Homeobox 유전자는 종종 종양 성인 유기 체와 관련 된 규제 유전자. 우리 immunohistochemical와 실시간 PCR 분석, 정상 및 염증 코 거칠어 고 가능한 진단 및 치료 대상으로 그들을 사용 하려면 sinonasal 신생 그들의 비교 식을 조사.
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방법 논문
Sinonasal Carcinomas과 후 각 Neuroblastomas에 대 한 두 가지 가능한 분자 마커로 OTX1 OTX2의 식별
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
OTX homeobox (HB) 유전자는 배아 morphogenesis 그리고 성인 유기 체에 있는 후 각 상피의 개발에 표현 됩니다. 이 유전자에서 발생 하는 돌연변이 종종 인간의 tumorigenesis 관련이 있습니다. 데이터가는 OTX 유전자와 비 강 종양 간의 가능한 상관 관계에 관한 오늘 사용할 수 있습니다. 이 작품의 목적은 경우 OTX1 및 OTX2 분자 마커 비 강 종양의 개발에서로 간주 될 수 있습니다 이해 하는 것입니다. 우리가 선택한 immunohistochemical 및 실시간 PCR 분석 통해 OTX1 및 OTX2 유전자의 표정을 조사 하 강과 sinonasal adenocarcinomas. 모두 OTX1 OTX2 했다 결 석 sinonasal Intestinal 형 Adenocarcinomas (ITACs)의 모든 샘플에서. OTX1 mRNA OTX2 mRNA 후 각 Neuroblastomas (기능)에 표현 하는 동안 비 장 유형 Adenocarcinomas (NITACs)에 확인 되었다. 우리 OTX1 와 OTX2 유전자에 대 한 차동 유전자 발현 sinonasal 종양의 종류를 구별 하는 유용한 분자 마커 수 있습니다 설명 했다.
서론
OTX HB 유전자 초파리 orthodenticle 유전자 (otd)의 척추 homologue 그리고 그들은 일반적으로 배아 morphogenesis 동안 표현 녹음 방송 요인에 대 한 인코딩 하지만 그들은 또한 다른 기능을 가진 성인 유기 체에 표현 될 수 있습니다. . 배아 개발 하는 동안 그들은 셀 정체성, 세포 분화, 및 몸 axis¹의 위치 지정을 제어 합니다. OTX 가족 포함 OTX1 와 OTX2 유전자는 서로 다른 기능을 표시 합니다. OTX1 두뇌와 감각 기관이 개발에 참여 하고있다. 성인 유기 체에서 그것은 감각 기관에서 표현 되며 뇌2;의 앞쪽 엽의 낮은 수준에서 복사했습니다 그것은 또한 조, 만능 조 혈 및 조상 세포3에 표현 되 고 있는 역할을 하고있다. OTX2 rostral 머리의 개발에 참여 하 고는 morphogen로 그것의 번역된 단백질 행위는 다른 유전자를 통해 그라데이션 생성 하기 때문에 활성화 또는 따라서 셀에 기여 spatio 시간적 방식 억압 확산 그리고 감 별 법입니다. 성인 유기 체에서 OTX2 맥락 막 신경 총 및 송과선
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프로토콜
모든 연구 동의 서 면 및 바레 세에서 Insubria의 대학 윤리 위원회에 의해 승인와 (1975) 헬싱키의 선언에 따르면 수행 했다.
1입니다. 샘플의 수집
- 수집 하 고 모든 인간 Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) 샘플14머리와 목 종양의 WHO 분류에 따라 서로 다른 하위 그룹으로 나눕니다.
참고: 여기 우리는 다음 예제 사용: 일반 sinonasal 점 제어 (10 샘플); 거꾸로 유 두 종 (IP, ICD O 코드 8121/1); Sinonasal 그것 (ICD O 코드 8144/3, 32 샘플); NITAC (ICD O 코드 8140/3, 12 샘플); Adenoid 낭 성 암 (ACC, ICD O 코드 8200/3); Pleomorphic Adenoma (PA, ICD O 코드 8941/3); (ICD O 코드 9522/3, 13 샘플); 가난 하 게 분화 신경 내 분 비 암 종 (PDNEC, ICD O 코드 8041/3, 19 샘플); 신경 내 분 비 종양 (NET, ICD O 코드 8041/3).
2입니다. immunochemistry
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결과
정상 점 막에서 OTX 유전자 ciliated pseudostratified 형 호흡 상피와 submucosal 선 세포 (그림 1A)에 대 한 강력 하 고 동종 핵 반응을 관찰합니다. 우리는 모든 NITACs 샘플에 (그림 1B), 작은 동안 또는 immunoreactivity 결 석 OTX1 핵 식을 ITACs (그림 1C)에서 강조 했다 발견. 강렬한 immunoreactivity는 모든 기능 (그림 1D);에 PDNECs, 중 OTX 식 강도에 긍정적인 세포 (그림 1E)의 백분율 변화. 통계 분석 치 평방 또는 피셔의 정확한 시험 수행 Immunohistochemical 시연 OTX 그것 견본에서 .......
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토론
이 연구는, mRNA 수준에 따라 처음으로 보여줍니다 OTX1 및 OTX2 HB 유전자가 정상적인 sinonasal 점 막과 submucosal 선, 염증 성 폴립, sinonasal Schneiderian 갑, 그리고 다른 표현 상피와 neuroectodermal 신생, 편평 carcinomas, 비-장의 유형 sinonasal adenocarcinomas, 침 샘 타입 종양, 신경 내 분 비 신생 및 기능을 포함 하 여
수정 및 문제 해결:
RNA 저하를 방지 하려면 우리 병 리의 실험실에서 deparaffinization 프로토콜을 수행 합니다. 후에 우리가 긁힌 슬라이드, 모든 샘플 급속 하 게 냉각 되었고 추가 사용까지 드라이 아이스에 저장. 우리는 층 류 흐름 안전 후드 무 균 실험 조건 유지 하 고 RNA 오염 방지 살 균 팁 펫 전용된 세트를 사용 하 여 모든 후속 분석을 수행 합니다.
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
이 작품은 센트 가족 Strumenti 사크 dell'Insubria, 피코 Comunitaria del Varesotto, 피코 델에 의해 지원 되었다 몬테 디 롬바르디아와 피코 안 나 빌라 e 펠리 Rusconi.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| RecoverAll 총 핵산 분리 | Applied Biosystem | AM1975 | |
| 고용량 cDNA 역전사 키트 | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| ACTB 프로브 | Applied Biosystem | 생산 중단. 저작권으로 보호되는 염기서열 | |
| OTX1 프로브 | Applied Biosystem | 생산 중단. 저작권으로 보호되는 염기서열 | |
| OTX2 프로브 | Applied Biosystem | 생산 중단. 저작권에 의해 보호되는 서열 | |
| Acqueous Hydrogen Peroxide | Merk | 1072090250 | |
| Citrate Buffer | , Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | 생산 중단. 카탈로그 번호 not available | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
참고문헌
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor....
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재인쇄 및 허가
