التقنيات الجراحية لموضع القسطرة واستئصال 5/6 في نماذج مورين للغسيل الكلوي البريتوني

Summary

يوضح هذا المقال طريقة للموضع الجراحية في الفئران القسطرة داخل تعلق على منفذ وصول التي يتم وضعها في الجزء الخلفي من الحيوان. وعلاوة على ذلك، وهذا ما يفسر الإجراء المتعلق استئصال 5/6 ليشابه الدولة يوريمي المرضى PD.

Abstract

الديلزه الصفاقيه (PD) هو علاج الاستبدال كلوي متسقة على الإدارة والانتعاش اللاحق للسائل الملين في التجويف الصفاقى لاستنزاف المياه والسامة من الأيض وظيفيا كفاية الكلي غير قادرة على القضاء عليها. ولسوء الحظ، أن هذا الإجراء تتدهور الصفاق. يؤدي تلف الأنسجة بداية التهاب للشفاء من الإصابة. إذا استمرت الإصابة ويصبح التهاب مزمن، فإنه قد يؤدي إلى التليف، وأمر شائع في العديد من الأمراض. PD والتهاب مزمن وتليف، جنبا إلى جنب مع عمليات محددة أخرى تتصل بهذه البلدان، تؤدي إلى تدهور القدرات ultrafiltration، مما يعني الفشل ووقف اللاحقة لهذا الأسلوب. العمل مع العينات البشرية يوفر معلومات حول هذا التدهور ولكنه يعرض القيود التقنية والأخلاقية للحصول على خزعات. نماذج حيوانية ضرورية لدراسة هذا التدهور نظراً إلى أنها في التغلب على أوجه القصور هذه.

وضع نموذج ضخ ماوس مزمنة في عام 2008، الذي يستفيد من مجموعة واسعة من الفئران المعدلة وراثيا، فتح إمكانية دراسة الآليات التي ينطوي عليها. ويستخدم هذا النموذج مخصص جهاز مصمم للفئران، تتألف من قسطرة المرفقة إلى منفذ وصول التي تم وضعها تحت الجلد في الجزء الخلفي من الحيوان. ويتجنب هذا الإجراء المستمر ثقب الصفاق خلال التجارب الطويلة الأجل والحد من العدوى والتهاب بسبب حقن. وبفضل هذا النموذج، وقد تتميز البريتوني الأضرار الناجمة عن التعرض المزمن للسوائل PD والتضمين. هذا الأسلوب يسمح ضخ كميات كبيرة من السوائل ويمكن استخدامها لدراسة الأمراض الأخرى ضروري فيها التطعيم من عقاقير أو مواد أخرى على مدى فترات طويلة من الزمن.

يوضح هذا المقال طريقة لوضع القسطرة الجراحية في الفئران. وعلاوة على ذلك، وهذا ما يفسر الإجراء المتعلق استئصال 5/6 لتقليد دولة موجودة في المرضى PD الكلوي.

Introduction

وظائف الكلي وأمراض الكلي

الكلي هي الأجهزة الأساسية المعنية بالتوازن وتنقية الدم وإنتاج الهرمونات. وهناك مختلف الظروف التي تؤدي إلى الفشل الكلوي وإلى بداية اللاحقة من أورميا، التي قد تم تعريفها بأنها مجموعة الأعراض الجهازية بسبب تراكم الفضلات في الدم الاحتفاظ بسبب اضطرابات وظيفة الكلي¹. وعلاوة على ذلك، نظراً لإمكانية التماثل الساكن يتأثر أيضا عندما يكون هناك فشل كلوي، ارتفاع ضغط الدم بسبب الحمل الزائد لوحدة التخزين قد تحدث، هو أمر خطير كما أنه يمكن أن يؤدي إلى فشل القلب¹. عندما تكون القدرة الوظيفية للكلى أقل من 10% إلى 15%، المريض يجب أن يخضع لأحد الخيارات العلاجية التالية: غسيل الكلي والغسيل الكلوي البريتوني (PD) أو زرع الكلي.

PD هو خيار مثيرة لاهتمام الذي يسمح للمرضى مواصلة العلاج من الراحة من منازلهم أو عمليا في أي مكان، وبالتالي تجنب الحاجة إلى مستشفى كثرة الزيارات والإقامة. تقنية PD يزيل جزيئات سامة صغيرة والمياه الزائدة الناتجة عن الجسم² عن طريق تقطير السوائل ناضح (الغسيل الكلوي البريتوني السوائل، قوات الدفاع الشعبي) في التجويف الصفاقى. ينشئ هذا تقطير ناضح التدرج اللازمة لتبادل الذوائب والمياه بين الشعرية البريتوني وقوات الدفاع الشعبي، عملية تعرف باسم أولترافيلتريشن (الجبهة المتحدة).

البريتوني الضرر الناجم عن الغسيل الكلوي البريتوني

التجويف الصفاقى مغطى بغشاء (م) تتألف من أحادي الطبقة الخلايا mesothelial يستريح في مصفوفة، الذي يضم أيضا بعض الأوعية الدموية والليفية والضامة والسكان خلية أخرى. ولسوء الحظ، الغشاء البريتوني دائماً يعاني بعض التعديلات أثناء العلاج PD، مثل المبرمج وفقدان الخلايا mesothelial، وانتقال mesenchymal mesothelial (MMT) والخلايا البطانية (نهاية-MT)، تجنيد الخلايا التحريضية و فيبروسيتيس، التعديلات والأوعية الدموية، والأوعية، ليمفانجيوجينيسيس و/أو التليف^3،4،5،،من^67،،من⁸⁹. هذه التعديلات المسؤولة عن تطوير الجبهة المتحدة القدرة فشل¹⁰، الذي يحول دون استمرار العلاج، التي تتطلب أن المريض يجب أن يحصل علاج بديل البقاء على قيد الحياة (غسيل الكلي أو زرع الكلي) . ولذلك، من الضروري لهؤلاء المرضى، إلى تأخير أو التحكم في تنمية هذه التعديلات البريتوني.

كان قد تردد أن أورميا وحدها قد يسبب التهاب¹¹، ولكن أهم العوامل المحلية بيوينكومباتيبيليتي PDF. معظم ملفات Pdf استخدام الجلوكوز كعامل ناضح، مما يسبب التهاباً. سبب PDF مرات التخزين والتعقيم، يعاني الجلوكوز عملية تدهور، وظهور منتجات جديدة من رد الفعل هذا، توليد المزيد من التهاب،^12،MMT والمبرمج¹³. وعلاوة على ذلك، هناك أيضا إمكانية للأضرار الميكانيكية بسبب طريقة تقطير. كل هذه العوامل، يتصرفون بشكل مستمر، يمكن أن تولد دولة تحريضية المستمرة والمتكررة، مما يؤدي إلى التهاب مزمن، مما يقود إلى تدهور الأغشية، وقاطع، فشل الجبهة المتحدة. كيف يمكن تخفيض أو تجنب هذا الضرر لا يزال مدعاة للدراسة.

تحليل وضع الآفات: من العينات البشرية لنماذج حيوانية

العمل مع خزعات البشرية عاملاً مقيداً بسبب صعوبة الحصول على عينات الأنسجة. يمكن الحصول على هذه العينات فقط من الجراحات إجراؤها بسبب عطل القسطرة أو الزرع، عادة بعد سنوات من العلاج PD. هذا النهج مفيداً لتحليل التغيرات المرضية التي عانت من غشاء البريتوني مكشوف لقوات الدفاع الشعبي، ولكن لا يكفي لدراسة تطور العملية. إمكانية أخرى لتحليل الخلايا التي استنزفت من مياه الغسيل الكلوي، ولكن هذا لا يزال فشل في تقديم سيناريو كاملة. دمج كلا التقنيات الممكن فقط مع نماذج حيوانية. هيكل البريتوني مماثلة بين الثدييات، وذلك هناك نماذج مع مختلف أنواع الحيوانات. وهناك عدد قليل من الدراسات التي تقوم على الأغنام (روديلا et al. ¹⁴ وباريل et al. ¹⁵) وارنب نماذج^{17 16،}؛ ومع ذلك، أصغر الحيوانات الأفضل كما أنها أسهل للبيت والحفاظ على، وأيضا أكثر اقتصادا. ويتيح استخدام الفئران^18،19،،من^2021،22،،من²³²⁴ أقصر وقت معاملة اللازمة لمراقبة التعديلات morpho الوظيفية. قد مثلت نموذجا مفيداً للغاية لاستكشاف قضايا مختلفة مثل تأثير الأدوية المضادة تليفية مثلاً BMP-7 (العظام morphogenic البروتين-7)²⁵ و RAS (نظام إنزيم الرينين-انجيوتنسين) استهداف^{26،27 , 28}.

ومع ذلك، برز نموذج مورين كنموذج مثالي مع العديد من الفوائد على الآخرين. الميزة الأكثر إثارة للاهتمام تعديل إمكانية استخدام جينياً الفئران لدراسة أساس الضرر البريتوني الجزيئية والخلوية. وفي الواقع، كثيرا ما تستخدم الفئران للتحليل للعديد من الأمراض، كما أن هناك العديد من سلالات مختلفة مع مختلف الخلفيات الوراثية المعروفة. وتشمل المزايا الأخرى انخفاض المساحة المطلوبة للإسكان، وانخفاض تكلفة التجارب (بسبب حجم أصغر الحيوانات) وتوافر المواد الكاشفة وسهولة التعامل مع كمية متزايدة من المعلومات المتاحة في سلالات مختلفة من الفئران نظراً لأنها كانت الحيوانات الأكثر استخداماً في البحوث.

نموذج يستند إلى الفئران تستخدم جهاز مزروع النموذج الأكثر المنشأة حديثا ل PD^29،30، وقد ثبت أن تحاكي البريتوني تدهور لحقت بالمرضى PD بسبب التعرض لملفات Pdf. وقد تعاونت هذا النموذج لفهم العمليات المرضية المتورطين^31،،من³²³³. وعلاوة على ذلك، قد استخدمت للتحقق من صحة مختلف العلاجات الممكنة للتخفيف من حدة هذا التدهور استخدام المغيرون محصنة والعقاقير المضادة للالتهابات وأخرى مضادة تليفية والعوامل المضادة-الأوعية، مثل مثبطات كوكس-2 (السيكلواوكسيجيناز-2) ³⁴، يضع فهمته-γ (بيروكسيسومي ادعاءا المنشط مستقبلات-γ)³⁵، تاموكسيفين³⁶، باريكالسيتول (فيتامين (د) مستقبلات منشط الذي ينظم رد فعل المناعة)³⁷و³⁸ من ربمسن ونيبيفولول ³⁹.

تطوير النموذج الماوس مع قسطرة مزروع

الهدف من هذا النموذج يشابه، قدر الإمكان، هذه التقنية المستخدمة في البشرية PD المرضى، مما يسمح بإجراء العلاجات الموسعة لشعبة المشتريات في الحيوانات الصغيرة. وحتى الآن، تم اختبار ثلاث تقنيات لتقطير السوائل غسيل الكلي في الصفاق في الفئران. أول واحد، ثقب المكفوفين من الجبهة جدار البطن، مثير للجدل بسبب مخاطر متعددة قد تتعرض لها، مثل الأضرار البريتوني، والنزيف، وثقب المنجز عمياء، الحشوي. الأسلوب الثاني هو ما يسمى “الدائمة النظام المفتوح”، الذي تم وضع جهاز لحقن السوائل خارج الجسم. هذا الإجراء الأكثر مماثلة للتي يؤديها في البشر. ومع ذلك، لا تسمح بتطوير التجارب الطويلة الأجل، كما أنها قد تزيد من فرص الإصابة ب، وعموما يتطلب استخدام التخدير لغرس قوات الدفاع الشعبي، التي قد تتداخل مع النتائج. الأسلوب الثالث هو “نظام مغلق”. مع هذا النهج، يقع كامل الجهاز المستخدم لتقطير السوائل داخل جسم الحيوان. يتم حقن السائل بإبرة عن طريق منفذ وصول، التي توضع تحت الجلد. هذا الإجراء يقلل من خطر العدوى البريتوني والنزيف، فضلا عن الحاجة للتخدير.

لدراسة تأثير تبولن في شعبة البرامج، كان أيضا نموذجا مورين الأخيرة المقرر⁴⁰ استناداً إلى نموذج PDF التسريب بالقسطرة. يجمع هذا النموذج في تقنية رواية القيام استئصال في الفئران، مما يقلل من وظيفة الكلي. وقد وضعت في هذه المادة، تعديل البروتوكول تستخدمهم فيرانتيلي et al. في عام 2015⁴⁰ . يسمح هذا البروتوكول الجديد يقلل من طول الجرح أثناء جراحة زرع القسطرة أثناء استئصال، وتيسير الوصول إلى الكلي.

Protocol

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة البيولوجيا الجزيئية مركز سيفيرو أوتشوا (مدريد، إسبانيا). ملاحظة: استخدمت C57BL/6J الفئران الإناث الذين تتراوح أعمارهم بين 12 و 14 أسبوعا ووزنها حوالي 20 غ في بداية الدراسة. جميع الحيوانات تم إيواء تحت الظرو?…

Representative Results

ويبين الشكل 1 جميع المواد المطلوبة لاتباع الإجراءات الموضحة في قسم البروتوكول. على سبيل المثال، الفئران المقدمة أو عدم استئصال (8 الحيوانات في كل مجموعة) (الشكل 2) تعرضت خلال 40 يوما (اثنين الحقن يوميا، الانتظار ساعتين على الأقل بين على حد سو?…

Discussion

البيانات المنشورة أول تحليل التعديلات PD باستخدام تقنية “إغلاق نظام” أجريت في 2009²⁹ . نظام إغلاق هذا يعني أن الجهاز أكمله يقع داخل الجسم ويتم حقن السائل بإبرة عن طريق منفذ وصول. المشكلة التقنية الأكثر أهمية في المدى الطويل نماذج حيوانية لضخ السوائل عن طريق قسطرة هو حدوث إعاقة. الخ…

Materials

Minute Mouse Port 4French with retention beads and cross holes	Access technologies	MMP-4S-061108A
Posi-Grip Huber point needles 25 ga. X 1/2´´	Access technologies	PG25-500
High Temperature Cautery Kit	Bovie	18010-00
Forane	abbVie	880393.4 HO
non absorbable suture 6/0	Laboratorio Agaró	6121
Scissors	Fine Science Tools	14079-10
forceps	Fine Science Tools	11002-12
clamp	Fine Science Tools	13002-10
Buprenorphine 0,3 mg/ml			pharmaceutical product
cotton swabs			pharmaceutical product
Dalsy (Ibuprofen) 20mg/mL oral suspension	AbbVie S.R.L.		pharmaceutical product