200 urn (basaal) en 10 urn (apicale). Fijnmazig haarvaten rond de lege haarzakjes 2. De anatomie van de haarloze SKH1-Hr hr muis maakt de oorschelp een krachtige en kosteneffectieve model voor trombose onderzoek.
Er zijn een aantal cruciale stappen voor de succesvolle trombus inductie in de oorlel van SKH1-Hr hr muizen. Voor het oplossen van problemen, worden de respectievelijke stappen van het protocol aangegeven tussen haakjes.
Onderzoek omstandigheden zijn ideaal bij jonge dieren op de leeftijd van 4-6 weken en met een lage verhoorning van de opperhuid. Bij oudere dieren, de kwaliteit van visualisatie van de vaten slechter en meer vergelijkbaar vanwege de hogere afstand tussen het huido…
The authors have nothing to disclose.
De auteurs hebben geen bevestigingen.
SKH-1/hr mice | Charles River | 477 | can be purchased from other vendors |
standard laboratory food | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | can be purchased from other vendors |
operation stereomicroscope | Leica | M651/M655 | can be purchased from other vendors |
intravital microscope | Zeiss | Axiotech Vario 100 | can be purchased from other vendors |
objective (20x/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | can be purchased from other vendors |
objective (63x/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | can be purchased from other vendors |
black and white CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | can be purchased from other vendors |
DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | can be purchased from other vendors |
sodium chloride | Braun | 5/12612055/1011 | can be purchased from other vendors |
Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | can be purchased from other vendors |
Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | can be purchased from other vendors |
FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | can be purchased from other vendors |
dexapanthenol 5% eye ointment | Bayer | 6029009.00.00 | can be purchased from other vendors |
formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | can be purchased from other vendors |
DMSO | Sigma | 472301 | can be purchased from other vendors |
coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | can be purchased from other vendors |
plasters | Leukosilk | 4683400 | can be purchased from other vendors |
centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | can be purchased from other vendors |
hematology analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | can be purchased from other vendors |
EDTA-blood tube | Sarstedt | 201,341 | can be purchased from other vendors |
cotton swabs | Sanyo | 604-A-1 | can be purchased from other vendors |
infrared light | Beurer | 5/13855 | can be purchased from other vendors |
single use synringe | Braun | 2020-08 | can be purchased from other vendors |
insulin syringe | Braun | 9161502 | can be purchased from other vendors |
disposable hypodermic needles | Braun | 465 7640 | can be purchased from other vendors |
end-to-end capillary | Sarstedt | 19,447 | can be purchased from other vendors |
heating plate | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | can be purchased from other vendors |
scissors 14,5 cm | Aesculap | BC259R | can be purchased from other vendors |
needle Holder | Aesculap | BM081R | can be purchased from other vendors |
microforceps | Aesculap | BD331R | can be purchased from other vendors |
microscissors | Aesculap | OC496R | can be purchased from other vendors |
scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | can be purchased from other vendors |
Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | can be purchased from other vendors |
Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | can be purchased from other vendors |
electrocautery | Servoprax | H40140 | can be purchased from other vendors |
acrylglass pad | integrated heating, 0,5 cm high plane |