Utilisation d'une méthode immunohistochimique intégrale pour étudier l'inervation du tractus biliaire dans<em> Suncus murinus</em
Summary
Une approche immunohistochimique intégrale, pour visualiser l'expression de la protéine de neurofilament dans le tractus biliaire extrahépatique chez Suncus murinus. Est présenté ici. Ce protocole peut être utilisé pour analyser l'innervation de tous les organes viscéraux dans S. murinus ou d'autres espèces.
Abstract
Ce travail décrit en détail la méthode de coloration de l'immunohistochimie à l'aide d'anticorps protéiniques de neurofilaments pour étiqueter l'innervation du tractus biliaire chez Suncus murinus ( S. murinus ). Tout d'abord, l'échantillon a été disséqué à partir de S. murinus et fixé dans du paraformaldéhyde à 4% (PFA). Deuxièmement, un traitement enzymatique et une inactivation potentielle de la peroxydase endogène ont été effectués. L'échantillon a ensuite été exposé à l'anticorps primaire, anticorps anti-protéines anti-neurofilament, pendant 3 à 6 jours. Il a ensuite été incubé avec l'anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort. La réaction de couleur a été révélée en faisant réagir l'échantillon avec un substrat de 3,3'-diaminobenzidine (DAB). Cette méthode peut être appliquée pour analyser l'innervation de tous les organes viscéraux. En outre, ce protocole peut également être adapté pour tester d'autres anticorps neuronaux, mais l'optimisation de l'anticorpsEs devrait être fait en premier. Cette méthode a été initialement introduite par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 .
Introduction
La maison muske shrew, Suncus murinus , appartient à l'ordre Insectivora et à la famille Soricidae. Ce petit mammifère est distribué dans tout le sud-est asiatique et habite des maisons et des zones herbeuses situées à proximité d'habitations humaines ou de enclos pour bétail 4 . Cette espèce présente des caractéristiques morphologiques générales plus semblables aux humains que les autres animaux de laboratoire, comme la souris, le rat et le lapin 5 . Auparavant, on utilisait l'immunocoloration totale avec un marqueur de neurone périphérique pour la protéine de neurofilament de S. murinus (NFP) pour étiqueter les nerfs périphériques dans le pancréas 6 , la papille duodénale majeure 7 , le pylore 8 , la vésicule biliaire 5 et les voies biliaires extrahépatiques 9 .
Le PFN est un complexe macromoléculaire qui fait partie du cytosquelette neuronal mature. Protéine liée au neurofilamentS intermédiaires les interactions entre le NFP et le zygosome. La fonction enzymatique et la structure des protéines de liaison sont régulées par NFP 10 . Le complexe NFP est constitué de trois polypeptides: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) et NF-H (200 kDa). Les PFN peuvent être trouvés dans les axones neuronaux dans le système nerveux central et périphérique. L'anticorps anti-NFP humain a été montré pour étiqueter les axones du système nerveux central et périphérique. Des études anatomiques et électrophysiologiques ont démontré que le sphincter, la vésicule biliaire et le tractus gastro-intestinal proximal sont reliés 11 , 12 , 13 , 14 . Cependant, les caractéristiques morphologiques de leurs connexions neuronales n'ont pas encore été définies.
Ce travail démontre l'utilisation d'une méthode de coloration immunohistochimique à l'ensemble de la matière pour étiqueter l'innervation des S. murinus bilAvec un anticorps NFP.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ce travail décrit la procédure expérimentale pour la visualisation de l'innervation du tractus biliaire extra-hépatique en utilisant un anticorps contre la protéine neurofilamentaire. Ce protocole a été adapté du protocole décrit par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 .
Pour cette expérience, planifiez le calendrier pour chacune des expériences, car l'approche de coloration intégrale s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs n'ont aucune reconnaissance.
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
References
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