Une approche immunohistochimique intégrale, pour visualiser l'expression de la protéine de neurofilament dans le tractus biliaire extrahépatique chez Suncus murinus. Est présenté ici. Ce protocole peut être utilisé pour analyser l'innervation de tous les organes viscéraux dans S. murinus ou d'autres espèces.
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Article de méthode
Utilisation d'une méthode immunohistochimique intégrale pour étudier l'inervation du tractus biliaire dans
Dans cet article
Résumé
Résumé
Ce travail décrit en détail la méthode de coloration de l'immunohistochimie à l'aide d'anticorps protéiniques de neurofilaments pour étiqueter l'innervation du tractus biliaire chez Suncus murinus ( S. murinus ). Tout d'abord, l'échantillon a été disséqué à partir de S. murinus et fixé dans du paraformaldéhyde à 4% (PFA). Deuxièmement, un traitement enzymatique et une inactivation potentielle de la peroxydase endogène ont été effectués. L'échantillon a ensuite été exposé à l'anticorps primaire, anticorps anti-protéines anti-neurofilament, pendant 3 à 6 jours. Il a ensuite été incubé avec l'anticorps secondaire conjugué à la peroxydase de raifort. La réaction de couleur a été révélée en faisant réagir l'échantillon avec un substrat de 3,3'-diaminobenzidine (DAB). Cette méthode peut être appliquée pour analyser l'innervation de tous les organes viscéraux. En outre, ce protocole peut également être adapté pour tester d'autres anticorps neuronaux, mais l'optimisation de l'anticorpsEs devrait être fait en premier. Cette méthode a été initialement introduite par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 .
Introduction
La maison muske shrew, Suncus murinus , appartient à l'ordre Insectivora et à la famille Soricidae. Ce petit mammifère est distribué dans tout le sud-est asiatique et habite des maisons et des zones herbeuses situées à proximité d'habitations humaines ou de enclos pour bétail 4 . Cette espèce présente des caractéristiques morphologiques générales plus semblables aux humains que les autres animaux de laboratoire, comme la souris, le rat et le lapin 5 . Auparavant, on utilisait l'immunocoloration totale avec un marqueur de neurone périphérique pour la protéine de neurofilament de S. murinus (....
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Protocole
Toutes les procédures expérimentales ont été approuvées par le Comité institutionnel des soins et de l'utilisation des animaux de l'Université métropolitaine de Tokyo (IACUC). Les animaux ont été logés et manipulés conformément au Guide pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et le Guide pour la prise en charge et l'utilisation des animaux expérimentaux du Conseil canadien sur les soins des animaux. Nous avons utilisé des animaux élevés et entretenus au Laboratoire de morphologie fonctionnelle, Département de sciences de la santé de la frontière, Université métropolitaine de Tokyo, au Japon.
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Résultats
Les figures 1 à 4 montrent des résultats typiques pour les fibres nerveuses NFP positives dans le tractus biliaire extra-hépatique de S. murinus . L'anticorps contre le NFP a reproduit de façon reproductible l'innervation dans l'image entière du tractus biliaire extra-hépatique ( Figure 1 ), de la vésicule biliaire ( Figure 2 ), de la voie biliaire supérieure (
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Discussion
Ce travail décrit la procédure expérimentale pour la visualisation de l'innervation du tractus biliaire extra-hépatique en utilisant un anticorps contre la protéine neurofilamentaire. Ce protocole a été adapté du protocole décrit par Kuratani et Tanaka 1 , 2 , 3 .
Pour cette expérience, planifiez le calendrier pour chacune des expériences, car l'approche de coloration intégrale se poursuit p.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs ne déclarent aucun conflit d'intérêts.
Remerciements
Les auteurs n'ont aucune reconnaissance.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| acide orthopériodique | Wako | 162-00732 | |
| papaïne | Wako | 164-00172 | |
| albumine sérique bovine (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| azoture de sodium | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| anticorps anti-protéine de neurofilament (NFP) | Dako | M0762, lot 089, clone : 2F11 | |
| conjugué à la peroxydase mouton purifié par affinité anti-souris IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tétrachlorhydrate (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
Références
- Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method. Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).
- Kuratani, S., Tanaka, S.
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Réimpressions et autorisations
