Summary
يصف لنا تقنية النفخ، التي يمكن أن تدار من خلال تسجيل كامل الخلية التصحيح-المشبك الكواشف الدوائية، وتسليط الضوء على جوانب مختلفة من الميزات التي تعتبر حاسمة لنجاحه.
Abstract
ويشيع استخدام الإدارة الدوائية عند إجراء تصحيح كامل الخلية-المشبك تسجيل شرائح المخ. واحدة من أفضل الطرق لتطبيق المخدرات أثناء تسجيل الكهربية هو أسلوب النفخ، التي يمكن استخدامها لدراسة تأثير الكواشف الدوائي على أنشطة الخلايا العصبية في الدماغ شرائح. أكبر ميزة للنفخ التطبيق أن تركيز المخدرات حول موقع تسجيل يزيد من سرعة، وبالتالي منع الحساسية مستقبلات الغشاء. الاستخدام الناجح للتطبيق نفخة ينطوي على اهتمام دقيق للعناصر التالية: تركيز الدواء، ومعلمات ميكروبيبيتي نفخة، المسافة بين طرف ميكروبيبيتي النفخ والعصبية المسجلة، والمدة و الضغوط الدافعة النفخة (جنيه لكل بوصة مربعة، psi). توضح هذه المقالة إجراء خطوة بخطوة لتسجيل التيارات كامل الخلية الناجمة عن النفخ غاما – حمض أمينوبوتيريك (GABA) إلى خلية شريحة القشرية بريفرونتال. جدير بالذكر أن يمكن تطبيق نفس الإجراء مع تعديلات طفيفة إلى مناطق أخرى في الدماغ مثل في قرن آمون وفي المخطط، واستعدادات مختلفة، مثل الثقافات الخلية.
Introduction
تم تطوير تقنية التصحيح-المشبك، أداة أساسية للتحقيق في إشارات كهربائية في الخلايا العصبية، في السبعينات1،2. ميزة رئيسية لهذا الأسلوب أنه يوفر المعرفة في علاجات كيفية معينة (مثلاً، الدوائي) قد تغير في وظائف الخلايا العصبية أو قنوات في الوقت الحقيقي3. التقييم الدوائي لوظيفة الخلايا العصبية أثناء تسجيل في شريحة الدماغ كامل الخلية يتطلب تطبيق المخدرات مثل يضع أو الخصوم من مستقبلات محددة، على الخلايا العصبية التي يجري تسجيلها. يسمح هذا الأسلوب بتحديد التعديلات الخلايا العصبية التي تحدث بعد تطبيق دواء معين، مما يؤدي إلى فهم أفضل للخصائص الفسيولوجية والمرضية ل الخلايا العصبية4. على الرغم من أن الإدارة الدوائية يمكن أن تجري عن طريق أما نضح5 أو نفخة6، هذا الأخير هو تقنية متفوقة. وبخاصة: (ط) نفخة تطبيق سرعة الزيادات المخدرات تركز حول العصبية المسجلة إلى مستوى أن يتم منع الحساسية مستقبلات الغشاء؛ (ثانيا) حجم المخدرات ينفخ منخفض للغاية، حتى لا يكون هناك تأثير ضئيل على الحل حمام، مما يقلل من أي آثار غير مرغوب فيها من المواد الكيميائية التي تدار على شرائح المخ؛ وبالتالي (ثالثا) البروتوكول نفخة يمكن تعيين وحفظها، مما يجعل هذه التجربة استنساخه بدقة؛ (الرابع) التطبيق نفخة يمثل الاستخدام الاقتصادي ليضع/الخصوم، خاصة عندما تكون هذه الكواشف باهظة الثمن أو يصعب الحصول عليها.
وهنا سوف نركز على تسجيل كامل الخلية التيارات الناجمة عن النفخ GABA في الدماغ حادة استعداد شرائح، إعداد يحتوي على ميزة الدوائر الدماغ الحفاظ عليها جيدا نسبيا. كيف ندير التيارات المثبطة التي يسببها النفخ7 سوف تكون الموضحة في هذه المقالة. باستخدام السيزيوم (Cs+)-على أساس الحلول الداخلية، ويحمل الخلايا العصبية في 0 mV، سوف نقدم GABA-نفخة أثارت التيارات بوستسينابتيك المثبطة (ايبسكس) مع التفاصيل التقنية المناسبة. باستخدام نموذج الفأر من الاكتئاب الناجم عن حقن lipopolysaccharide (LPS)8، نظهر أن ايبسك انخفض انخفاضا كبيرا السعة التي أثارت من قبل نفخة غابا في شرائح من لبس حقن الفئران مقارنة بعناصر التحكم المركبة. هدفنا أن هذه المادة ينبغي أن تظهر كيف تقنية النفخ قابلاً للتطبيق على نطاق واسع لدراسات تهدف إلى تقييم تأثير أي مواد كيميائية أو مركبات أو المخدرات على أنشطة الخلايا العصبية في الدماغ شرائح.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
الحيوانية وجميع الحيوان أجريت التجارب وفقا للإجراءات التي أقرتها "لجنة أخلاقيات" البحوث الحيوانية في جامعة جنوب الصين عادي، وفقا للمبادئ التوجيهية "رعاية الحيوان" أنشئ المعهد الوطني الصحة-
1-"إعداد الحلول"
- إعداد 500 مل من السائل الدماغي النخاعي الاصطناعي القياسية (قام)، التي تحتوي على المكونات المذكورة في الأعمال المنشورة لدينا 7 كما هو موضح في الجدول 1.
قنينة
- استخدام الزجاج نظيفة مع المياه لإعداد حل قام طازجة. ملاعق مع المياه النظيفة والجافة قبل استخدام لإضافة كلوريد الصوديوم، بوكل، نة 2 بو 4، ناكو 3، MgSO 4، د-الجلوكوز، وإضافة كاكل 2 بعد وجود bubbled الحل مع 95% O 2/5% CO 2 الخليط لدقيقة ~ 20 (كما هو مفصل في الجدول 1) إلى 500 مل من المياه. يقلب حتى يذوب تماما. مسح
- تأكد من قام الكامل دون أي هطول الأمطار. ثم قم بضبط درجة الحموضة إلى 7.2-7.4. فقاعة مع خليط غازات تتكون من 95% O 2 و 5% CO 2 ل ~ 20 دقيقة
- تحضير 250 مل من محلول قطع شريحة التي تحتوي على المواد الكيميائية 7 المبينة في الجدول 2.
- إضافة بوكل، مجكل 2، نة 2 بو 4، ناكو 3، choline·Cl، د-الجلوكوز وإضافة كاكل 2 آخر كما هو مبين في 1.1.1، إلى 250 مل مياه وحل كما هو موضح في 1.1.1 و 1.1.2- شركة
- بعد محتدما مع 95% O 2/5% 2، ضع الحل في ثلاجة لمدة 15-20 دقيقة حتى يصبح الحل قطع المثلج والمجمد جزئيا.
ملاحظة: نحن نستخدم هذا الحل قطع عند صنع شرائح من شهر 1-2--الفئران القديمة؛ وقد تختلف الصيغة للفئران التي مضى عليها أكثر من شهرين. - "لبس إعداد" حل بيذوب في المحلول الملحي متساوي التوتر خالية من الذيفان العقيمة (0.9% كلوريد الصوديوم). ويدار لبس إينترابيريتونيلي (0.5 ملغ/كغ) وبدء تسجيل ح 2 لاحقاً.
2. إعداد شريحة قشرة Prefrontal
- تأخذ الحل قطع خارج الثلاجة ومجانسة للحصول طين. وضع الحل على الجليد وفقاعة باستمرار مع 95% O 2/5% CO 2-
- باستخدام مقص كبير وحاد، بسرعة قطع رأس ماوس ك وصف 9 وفورا وضع رأسه في كوب مليئة المثلج (0-4 درجة مئوية) قطع الحل.
- قص الجزء العلوي من الجمجمة على طول خط الوسط في اتجاه والذيلية الآنف مع مقص جيد وإزالة أجزاء الجمجمة الجانبية. إزالة الدماغ مع ملعقة الجميلة والإسقاط إلى الحل قطع الجليد.
ملاحظة: الخطوات 2، 2، 2-3 يجب أن يتم سريعاً (من الناحية المثالية < 1 دقيقة)-
ضع - الدماغ على غطاء طبق بيتري 9 سم مملوءة بالجليد. شطف في الدماغ مع الحل قطع الجليد. قطع المخيخ ولمبة شمي مع شفرة حلاقة.
- تطبيق cyanoacrylate الغراء للعينة حامل فيبرتوم. وضع كتلة الدماغ بعناية في قطره الغراء، روسترال الجانب الأعلى، وتزج فورا في حل قطع الجليد.
- ضبط صاحب بليد فيبرتوم بزاوية مقدارها 15 درجة فيما يتعلق بالطائرة الأفقي وإعداد 350-ميكرومتر شرائح المخ الاكليلية (تواتر الاهتزاز بليد = 85 هرتز، سرعة = 0.1 mm/s).
- باستخدام ماصة، نقل الشرائح إلى غرفة الإنعاش مليئة قام، احتضانها ح 1 (في RT) مع السطح المستمر من 95% O 2/5% CO 2-
3. تسجيل التصحيح كامل الخلية
- جعل زجاج البورسليكات ميكروبيبيتيس لاستخدامها كتسجيل كهربائي أو نفخة ميكروبيبيتيس وفقا للمبادئ التوجيهية المحددة في "دليل العمليات ساحبة". لتسجيل كهربائي، مقاومات نصيحة في حدود 4-6 م Ω، في حين قد ميكروبيبيتيس نفخة أقطار نصيحة في النطاق 2-5 ميكرومتر. إضافة مانع قناة نا + (ت، 1 ميكرومتر)، كتلة قناة نا + بسرعة ومن ثم إمكانات العمل، قام
- والحفاظ على معدل تدفق ثابت لهذا الحل من 2-3 مل/دقيقة في قاعة التسجيل، بمضخة تمعجية إلى غرفة وتطلع منه. فقاعة قام مع 95% O 2/5% CO 2 باستمرار لضمان بقاء الشرائح.
- نقل شريحة الدماغ في قاعة التسجيل باستخدام ماصة باستور معدلة نصيحة الجميلة التي قطعت لتتناسب مع حجم شريحة. تغطي الشريحة بنقطة ربط شريحة البلاتين بخيوط النايلون متوازية متباعدة ≥ 2 مم إلى جانب عقد الشريحة على المنصة-
- ملء ميكروبيبيتي التسجيل مع حل داخلي 7 (الجدول 3)، وملء ميكروبيبيتيس نفخة مع GABA في 10 ميكرومتر، 50 ميكرون، و 100 ميكرومتر (حله في قام)، أو قام بمراقبة المركبات-
- لمنع انسداد بالحطام، تطبيق الضغط الإيجابي الخفيفة استخدام المحاقن 1 مل قبل غمر مسرى التسجيل في قام. استخدام ميكرومانيبولاتور تحت مجهر (4 x الهدف العدسة)، ضع ميكروبيبيتي الكهربائي ونفخة التسجيل حيث تظهر التلميحات في وسط صورة الفيديو في جهاز العرض ( الشكل 1 أ)- ضبط التركيز المجهر (عدسة الهدف x 40) بينما يخفض تدريجيا ميكروبيبيتي نفخة
- ووضعه فوق العصبية التسجيل بزاوية مقدارها 45 درجة. الحفاظ على المسافة بين طرف ميكروبيبيتي النفخ والعصبية سجلت بين 20-40 ميكرومتر ( الشكل 1 ب). ببطء وبعناية نهج العصبية مع مسرى تسجيل وثم حرر الضغط الإيجابي. تطبيق شفط ضعيفة وقصيرة من خلال الأنبوب متصل بحامل الكهربائي لإنشاء ختم جيجا أوم. MV
- الحفاظ على الجهد في 0. بعد تشكيل ختم جيجا أوم، تعويض سريع وبطيء السعة يدوياً أو تلقائياً. ثم تطبيق شفط قصيرة وقوية من خلال الأنبوب المذكور أعلاه للحصول على وضع كامل الخلية. وضع
- إييبسك سجل في الجهد-المشبك. تطبيق ضغط الغاز منخفض (النيتروجين، 4-6 psi) إلى ميكروبيبيتي النفخ استخدام بيكوسبريتزير التي تسيطر عليها مولد خطوة جهد الرئيسي 8 لتسليم غابا فردي أو زوجي نفث ( الشكل 2).
- تغيير مدة النفخ الحصول على أفضل النتائج إييبسك ( الشكل 3)، وقياس إييبسك في نموذج الاكتئاب الناجم عن لبس ( الشكل 4).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تقنية النفخ يسمح للباحثين لدراسة أثر المخدرات على مستقبلات خاصة على سطح خلية معينة. في هذه المقالة، نحن نركز على التيارات توسط مستقبلات GABA. ويبين الشكل 1 ميكروبيبيتيس النفخ والتسجيل. للقضاء على أي تأثير على الخلايا العصبية المسجلة من الضغوط المادية المتولدة عن النفخة، قام ونفث السكروز (الشكل 2أ) تستخدم كعناصر تحكم. يمكن منع رد فعل نفخة غابا (أسود) بواسطة مثبط مستقبلات GABA، مثل بيكروتوكسين10من المبلغ عنها، بينما يمكن استردادها عند خط الأساس التي قام يغسل خارج (الأزرق)، كما هو مبين في الشكل 2ب. جدير بالذكر أن يدفع قام ولا نفخة سكروز استجابة، مما يوحي بأن ردود فعل نفث غابا الفسيولوجية وهي توسط مستقبلات GABA الموجودة على سطح الخلية مسجل. منحنيات استجابة الجرعة والمدة نفخة مبينة في الشكل 3.
لبس قد ثبت أن تغيير أنشطة الخلايا العصبية وسلوك الحيوانات، ولكن أثره على الردود بوساطة مستقبلات GABA ليست معروفة جيدا. عندما نقارن التيارات الناجمة عن نفث GABA في الدماغ شرائح من حقن لبس وسيارة مكافحة الفئران، نلاحظ الاتساع اللجنة التوجيهية انخفاضا كبيرا بسبب لبس العلاج (الشكل 4).
الشكل 1 . رسم تخطيطي للقطب ميكروبيبيتي وتسجيل نفخة.
(أ) المسافة بين النفخ وتسجيل ميكروبيبيتيس. (ب) ميكروبيبيتي نفخة (يسار) ومسرى التسجيل (يمين) على سطح شريحة الدماغ. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . بيكروتوكسين الحصار المفروض على اللجنة التوجيهية الناجمة عن نفخة GABA.
(أ) "قام النفخ" والسكروز (50 ميكرومتر) الحث على أي رد. (ب) النفخ 50 ميكرومتر غابا الحث اللجنة التوجيهية (أسود) (نفخة المدة = 200 مللي ثانية، 4-6 psi) في قام المحتوية على تتكس (1 ميكرومتر)، كنقكس (20 ميكرومتر) و AP5 توسط (50 ميكرومتر) لعرقلة إمكانات العمل والتيار ضادات مستقبلات امبا ونمدا. اللجنة التوجيهية التي يسببها غابا محظور بواسطة تطبيق حمام مثبط مستقبلات GABA، 100 ميكرومتر بيكروتوكسين (أحمر). اللجنة التوجيهية للشفاء بعد الغسيل من بيكروتوكسين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . الجرعة والمدة نفخة منحنيات الاستجابة.
(أ) "عينة إيبسكس" الناجمة عن 10 و 50 و 100 ميكرومتر غابا (نفخة المدة = 50 مللي ثانية، 4-6 psi). (ب) المدة نفخة منحنيات الاستجابة. أسود، n = 11؛ أحمر، n = 8؛ الأزرق، n = 10؛ متعدد الحدود التي تناسب. وترد البيانات كوسيلة لتجارب متعددة (8 ≤ n دي وان وان)؛ أشرطة الخطأ تشير إلى التيارات المتكررة sem. (ج) أثارت قبل غابا (50 ميكرومتر) نفث على نفخة بين فترات s 1 أو 2 أو 3 (نفخة المدة = 100 مللي ثانية، 4-6 psi). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 -هو خفض السعة ايبسك في لبس حقن الفئران مقارنة بعناصر مركبة.
النفخ غابا الحث انخفاض كبير سعة اللجنة التوجيهية في حقن لبس مقابل مراقبة الخلايا العصبية (المالحة، باسكال ± 1.93 19.74/الجبهة الوطنية؛ لبس، باسكال ± 1.30 14.10/الجبهة الوطنية؛ p = 0.02). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| مادة | غ/مول | تركيز (مم) | الوزن (غرام/لتر) |
| كلوريد الصوديوم | 58.443 | 119 | 6.9547 |
| بوكل | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| نة2بو4 | 137.99 | 1 | 0.1380 |
| ناكو3 | 84.007 | 26.2 | 2.2010 |
| مجسو4 | 120.366 | 1.3 | 0.1565 |
| د-الجلوكوز | 198.17 | 11 | 2.1799 |
| كاكل2 | 110.98 | 2.5 | 0.2775 |
الجدول 1. قام تسجيل.
| مادة | غ/مول | تركيز (مم) | الوزن (غرام/لتر) |
| بوكل | 74.551 | 2.5 | 0.1864 |
| مجكل2 | 95.211 | 7 | 0.6665 |
| نة2بو4 | 137.99 | 1.25 | 0.1725 |
| NaHCO3 | 84.007 | 25 | 2.1002 |
| Choline· Cl | 139.63 | 115 | 16.0575 |
| د-الجلوكوز | 198.17 | 7 | 1.3872 |
| كاكل2 | 110.98 | 0.5 | 0.0555 |
الجدول 2. شريحة قطع الحل.
| مادة | غ/مول | تركيز (مم) | الوزن (غرام/لتر) |
| غلوكونات Cs | 328.052 | 100 | 32.8052 |
| CsCl | 168.36 | 5 | 0.8418 |
| هيبيس | 238.301 | 10 | 2.3830 |
| مجكل2 | 95.211 | 2 | 0.1904 |
| كاكل2 | 110.98 | 1 | 0.1110 |
| باتا | 476.43 |
الجدول 3. حل داخلي لتسجيلات التصحيح كامل الخلية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تطبيق نفخة يستخدم على نطاق واسع لتقييم مستقبلات بوستسينابتيك الدالة3،،من47، ولكن يتطلب مراقبة دقيقة في كل تجربة. يصف لنا هنا إجراء إشراك لقط تصحيح كامل الخلية، مما يدل على نفخة غابا الناجم عن إيبسكس (أي، ايبسكس) في الدماغ القشرية بريفرونتال شرائح. مقاومة مسرى التسجيل هو MΩ حوالي 5، بينما قطر تلميح ميكروبيبيتيس نفخة على وشك الضغط 2-5 ميكرومتر. نفخة بين 4-6 psi: هذا النطاق أمر بالغ الأهمية، ارتفاع ضغط قد يسبب تلف الخلايا العصبية، بينما يمكن أن يؤدي انخفاض ضغط عدم كفاية تنشيط مستقبلات GABA بوستسينابتيك. المسافة الأفقية من غيض ميكروبيبيتي نفخة إلى الخلايا العصبية المسجلة عن 20-40 ميكرومتر (قطرها 1-2 الخلايا العصبية)، والزاوية بين سطح ميكروبيبيتي وشريحة نفخة هو حوالي 45°. هو غيض ميكروبيبيتي نفخة عمودياً 20-40 ميكرون فوق الشريحة محور (ع). ينبغي أن تكون مدة النفخ في النطاق السيدة 10-150 في ظل الظروف المذكورة أعلاه، نفث من 10-50 ميكرون غابا تحفز استجابة الخلايا العصبية مناسبة والسعة إييبسك والحركية المعلمات التي تم الحصول عليها يتم استنساخه. على الرغم من أن وصف البروتوكول هنا يركز على تطبيق نفخة لتصحيح شريحة، أيضا مناسبة للتسجيلات في الثقافات العصبية، كما هو مبين في الأعمال المنشورة لدينا7.
كما نعرض هنا ايبسكس الناتجة عن تطبيق نفخة إقران GABA. نبض إقران البروتوكولات قد استخدمت على نطاق واسع لتقييم خصائص presynaptic7،11، ولكن الآثار بوستسينابتيك المحتملة، مثل التغييرات في مستقبلات الناقل العصبي ربط معدل وملزمة تقارب، التي يمكن أن تؤثر لا يمكن تحديد نسب نبض إقران، قبل presynaptic نبض إقران التحفيز. ينص البروتوكول على الموضحة في هذه المقالة طريقة لتوضيح التغييرات بوستسينابتيك في الاستجابة للمحفزات قطار نبض زوجي وحتى. تخفيض السعة ايبسك في قشرة بريفرونتال للبس حقن الفئران تشير إلى أن مستويات محوره أو نشاط مستقبلات GABA قد تكمن وراء التغيرات السلوكية الناجمة عن لبس.
على الرغم من ذلك، كمعظم تقنيات إيصال المخدرات، من الصعب معرفة تركيز غابا الضبط التوصل إلى الخلية الهدف، لا يزال من الممكن للحفاظ على تركيز غابا في مستويات معينة في الأنسجة التي تتفق مع نوع يستخدم ميكروبيبيتيس، ومع معلمات هذه نفخة ضغط محرك الأقراص والمسافة. وفي حالتنا، هو حجم الحل ينفخ ميليلتر حوالي 1.1 في مدة 100 مللي ثانية. وهكذا، يسمح النفخ الدراسات الكمية أن يؤديها7،12.
إعداد شرائح المخ السليمة من قشرة prefrontal الحاد أمر بالغ الأهمية لنفخة تسجيل الإجراء يصف لنا، وينبغي مراعاة النقاط التالية. أولاً، تشريح الدماغ وفصل القشرة بريفرونتال بسرعة (< 1 دقيقة)، وثم الاحتفاظ كتلة الدماغ في حل قطع المثلج لمدة لا تزيد عن 1 دقيقة. المقبل، الصق كتلة الدماغ على رأس صاحب العينة فيبرتوم محكم، أو خلاف ذلك قد تعدت كتلة الدماغ خلال تمزيقها. يجب تعيين سرعة وتردد فيبرتوم إلى توليد حتى، سليم شرائح. ويجب بذل الجهود لإجراء جميع أعلاه إجراءات 0-4 درجة مئوية لتقليل استثارة الخلايا العصبية.
تجدر الإشارة إلى أن الحل قطع يصف لنا في هذه المادة ينبغي أن تستخدم لمدة شهر 1-2--الفئران القديمة. للفئران الأكبر سنا (أي > 3 أشهر)، ينبغي الاستعاضة عن حل قطع ك وصف13. تقنية النفخ ينطبق على مجموعة من التجارب المشبك التصحيح التي تشمل العلاجات الدوائية، ويمكن أيضا استخدامها لاختبار أثر المخدرات على النشاط الكهربائي للخلايا العصبية أي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
الكتاب أود أن أشكر المنظمات التالية: الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية (31171018، 31171355)، والعلوم والتكنولوجيا شعبة من قوانغدونغ (2013KJCX0054)، (مؤسسة العلوم الطبيعية بمقاطعة قوانغدونغ 2014A030313418، 2014A030313440)، ومن قوانغتشو العلوم والتكنولوجيا المكتب (201607010320).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass Borosilicate micropipettes | Shutter Instruments | BF150-86-10 | 1.50 mm outer diameter; 0.86 mm inner diameter |
| Micropipette Puller | Shutter Instruments | MODEL P-97 | Flaming/Brow Micropipette Puller |
| Micromanipulators | Shutter Instruments | MP-285 | |
| Computer controlled Amplifier | Molecular Devices | Multiclamp 700B | |
| Digital Acquisition system | Molecular Devices | Digidata 1440A | |
| Imaging Camera | Nikon | 2115001 | Inspection equipment |
| Microscopy | Nikon | Eclipse FN1 | |
| Master 8 | A.M.P.I. | Master-8 Pulse stimulator | |
| Vibratome Slicer | Leica | VT 1000S | |
| Razor blade | Gillette | 74-S | FLYING EAGLE |
| Video monitor | Panasonic | WV-BM 1410 | |
| 502 Glue | Deli | 7146 | Cyanoacrylate Glue |
| Peristaltic pump | Shanghai JIA PENG Corporation | BT100-1F | |
| Video Camera | Olympus America Medical | OLY-150 | |
| Transfer Pipets | Biologix | 30-0138A1 |
References
- Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260 (5554), 799-802 (1976).
- Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain. Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).
- Eyo, U. B., et al. Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus. J Neurosci. 34 (32), 10528-10540 (2014).
- Dickinson, G. D., Parker, I. Factors determining the recruitment of inositol trisphosphate receptor channels during calcium puffs. Biophys J. 105 (11), 2474-2484 (2013).
- Lee, J., et al. Columnar distribution of activity dependent gabaergic depolarization in sensorimotor cortical neurons. Mol Brain. 5, 33 (2012).
- Glykys, J., Mody, I. The main source of ambient GABA responsible for tonic inhibition in the mouse hippocampus. J Physiol. 582, (Pt 3) 1163-1178 (2007).
- Chen, M., et al. APP modulates KCC2 expression and function in hippocampal GABAergic inhibition. Elife. 6, (2017).
- Dunn, A. J., Swiergiel, A. H. Effects of interleukin-1 and endotoxin in the forced swim and tail suspension tests in mice. Pharmacol Biochem Behav. 81 (3), 688-693 (2005).
- Engel, D. Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons. J Vis Exp. (117), (2016).
- Wondolowski, J., Frerking, M. Subunit-dependent postsynaptic expression of kainate receptors on hippocampal interneurons in area CA1. J Neurosci. 29 (2), 563-574 (2009).
- Yang, L., Wang, Z., Wang, B., Justice, N. J., Zheng, H. Amyloid precursor protein regulates Cav1.2 L-type calcium channel levels and function to influence GABAergic short-term plasticity. J Neurosci. 29 (50), 15660-15668 (2009).
- Huo, Q., et al. Prefrontal Cortical GABAergic Dysfunction Contributes to Aberrant UP-State Duration in APP Knockout Mice. Cereb Cortex. , (2016).
- Zhou, W. L., Gao, X. B., Picciotto, M. R. Acetylcholine Acts through Nicotinic Receptors to Enhance the Firing Rate of a Subset of Hypocretin Neurons in the Mouse Hypothalamus through Distinct Presynaptic and Postsynaptic Mechanisms. eNeuro. 2 (1), (2015).
