Utilisation d'une ligne centrale pour les fluides veineuses, les drogues et l'administration des nutriments dans un modèle de souris de maladies graves
Summary
This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.
Abstract
Ce protocole décrit un modèle de souris cathétérisés au centre d'une maladie grave prolongée. Nous combinons la ligature du caecum et la méthode de ponction pour induire une septicémie avec l'utilisation d'une ligne veineuse centrale pour les fluides, les médicaments et l'administration des nutriments pour imiter le milieu clinique humain. Les patients gravement malades ont besoin de soutien médical intensif pour survivre. Alors que la majorité des patients guérissent en quelques jours, environ un quart des patients ont besoin de soins intensifs prolongée et sont à risque élevé de mourir d'une non-résolution de défaillance de plusieurs organes. En outre, la phase prolongée de maladie grave est poinçonnée par une profonde faiblesse musculaire, et des changements endocriniens et métaboliques, dont la pathogénie est actuellement incomplètement comprise. Le modèle animal le plus largement utilisé dans la recherche de soins intensifs est le modèle de ligature et ponction du caecum pour induire une septicémie. Ceci est un modèle très reproductible, avec des changements inflammatoires et hémodynamiques aiguës similaires à septembre humainsis, qui est conçu pour étudier la phase aiguë de la maladie grave. Cependant, ce modèle est poinçonnée par une haute létalité, qui est différente de la situation clinique humaine, et n'est pas mis au point pour étudier la phase prolongée de maladie grave. Par conséquent, nous avons adapté la technique en plaçant un cathéter veineux central dans la veine jugulaire qui nous permet d'administrer des soins de soutien pertinents sur le plan clinique, pour imiter mieux la situation clinique humaine de maladie grave. Ce modèle de la souris nécessite une vaste intervention chirurgicale et de soins intensifs quotidienne des animaux, mais il en résulte un modèle pertinent de la phase aiguë et prolongée d'une maladie grave.
Introduction
maladie grave est un état pathologique dans lequel la fonction d'un ou plusieurs systèmes d'organes est entravée dans la mesure où le patient va mourir, à moins que le soutien médical intensif est administré. Alors que la cause initiale d'admission à l'unité de soins intensifs (USI) peut varier, allant d'un traumatisme, une intervention chirurgicale compliquée, brûlures, exacerbations de la maladie à la septicémie, tous les patients gravement malades souffrent de dommages cellulaires causés par hypoperfusion, l'hypoxie et l'inflammation excessive entre autres , ce qui conduit à l'échec d'organes. La plupart des patients survivent à leur insulte aiguë, mais une fraction importante des patients ne sont pas immédiatement récupérer et ont besoin de soins intensifs prolongée. Ils sont à risque élevé de décès dus à la non-résolution de défaillance de plusieurs organes. En outre, la phase prolongée de maladie grave est poinçonnée par une profonde faiblesse musculaire et endocrinien et le changement métabolique, dont la pathogénie est actuellement incomplètement comprise.
plusieurs rmodèles Odent sont utilisés dans le cadre de la recherche de soins intensifs. Les deux modèles les plus utilisés sont l'administration exogène de lipopolysaccharide (LPS) et la ligature et ponction du caecum (CLP). Les deux modèles sont développés pour imiter la phase aiguë de la septicémie, définie comme un dysfonctionnement des organes mortelle causée par une réponse hôte dysregulated à l' infection, et l' une des principales raisons pour l' admission à l'unité de soins intensifs dans le monde entier 1, 2. Le modèle LPS présente plusieurs inconvénients car il ne touche transitoirement la libération de cytokines et l'état hémodynamique de l'animal 3. Contrairement aux humains, les rongeurs sont particulièrement résistants à l' endotoxine et l'utilisation des « fortes doses » de endotoxine est nécessaire pour produire une hypotension et de mortalité, par les présentes préoccupations de la collecte validité de cette méthode 4, 5. L'autre modèle, la ligature caecale et ponction modèle (CLP)dispose d'une ligature d'une partie du caecum suivie d'une ponction à l'aiguille traversant et traversant. Cette procédure provoque une infection abdominale polymicrobienne des lésions tissulaires, suivie d'une translocation des bactéries dans le compartiment sanguin. Cela déclenchera une réponse inflammatoire systémique et le développement de la septicémie. Le modèle CLP a été largement reconnu comme un modèle animal de maladie aiguë grave qui reproduit les caractéristiques principales de la septicémie: hyperinflammation, la vasodilatation, l' hypotension et augmentation du débit cardiaque 6, 7. Toutefois, ce modèle ne permet pas l'étude de la non-résolution de défaillance multiviscérale, atrophie musculaire, et des changements endocriniens et métaboliques, qui sont typiques pour la phase prolongée de maladie grave. En outre, récemment la validité des modèles de souris pour les maladies graves ont été remis en cause, puisque les résultats des modèles de souris ne peuvent pas toujours être traduits au milieu humain 8, 9, 10. Une explication possible pourrait être que les soins de soutien fourni aux malades en phase critique des patients humains diffère sensiblement de la prise en charge qui est fournie à des souris gravement malades.
Par conséquent, pour ressembler milieux humains plus étroitement et de permettre une enquête de la phase prolongée de maladie grave, nous avons développé un modèle de souris qui imite les soins intensifs aiguë donnée à l'homme, comme une vaste administration de liquide par voie intraveineuse et un traitement antibiotique, et qui permet pour administrer des soins de soutien afin de survivre à la phase prolongée de maladies graves, telles que le soutien nutritionnel. A cet effet, nous avons adapté le modèle de souris de la septicémie CLP-induite, étant la norme d'or pour la septicémie, et placé une ligne veineuse centrale qui permet l'administration des fluides, la nutrition et les médicaments.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous avons développé un modèle de souris plus cliniquement pertinente de maladie grave, en combinant la méthode de ligature et ponction du caecum pour induire une septicémie avec l'utilisation d'une ligne veineuse centrale pour les fluides, les médicaments et l'administration des nutriments. Ce dispositif expérimental est reproductible, permet d'étudier la phase prolongée de maladie grave et entraîne un taux de mortalité stable, mimant par la présente la situation clinique humaine <sup class=…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
GVdB, via the University of Leuven (KU Leuven), receives long-term structural research support from the Methusalem Program funded by the Flemish Government (METH08/07) and holds a European Research Council Advanced Grant AdvG-2012-321670 from the Ideas Program of the European Union seventh framework program. SET received a Research Foundation-Flanders (FWO) Research Assistant Fellowship.
Materials
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0,3mg/ml | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100mg/ml | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025 O.D." x .012 I.D." | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 – Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023"x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2mg/ml | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
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