मानव रेटिना और RPE के विच्छेदन-Proteomic विश्लेषण के लिए धमनियां
Summary
मानव रेटिना fovea, मैक्युला, और परिधीय रेटिना सहित कार्यात्मक और आणविक रूप से अलग क्षेत्रों से बना है. यहां, हम एक मानव आंख से पंच बायोप्सी और ऊतक परतों के मैनुअल हटाने का उपयोग करने के लिए टुकड़े और बहाव proteomic विश्लेषण के लिए इन अलग रेटिना क्षेत्रों इकट्ठा विधि का वर्णन ।
Abstract
मानव रेटिना संवेदी neuroretina और अंतर्निहित रेटिना pigmented उपकला (RPE), जो दृढ़ता से संवहनी धमनियां परत करने के लिए जटिल है से बना है । रेटिना के विभिन्न क्षेत्रों शारीरिक और आणविक रूप से अलग कर रहे हैं, अद्वितीय कार्यों को सुविधाजनक बनाने और रोग के लिए अंतर संवेदनशीलता का प्रदर्शन. इन क्षेत्रों और परतों में से प्रत्येक के Proteomic विश्लेषण कई रोगों की आणविक प्रक्रिया में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं, उम्र से संबंधित धब्बेदार अध-पतन (AMD), मधुमेह, और मोतियाबिंद भी शामिल है. हालांकि, रेटिना क्षेत्रों और परतों की जुदाई मात्रात्मक proteomic विश्लेषण पूरा किया जा सकता से पहले आवश्यक है. यहां, हम विच्छेदन और संग्रह के लिए एक विधि का वर्णन foveal, धब्बेदार, और परिधीय रेटिना क्षेत्रों और अंतर्निहित RPE-धमनियां जटिल, क्षेत्रीय पंच बायोप्सी और एक मानव आंख से ऊतक परतों के मैनुअल हटाने शामिल. एक आयामी एसडीएस-पृष्ठ के रूप में अच्छी तरह से बहाव proteomic विश्लेषण, जैसे तरल क्रोमैटोग्राफी-मिलकर जन स्पेक्ट्रोमेट्री (नियंत्रण रेखा-ms/एमएस), प्रत्येक विदारक रेटिना परत में प्रोटीन की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता, रेटिना रोग के लिए आणविक बायोमास का खुलासा.
Introduction
रेटिना, RPE, और धमनियां जटिल ऊतकों कि प्रोटीन अभिव्यक्ति, शारीरिक समारोह में महत्वपूर्ण क्षेत्रीय मतभेदों का प्रदर्शन कर रहे हैं, और रोग संवेदनशीलता1,2. उदाहरण के लिए, इस तरह की उंर से संबंधित धब्बेदार अध-पतन (AMD), रेटनाइटिस पिगमेंटोसा, और केंद्रीय तरल रेटिनोपैथी के रूप में रोगों fovea, मैक्युला, या रेटिना परिधि के भीतर विशिष्ट स्थानीयकरण का प्रदर्शन1,3, 4,6. यहाँ, हम कैसे अलग रेटिना क्षेत्रों स्वतंत्र रूप से नमूना किया जा सकता है का प्रदर्शन एक विधि पेश करते हैं. इस विधि का समग्र लक्ष्य proteomic विश्लेषण के लिए foveal, धब्बेदार, और परिधीय क्षेत्रों के मानव रेटिना और RPE-धमनियां से ऊतक के नमूनों के संग्रह के लिए एक विश्वसनीय गाइड प्रदान करना है । विकास और इस तकनीक के उपयोग के लिए तर्क यह है कि इन विशिष्ट रेटिना क्षेत्रों के proteomic विश्लेषण के माध्यम से, महत्वपूर्ण आणविक अंतर्दृष्टि इन क्षेत्रों के शारीरिक और pathophysiological कार्यों में प्राप्त किया जा सकता है ।
इस दृष्टिकोण से संबंधित क्षेत्रीय रोग संवेदनशीलता के लिए proteomic आधार प्रकट करने का वादा किया है, और नए विशिष्ट चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान की सुविधा के लिए । दरअसल, अवलेह और रेटिना के साथ अपनी बातचीत की proteomic जांच आणविक संरचना और स्वस्थ और रोगग्रस्त ऊतक के समारोह में मुख्य अंतर्दृष्टि प्रदान की है5,7,8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13. हालांकि, अलग रेटिना क्षेत्रों के स्पष्ट तुलनात्मक proteomic विश्लेषण कमी कर रहे हैं । तकनीक का समर्थन करने के लिए इन बहुत जरूरत अध्ययन, एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि ऊतक संग्रह दृष्टिकोण का प्रदर्शन करके अंय तरीकों से अधिक लाभ प्रदान करने में मदद मिलेगी । और तो, दृष्टिकोण बहुत सुलभ है, मानक के लाभ ले आकार और आसानी से उपलब्ध ऊतक पंच बायोप्सी उपकरण । हमारी तकनीक proteomic प्रसंस्करण के लिए उपयुक्त संग्रह और ऊतकों के भंडारण पर जोर देती है, प्रोटीन स्थिरता और क्षरण के लिए महत्वपूर्ण विचार कर रही है । इस प्रकार, इस विधि proteomic कारकों के बहाव आणविक विश्लेषण पर विचार कर जांचकर्ताओं के लिए सबसे उपयुक्त है ।
Protocol
यह अध्ययन आयोवा विश्वविद्यालय के & #39; s संस्थागत समीक्षा बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था और हेलसिंकी की घोषणा में उल्लिखित सिद्धांतों का पालन करता है.
1. Foveal और धब्बेदार बायोप्सी पंच …
Representative Results
Discussion
ऊतक संग्रह के बाद, नमूना हैंडलिंग और उपचार के14महत्वपूर्ण विचार कर रहे हैं । बाद के रूप में प्रोटीन संरचना, जो बहाव विश्लेषण विषम सकता है के लिए नुकसान में परिणाम हो सकता है तरल नाइट्रोजन में सं?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
VBM NIH अनुदान [K08EY020530, R01EY024665, R01EY025225, R01EY024698 और R21AG050437] द्वारा समर्थित है, डोरिस ड्यूक चैरिटेबल फाउंडेशन अनुदान #: २०१३१०३, और अनुसंधान को रोकने के लिए अंधापन (रपब), ंयूयॉर्क, NY । मीट्रिक टन और जीवी NIH अनुदान T32GM007337 द्वारा समर्थित हैं ।
Materials
| 4-mm skin punch biopsy tool | Miltex | REF 33-34 | |
| 8-mm skin punch biopsy tool | Miltex | REF 33-37 | |
| 0.12 Colibri Forceps | Stephens Instruments | S5-1145 | |
| Wescott Scissors | Sklar Surgical Instruments | 64-3146 | |
| Microfuge tubes | Eppendorf | #022364111 | 1.5 mL |
| Liquid Nitrogen | Praxair, Inc. | 7727-37-9 [R] |
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