Methylene ब्लू डाई इंजेक्शन द्वारा मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोषों का आकलन
Summary
Methylene ब्लू डाई इंजेक्शन गुर्दे श्रोणि में माउस भ्रूण मूत्र पथ विकास के दौरान मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोष के आकलन की सुविधा । यहां, गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है ।
Abstract
मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोष जन्मजात hydronephrosis और hydroureter उत्प्रेरण विसंगतियों हैं । Murine मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोषों मूत्र प्रणाली के भीतर methylene नीले रंग के प्रवाह पर नज़र रखने के द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है । Methylene ब्लू डाई प्रसवकालीन भ्रूण गुर्दे और डाई प्रवाह के गुर्दे श्रोणि में इंजेक्शन है यूरेटर के माध्यम से गुर्दे की श्रोणि से और मूत्राशय लुमेन में हीड्रास्टाटिक दबाव लागू करने के बाद निगरानी की जाती है । डाई संचय सामांय प्रसवकालीन मूत्र पथ के लुमेन में स्पष्ट हो जाएगा, लेकिन गुर्दे श्रोणि और एक असामांय यूरेटर के अंत बिंदु के बीच विवश हो जाएगा, अगर मूत्र पथ अवरोधों होते हैं । इस विधि मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों और hydronephrosis और hydroureter के दृश्य की पुष्टि की सुविधा । इस पांडुलिपि गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों की पुष्टि ।
Introduction
मूत्र प्रणाली गुर्दे और मूत्रवाहिनी और एक आम मूत्राशय और मूत्रमार्ग की एक जोड़ी के होते हैं । मूत्र प्रणाली का मुख्य कार्य रक्त के पानी और इलेक्ट्रोलाइट संतुलन का प्रबंधन करके शरीर homeostasis बनाए रखने के लिए है । गुर्दे इलेक्ट्रोलाइट सांद्रता और अम्ल-आधार संतुलन को नियंत्रित करने के लिए रक्त को फिल्टर, और solutes और चयापचयों सहित अतिरिक्त पानी और अपशिष्ट उत्सर्जित करने के लिए मूत्र का उत्पादन । मूत्र तो bladderin एक एकतरफ़ा तरीके से गुर्दे की गुर्दे श्रोणि से यूरेटर के माध्यम से ले जाया जाता है, जहां यह और संग्रहीत अंततः मूत्रमार्ग के माध्यम से समाप्त हो जाता है1।
मूत्रवाहिनी सीधे nephric नलिका से उद्भव ट्यूब हैं । के बाद भ्रूण दिवस १०.५ (ई 10.5) में nephric डक्ट से माउस में नवोदित, यूरेटर डंठल लंबी और एक multilayered संरचना में अंतर urothelium कहा जाता है जो माउस e 12.5 और e 16.5 के बीच अभेद्य है । mesenchymal यूरेटर डंठल आसपास की कोशिकाओं को भी तीन भीतरी stromal कोशिकाओं, मध्यवर्ती मोटी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं, और बाहरी adventitial fibroblasts से मिलकर परतों में विभेदित कर रहे हैं । Ureteral सिकुड़नेवाला गुर्दे श्रोणि में शुरू लहरों मूत्राशय के लिए यूरेटर दीवार की चिकनी मांसपेशी परत के माध्यम से प्रचार के लिए मूत्र परिवहन के लिए कर रहे है2,3, जो माउस1में ई 16.5 प्रारंभ का उत्पादन किया है ।
गुर्दे और मूत्र पथ की जन्मजात विसंगतियों (CAKUT) सबसे अक्सर आनुवंशिक रोगों के बीच में हैं, मानव भ्रूण के 1% के आसपास में मौजूद1,4, और hydronephrosis और hydroureter सहित phenotypes की एक किस्म की रचना । गुर्दे और यूरेटर में मूत्र के असामान्य संचय hydronephrotic गुर्दे और hydroureter गठन में परिणाम है । hydronephrosis और/या hydroureter गठन का एक कारण मूत्र पथ की एक रुकावट है । Ureteropelvic जंक्शन रुकावट (UPJO) समीपस्थ यूरेटर और गुर्दे श्रोणि के बीच एक रुकावट के कारण ंयायपालिका मूत्र प्रवाह की वजह से है, hydronephrosis और समीपस्थ hydroureter के साथ संकुचन angulation या लगातार तह में जिसके परिणामस्वरूप5, 6. इसके अलावा, या तो मूत्राशय की दीवार या प्रजनन पथ में बाहर यूरेटर के अस्थानिक प्रविष्टि ureterovesical जंक्शन रुकावट (UVJO) कहा जाता है । UVJO भी hydronephrosis और hydromegaureter गठन7,8प्रेरित कर सकते हैं । एक अतिरिक्त ureterovesical जंक्शन (UVJ) दोष vesicoureteric भाटा (VUR) है । VUR UVJ में गुर्दे की ओर मूत्राशय से प्रतिगामी मूत्र प्रवाह की विशेषता है । UVJO की तुलना में, VUR के साथ प्रसवकालीन भ्रूण स्पष्ट रूप से एक विवृत्त hydronephrotic गुर्दे या गंभीर hydroureter phenotype9दिखा नहीं है ।
प्रयोगशाला में माउस, मूत्र प्रवाह एक डाई के इंजेक्शन द्वारा जांच की जा सकती है, जैसे methylene नीले, गुर्दे में9श्रोणि. injectedmethylene ब्लू समाधान यूरेटर के माध्यम से और मूत्राशय में गुर्दे श्रोणि से मूत्र पथ का पता लगाने जाएगा । Hydronephrosis गुर्दे में डाई के एक विस्तार से पहचाना जा सकता है । UPJO के साथ समीपस्थ यूरेटर में डाई प्रवाह की एक रुकावट के रूप में पता लगाया जा सकता है गुर्दे श्रोणि5। एक चौड़े व्यास द्वारा संकेत यूरेटर के किसी भी फैलाव hydroureter का एक उदाहरण दर्शाता है । अंत में, मूत्राशय की दीवार पर डाई संचय या प्रजनन पथ के स्थल पर UVJO hydronephrotic गुर्दे और फैली हुई hydromegaureter7,10के साथ इंगित करता है । VUR का पता लगाने के लिए, डाई समाधान मूत्राशय में इंजेक्शन है और बाद में प्रतिगामी प्रवाह गुर्दे में9पर नजर रखी है ।
यहां, एक प्रसवकालीन भ्रूण के गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है । इस प्रोटोकॉल यूरेटर के माध्यम से और मूत्राशय में गुर्दे श्रोणि से मूत्र प्रवाह की अनुरेखण की अनुमति देता है और इस तरह के UPJO या UVJO के रूप में संभावित मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों की पुष्टि ।
Protocol
चूहों ( Wnt5a flox / flox चूहों (Wnt5a tm 1.1 tpy ) और Dll1Cre लाइन, UVJO माउस मॉडल) 7 की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए NIH दिशानिर्देशों के अनुसार प्रबंधित किए गए और एक NCI-फ्रेडरिक पशु देखभ?…
Representative Results
Discussion
माउस गुर्दे ई 16.5 पर शुरू कार्यात्मक है और एक डाई इंजेक्शन परीक्षण सैद्धांतिक रूप से इस समय बिंदु से संभव है । हालांकि, गुर्दे डाई समाधान और phenotypes जैसे hydronephrosis और hydroureter के साथ इंजेक्शन किया जा करने के लिए बहुत छ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस पांडुलिपि के प्रस्तुतीकरण के समर्थन के लिए मैं डॉ॰ एलन ओ Perantoni (CDBL/NCI/NIH) का धन्यवाद करता हूं । मैं इस पांडुलिपि के संपादन के लिए डॉ॰ माइकल हॉल (CDBL/NCI/NIH) और निर्मला शर्मा (CDBL/NCI/NIH) का भी धन्यवाद करता हूं । मैं अपने उत्कृष्ट माउस पशुपालन के लिए लाइ थांग (एसएआईसी) का आभारी हूँ । यह काम स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों, राष्ट्रीय कैंसर संस्थान और कैंसर अनुसंधान के लिए केंद्र द्वारा समर्थित किया गया ।
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
References
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