Summary
Gjeldende protokollen presenterer eksperimentelle prosedyrer for å stimulere kulturperler makrofager å være utstyrt med evne til å slippe molekylær faktorer som fremmer neurite utvekst. Behandling av Nevron-macrophage co kulturer induserer makrofager å produsere betinget medium som besitter sterke neurite utvekst aktivitet.
Abstract
Det er sterke bevis for at makrofager kan delta i gjenfødelse eller reparasjon av skadet nervesystemet. Her beskriver vi en protokoll som makrofager hjulpet produsere betinget medium (CM) som fremmer neurite utvekst. Voksen dorsal root ganglion (DRG) neurons er akutt avstand og belagt. Etter neurons knyttes stabilt, er peritoneal makrofager co kultivert på en celle kultur setter kledde på samme godt. Dibutyryl syklisk AMP (db-cAMP) gjelder co kulturer 24 h, som i cellekultur sett som inneholder makrofagene flyttes til et annet godt å samle CM 72 h. CM fra co kulturer behandlet med db-leiren når en separat voksen DRG Nevron kultur, utstillinger robust neurite utvekst aktivitet. CM fra db-cAMP-behandlet kulturer som består av én celle type alene, DRG Nevron eller peritoneal macrophage, ikke viser neurite utvekst aktivitet. Dette angir at samspillet mellom nerveceller og makrofager er uunnværlig for aktivering av makrofager sekresjon molekylær faktorer med neurite utvekst aktivitet i CM. Dermed vil vår co kultur paradigme også være nyttig å studere intercellulære signalering i Nevron-macrophage samspillet å stimulere makrofager å være utstyrt med en pro-regenerativ fenotypen.
Introduction
En rekke studier har søkt å forbedre CNS axon regenerering etter skader i ryggmargen eller hjernen. Inflammatoriske reaksjoner, uunngåelig medfølgende skader på nervesystemet, er tradisjonelt tenkt å delta i sekundære patologisk prosesser fører til skadelige resultater1,2. Metylprednisolon som kan undertrykke inflammatoriske reaksjoner er faktisk den eneste godkjente terapien for akutt ryggmargen skaden3. Nyere studier har imidlertid gitt bevis at makrofager, en representant inflammatorisk celle type, kan delta i gjenfødelse eller reparasjon av skadet nervesystemet4,5,6. For eksempel infiltrere makrofager etter en linse skade produsere pro-regenerativ molekyler å fremme regenerering av netthinnen ganglion neurons7,8. I tillegg økt transplantert DRG neurons axon vekst opp regionen der makrofager ble aktivert ved zymosan9. Videre kan makrofager på webområdet lesjon opprette en vekst-ettergivende miljøet for skadde perifere nerver10.
Vårt arbeid også gitt sterke bevis som makrofager kan bidra til kapasiteten til axon gjenfødelse tilstøtende neurons. Vi har vist at aktivering av makrofager i dorsal root Ganglion (DRG) var avgjørende for forbedret regenerativ kapasitet DRG sensoriske neurons etter en preconditioning eksterne nerve skade11. Lignende forskning ble uavhengig rapportert fra en annen laboratorium12. Vi viste også at intraganglionic injeksjon av dibutyryl syklisk AMP (db-cAMP), som er et velkjent molekyl å styrke kapasiteten til axon gjenfødelse13, indusert aktivering av makrofager. Deaktivering av makrofager avskaffet effekten av db-leiren på neurite utvekst aktivitet. Etterfølgende verk identifisert skade-indusert uttrykk for CCL2 i nerveceller som et signal å stimulere makrofager med en pro-regenerativ fenotypen14,15.
Basert på ovennevnte eksperimentelle resultatene, har vi etablert en i vitro modell ligner molekylære hendelser som oppstår i DRGs etter en preconditioning skade modellen11,14. I denne modellen brukes db-cAMP Nevron-macrophage co kulturer fremlokkende intercellulære signalering som fører til aktivering av makrofager med en pro-regenerativ fenotypen. Her beskriver vi detaljerte protokoller som vi kan generere makrofager som skiller molekylær faktorer fremme neurite utvekst (figur 1). Denne eksperimentelle modellen illustrerer et konsept som makrofager kan stimulert eller indusert støtte axon regenerering etter skadene til nervesystemet. Vår modell vil også være nyttig i å studere mekanismer i intercellulære signalering som fører til aktivering av pro-regenerativ makrofager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimenter som involverer dyr ble godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen av Ajou University School of Medicine.
1. kultur utarbeidelse av dissosiert voksen DRG Nevron
- Før du definerer kulturen, pre coat en 6-vel plate med poly-D-lysine og laminin. Inkuber en 6-vel plate med 0,01% poly-D-lysine på 37° C for 2t eller 4° C over natten. Deretter vaske platen to ganger med destillert vann.
- Inkuber platen med laminin løsning på en konsentrasjon av 3 µg/mL til 2 timer ved romtemperatur, og deretter vaske platen to ganger med destillert vann. Tørk platen ved romtemperatur minst 1t.
- Euthanize en mus i en gjennomsiktig CO2 kammer koblet til en komprimert CO2 gass-sylinder. Incise huden overliggende virvelsøylen med kirurgisk blad og dissekere paravertebral musklene bilateralt å avsløre ryggvirvel bein. Fjerne ryggvirvel bein omhyggelig med en smal-tipped kirurgisk rongeur til DRGs er fullt eksponert.
Merk: Voksen DRGs neurons er Hentet fra voksen C57BL6 mannlige mus alderen 8 uker til 12 uker gamle. - Fjerne DRGs bilateralt fra S1 helt opp C1 nivået med iridectomy saks og tynn tang under dissecting mikroskop. Prøv å klippe ut røtter helt fra DRGs for å redusere forurensning av Schwann celler eller fibroblaster.
- Lagre de dissekert DRGs i en 60 mm Petriskål inneholder 5 mL av kalde Dulbecco endret Eagle Medium (DMEM) på is inntil alle DRGs er samlet.
Merk: Det er viktig å dissekere DRGs så raskt som mulig. Samlingen av alle DRGs fra ett museklikk bør ikke ta mer enn 30 min. 30 min etter eutanasi, slutte å samle DRGs og videre til neste trinn selv om det fremdeles gjenstår DRGs. - Overføring av DRGs til en 1,5 mL Eppendorf rør med en blå pipette tips (1000 µL) med en avslutning. Fjerne DMEM etter en rask runde i flere sekunder med en mini sentrifuge. Legg 1 mL av DMEM som inneholder 125 U/mL type XI collagenase og ruge røret for 90 min med en mild rotasjon (35-40 rpm) bruker en twister shaker i en 37 ° C inkubator. Nakkens røret i shaker etasje med båndet.
- Forkaste collagenase inneholder DMEM og legge 1 mL av ferske DMEM. Vent til de flytende DRGs helt synke ned til bunnen, og fjern deretter DMEM med vev rusk. Gjenta dette trinnet for vask minst seks ganger.
Merk: Ikke prøv å forkaste nedbryting helt. Vær forsiktig med å fjerne alle DRGs med supernatant DMEM. - Overføring av DRGs til en 15 mL konisk rør med en blå pipette tips (1000 µL) med en avslutning. Deretter Pipetter opp og ned forsiktig minst 15 ganger med en blå tips (1000 µL) for å gjøre en homogen celle suspensjon. Unngå å gjøre bobler og prøv å ikke berører bunnen av koniske rør med en pipette tips.
- Sentrifuge røret 239 x g for 3 min og forsiktig kast nedbryting med flytende avfall. Legge 1 mL av Neurobasal medium med B27 (2.0% v/v) og resuspend celle pellet av pipettering forsiktig opp og ned 5 til 10 ganger.
- Cellen suspensjon passere en 70-µm celle sil lagt oppå en 50 mL konisk rør. Vent i 2 minutter, og hell deretter Neurobasal/B-27 medium på silen bruker en pipette-kontroller.
- Plate alle innsamlede DRG neurons (totalt ca 2 x 106 DRG neurons fra ett museklikk) på to brønner av 6-vel plate. DRG neurons fra en voksen mus dekker to brønner i en 6-vel plate. Deretter Plasser platen i en CO2 inkubator på 37 ° C til macrophage co kulturer.
2. co kultur av P ekst Peritoneal makrofager på en celle kultur sett
Merk: Etablere co kulturer 4T etter den første plating av dissosiert DRG neurons
- Primære peritoneal makrofager tilberedes fra voksen C57BL6 mannlige mus alderen 8 uker til 12 uker gamle. Avlive et dyr i en CO2 kammer. Incise abdominal huden delikat, utsette peritoneum og unngå klipping peritoneum for å forhindre en lekkasje lavage væske.
- Punktering peritoneum bruker en sprøyte med en 22G nål og injisere 10 mL av iskalde fosfat-bufret salin (PBS) i bukhulen. Forsiktig massasje peritoneum i 1-2 min. Deretter dra ut pinnen og klem ut PBS nålen punktering området og samle lavage væsken i et 50 mL konisk rør.
Merk: Før bruk, sette sprøyten på isen for å opprettholde kulde av PBS. - Sentrifuge lavage væsken 239 x g i 10 min på 4 ° C pellets cellulære komponenter. Resuspend pellets med 3 mL lyseringsbuffer røde blodlegemer (RBC) for 3 min ved romtemperatur. Deretter sentrifuge celle suspensjon igjen på 239 x g i 10 min på 4 ° C. Resuspend pellets med 3 mL PBS og sentrifuge celle suspensjon igjen for å fjerne eventuelle gjenværende RBC lyseringsbuffer.
Merk: Kontroller at lyseringsbuffer RBC fjernes fullstendig. Ellers kan gjenværende RBC lyseringsbuffer være giftig for kulturperler makrofager. - Resuspend pelleted cellene i 1 mL av Neurobasal/B-27 medium. Plate halvparten av alle innsamlede makrofager (totalt 3 × 106 til 6 x 106 celler) på en cellekultur sett med effektive området 4,2 cm2, som er plassert på toppen av dissosiert DRG.
Merk: I co kultur perioden, makrofager er dyrket i Neurobasal/B-27 Nevron kultur medium. Tilstrekkelig overlevelse av makrofager under denne tilstanden ble bekreftet.
3. behandling av Db-Camp og samling av Macrophage CM
Merk: Starte db-cAMP behandling 4T etter Nevron-macrophage co kulturer.
- Legge til 2 µL av 100 µM db-cAMP løsning Nevron-macrophage co kulturer. Legge til den samme mengden PBS for en kontroll eksperiment.
- Etter 24 timer, fylle en tom brønn med 1 mL av macrophage kultur medium i samme 6-vel plate. Overføre celle kultur innsatsen i Nevron-macrophage co kulturer til tomme brønnen med macrophage kultur medium. Holde cellene i samme stand 72 h uten å endre medium.
Merk: Vi legge bare 1 mL av macrophage kultur medium under CM samling å gjøre konsentrert CM. Under samlingen CM, eventuelt lagt vi mer dekker makrofager i innsatsen. - Etter 72 h, sentrifuge macrophage CM 239 x g i 5 min å fjerne cellulære komponenter. Nedbryting passere et 0,2-µm-filter for å fjerne eventuelle gjenværende mobilnettet rusk. Lagre samlet CM-70 ° c før bruk.
4. Neurite utvekst analysen med samlet CM
- Før du konfigurerer en egen voksen DRG Nevron kultur, pre coat en 8-vel kammer lysbilde etter den samme fremgangsmåten i 1.1 og 1.2.
- Få avstand voksen DRG nerveceller i Neurobasal medium med B27 bruker de samme metodene beskrevet 1,3 til 1.10. Plate 5 x 104 celler per brønn på pre belagt 8-vel kammer lysbildet.
- Plass kammer lysbildet i en 37 ° C inkubator for 2t, slik at cellene å feste til bunnen. Deretter erstatte kultur medium med tinte CM som er forvarmet på 37 ° C.
Merk: Pass på å ikke berører bunnen av 8-vel kammer lysbildet når du fjerner kultur medium og legge samlet CM. - 15 timer etter den første plating, fjerne mediet og vask cellene med PBS en gang. Deretter legge til 200 µL av iskalde 4% paraformaldehyde løsning i brønnene og ruge cellene med den paraformaldehyde løsningen for 20 min på 4 ° C
Merk: DRG Nevron kultur for neurite utvekst analysen bør være nøyaktig begrenset til 15 h. Under denne tilstanden er det ingen merkbar neurite utvekst. - Vask tre ganger med iskald PBS og utfør deretter blokkerer med 10% normal geit serum (NGS) med 0,1% Triton-X for 30 min. ruge fast cellene med primære antistoff (anti-Tuj-1) løsning fortynnet med 10% NGS (i en konsentrasjon av 1 µg/mL) 4 h på rommet temperatur eller overnatting på 4 ° C.
- Vask tre ganger med PBS, og deretter ruge cellene med sekundær antistoff (geit-anti mus) løsning for 2 timer ved romtemperatur. Deretter vaske to ganger med PBS og montere kultur lysbildet med en dekkglassvæske (24 × 50 mm) bruke monteringsløsning.
- Ta bilder med fluorescens mikroskop for å visualisere neurite utvekst.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi beskriver en protokoll som kan generere makrofager kan sekresjon molekylær faktorer med neurite utvekst aktivitet. Macrophage CM fra co kulturer behandlet med db-cAMP resulterte i robust neurite resultatet når en separat DRG Nevron kultur (figur 2A). Sammenligning CM fra PBS-behandlet co kulturer ikke få neurite utvekst våre 15-h kultur varighet (figur 2B). Når db-cAMP er behandlet til kultur med macrophage alene, var CM fra denne tilstanden ikke effektiv støtte neurite utvekst (figur 2C). Dette tyder på at Nevron-macrophage samhandling er uunnværlig å stimulere makrofager å være utstyrt med en proregenerative kapasitet. Vi testet hvis CM innhentet fra db-cAMP-behandlet bare Nevron kultur og fant ingen neurite utvekst (figur 2D).
Figur 1: en skjematisk diagram illustrerer prosedyrer for å få betinget middels inneholder neurite utvekst aktivitet. Voksen DRG neurons (2 x 106 celler per hver brønn) er kultivert 4 h. Deretter er peritoneal makrofager kultivert i sette inn vel, over brønnen i hvilke DRG neurons ble kultivert. 4 h etter plating, PBS eller dibutyryl leiren er behandlet. Etter 24-timers inkubasjon er innsatsen godt overført til et annet godt fylt med ca 1 ml medium. Deretter er de overførte godt ruges 72 h. Deretter samles inkubert betinget mediet (CM). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: representant resultatene av neurite utvekst analysen bruker betinget medium fra ulike forhold. (A, B) Voksen DRG neurons ble akutt avstand og kultivert for nøyaktig 15 h. 2t etter plating, kultur medium ble erstattet med betinget medium (CM) fra Nevron-macrophage co kulturer behandlet med enten PBS (A) eller dibutyryl leiren (db-cAMP) (B). Bare CM behandlet med db-cAMP utstilt robust neurite utvekst aktivitet. (C, D) CM Hentet fra avlinger som består av enten macrophage (C) eller Nevron (D) alene som ble behandlet med db-leiren støtter ikke neurite utvekst. Skala stolper angir 200 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det er flere viktige skritt for generering av denne co kultur-systemet. Det er viktig å sikre at musen DRG neurons og peritoneal makrofager tilberedes på frisk og sunn. Vi har opplevd redusert neurite utvekst aktivitet i CM når Disseksjon av alle DRGs tok mer enn 30 min. I tillegg forurensning av blod komponenter i peritoneal makrofager også ført til en reduksjon av neurite utvekst aktivitet i CM. For å lokke fram robust Nevron-macrophage samspillet av db-cAMP, grundig vask vil også være et kritisk steg til fullstendig fjerning av vev rusk og eliminering av potensielt gjenværende cytotoksiske komponenter, som collagenase eller RBC lyseringsbuffer. Et annet punkt å bli gjentatt er at røttene knyttet til DRGs bør fjernes som mulig. Gjenværende stubber røtter ville øke forurensning av Schwann celler i DRG Nevron kultur. Schwann cellene kan produsere høy mengde nevrotropisk faktorer i kultur som kan forvirre resultatene.
I denne protokollen, var dissosiert makrofager belagt på en celle kultur setter atskilt fra DRG neurons belagt på bunnen av godt platen. Vår forrige studie viste ikke signifikant forskjell i omfanget av neurite utvekst aktivitet mellom CMs fra direkte co kulturer (tillater fysisk kontakt mellom de to celletyper) og co kulturer med de to celletyper atskilt med en cellekultur inn11. Dette resultatet indikerte at neurons og makrofager kommuniserer med hverandre via løselige molekyler løslatt fra enten celle type, ikke av direkte fysisk kontakt. Det ble vist at CCL2, secreted fra DRG neurons, er ansvarlig for å aktivere makrofager i en pro-regenerativ fenotypen i denne co kultur model14. Dermed vil våre co kultur-systemet tillate utviklingen av mer detaljert intercellulære signalering som formidler aktivering av pro-regenerativ makrofager.
Kultur var nettopp begrenset til 15 h neurite utvekst analysen i denne protokollen. Piloten eksperimenter, vi undersøkte flere ulike kultur tid og fant at med en minimal omfanget av neurite utvekst i kontroll tilstand (15 h), svært robust neurite resultatet ble oppnådd med CM behandlet med db-cAMP. Musen DRG neurons, vokser hvis ikke preconditioned, ikke noen betydelig neurites innenfor denne tidsrammen. Hvis DRG neurons er kultivert lenger enn 15 h, men begynner de å vise noen grad av neurite utvekst selv i kontroll, ikke preconditioned tilstand, som ville skjule noen effekt i db-cAMP-behandlet CM på neurite utvekst. Lignende resultat ble rapportert i neurite utvekst analysen med rotte DRG nerveceller i en tidligere studie16.
Noen tidligere studier brukt zymosan, en gjær cellevegg forberedelse, aktivere makrofager med en pro-regenerativ fenotypen7,9. Men utgitt makrofager stimulert av zymosan ikke bare pro-regenerativ molekyler, men også cytotoksiske faktorer. Når protein komponentene i macrophage CM behandlet med zymosan var atskilt med gel-filtrering Ture, macrophage-avledet faktorer ≥ 30 kDa var cytotoksiske mens faktorer ≤ 30 kDa forfremmet axon gjenfødelse7. I tillegg kan zymosan injeksjon i ryggmargen føre til utilslørt død av neurons og axons9. Sammenligning vår protokollen å generere pro-regenerativ makrofager har vist seg for å være mer fysiologiske enn den forrige bruker zymosan. Faktisk forbedret db-cAMP injeksjon til DRG neurons deres evne til å vekst axons etter en skade til sentrale grenen uten en rapport på mobilnettet skader17,18. Gjennom en serie av våre eksperimenter, har vi aldri observert noen betydelig reduksjon av DRG Nevron tetthet i kulturen følgende program i db-cAMP-behandlet CM. Vi spekulere at våre protokollen tillater oss å produsere kun pro-regenerativ makrofager uten samtidige nevrotoksisitet. Derfor rapporterte protokollen og eksperimentell modell her vil være nyttig å identifisere molekylær signaturer av pro-regenerativ makrofager og forstå av hva mekanismer pro-regenerativ fenotypen er utviklet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Denne protokollen støttes av en bevilgning NRF-2015R1A2A1A01003410 fra departementet for vitenskap, IKT og fremtiden planlegging, Sør-Korea.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture insert transparent PET membrane 0.4μm pore size | Corning,Falcon | 353090 | Transparent PET membrane with 0.4-μm pore size, for 6-well plate |
| 70-μm nylon cell strainer | Corning, Falcon | 352350 | |
| 8-well culture slide | Biocoat | 354632 | with a uniform application of Poly-D-Lysine |
| Red blood cell lysis buffer | Qiagen | 158904 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma-Aldrich | C9407-100MG | |
| Neurobasal medium | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 21103-049 | Containing 1% glutamax and 1% penicilin-streptomycin |
| B-27 supplement, serum free | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 17504-044 | extracellular solution |
| Glutamax | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 35050-061 | |
| Penicillin-streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 15140-122 | |
| Poly-D-lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P6407-5MG | |
| Laminin | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | 23017-015 | |
| Adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate, N6,O2'-dibutyryl-, sodium salt | Merck Millipore Corporation, Calbiochem | 28745 | |
| 10% Normal Goat Serum | Thermo Fisher Scientific | 16210072 | |
| Triton-X-100 | Daejung Chemical and Metal Co | 8566-4405 | |
| Anti β III tubulin (Tuj-1) | Promega Corporation | G7121 | Mouse monoclonal antibody |
| Goat anti-Mouse IgG (H+L) secondary antibody | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | A11005 | |
| Hemacytometer | Marienfeld-Superior | N/A | |
| Cell culture CO2 incubator | Panasonic | N/A | |
| Dissecting stereomicroscope | Carl Zeiss | Stemi DV4 | |
| Twist shaker | FINEPCR | Tw3t | |
| Tabletop centrifuge | Sorvall | N/A | |
| Confocal microscope | Olympus America Inc | IX71 | |
| FBS (Fetal Bovine Serum) | VWR International, Hyclone | SH30919.03 | |
| Friedman Pearson Rongeurs | FST (Fine Science Tools) | 16021-14 | Stainless steel, 14cm, curved, single joint action |
| Fine Scissors - Tungsten Carbide & ToughCut | FST (Fine Science Tools) | 14558-11 | sharp, serrated |
| Dumont #7 Forceps | FST (Fine Science Tools) | 11272-30 | Dumoxel, 0.07 x 0.04mm, curved |
| Vannas Spring Scissors | FST (Fine Science Tools) | 15000-00 | straight, 3mm cutting-edge, sharp |
| Qualitron DW-41 Micro-Centrifuge | Artisan Technology Group | DW-41 | Input Voltage: 115VAC |
References
- Donnelly, D. J., Popovich, P. G. Inflammation and its role in neuroprotection, axonal regeneration and functional recovery after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 378-388 (2008).
- Festoff, B. W., et al. Minocycline neuroprotects, reduces microgliosis, and inhibits caspase protease expression early after spinal cord injury. J Neurochem. 97 (5), 1314-1326 (2006).
- Bowers, C. A., Kundu, B., Hawryluk, G. W. Methylprednisolone for acute spinal cord injury: an increasingly philosophical debate. Neural Regen Res. 11 (6), 882-885 (2016).
- Gensel, J. C., Kigerl, K. A., Mandrekar-Colucci, S. S., Gaudet, A. D., Popovich, P. G. Achieving CNS axon regeneration by manipulating convergent neuro-immune signaling. Cell Tissue Res. 349 (1), 201-213 (2012).
- DiSabato, D. J., Quan, N., Godbout, J. P.
- Jin, X., Yamashita, T. Microglia in central nervous system repair after injury. J Biochem. 159 (5), 491-496 (2016).
- Yin, Y., et al. Macrophage-derived factors stimulate optic nerve regeneration. J Neurosci. 23 (6), 2284-2293 (2003).
- Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat Neurosci. 9 (6), 843-852 (2006).
- Gensel, J. C., et al. Macrophages promote axon regeneration with concurrent neurotoxicity. J Neurosci. 29 (12), 3956-3968 (2009).
- Barrette, B., et al. Requirement of myeloid cells for axon regeneration. J Neurosci. 28 (38), 9363-9376 (2008).
- Kwon, M. J., et al. Contribution of macrophages to enhanced regenerative capacity of dorsal root ganglia sensory neurons by conditioning injury. J Neurosci. 33 (38), 15095-15108 (2013).
- Niemi, J. P., et al. A critical role for macrophages near axotomized neuronal cell bodies in stimulating nerve regeneration. J Neurosci. 33 (41), 16236-16248 (2013).
- Hannila, S. S., Filbin, M. T. The role of cyclic AMP signaling in promoting axonal regeneration after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 321-332 (2008).
- Kwon, M. J., et al. CCL2 Mediates Neuron-Macrophage Interactions to Drive Proregenerative Macrophage Activation Following Preconditioning Injury. J Neurosci. 35 (48), 15934-15947 (2015).
- Niemi, J. P., DeFrancesco-Lisowitz, A., Cregg, J. M., Howarth, M., Zigmond, R. E. Overexpression of the monocyte chemokine CCL2 in dorsal root ganglion neurons causes a conditioning-like increase in neurite outgrowth and does so via a STAT3 dependent mechanism. Exp Neurol. 275 Pt 1, 25-37 (2016).
- Cafferty, W. B., et al. Conditioning injury-induced spinal axon regeneration fails in interleukin-6 knock-out mice. J Neurosci. 24 (18), 4432-4443 (2004).
- Cai, D., et al. Neuronal cyclic AMP controls the developmental loss in ability of axons to regenerate. J Neurosci. 21 (13), 4731-4739 (2001).
- Neumann, S., Woolf, C. J. Regeneration of dorsal column fibers into and beyond the lesion site following adult spinal cord injury. Neuron. 23 (1), 83-91 (1999).
