Murin, boire des modèles dans le développement des pharmacothérapies pour alcoolisme : boire dans le choix de sombre et deux bouteilles
Summary
Utilisation de l’alcool trouble (AUD) est un problème majeur de santé nationale et du développement de traitements plus efficaces est nécessaire pour compenser les besoins de cette population de patients. À cette fin, le protocole suivant utilise deux modèles simples de boire rongeurs afin d’évaluer l’efficacité préclinique de composés de plomb anti-alcool.
Abstract
Utilisation de l’alcool trouble (AUD) est un problème majeur avec plus qu’un environ 76 millions de personnes dans le monde répondant aux critères diagnostiques. Les traitements actuels sont limités à trois médicaments approuvés par la FDA qui sont en grande partie inefficaces, même lorsqu’il est combiné avec psychosocial intervention, comme on le voit par le haut des rechutes taux. Par conséquent, la recherche de traitements plus nouveaux représente un objectif important de santé publique. À cette fin, le protocole suivant utilise deux modèles simples de boire rongeurs afin d’évaluer l’efficacité préclinique de composés de plomb anti-alcool : choix de deux bouteilles (à confirmer) et de boire dans l’obscurité (DID). Le premier permet de souris volontaire boire avec modération, alors que ce dernier induit chez les souris volontaires consomment une grande quantité d’alcool sur une courte période qui imite la consommation excessive d’alcool. La nature simple et haut débit de tous les deux de ces paradigmes permettent pour le dépistage rapide des agents pharmacologiques ou pour identifier les souches de souris qui présentent certain comportement de consommation volontaire.
Introduction
Au cours des dernières 25 plus ans, un effort important a été mis sur le développement de médicaments pour le traitement de l’utilisation de l’alcool trouble (AUD)1. Même si de nombreux progrès ont été réalisés, AUD demeure un problème majeur de santé publique, touchant plus 18 millions d’Américains et coûte plus de $ 220 milliards annuellement2,3. Actuellement, il y a seulement trois médicaments approuvés par la FDA, disulfirame, naltrexone et l’acamprosate, qui ont donné des résultats contradictoires dans les essais cliniques et un succès limité même lorsqu’il est combiné avec une intervention psychosociale dans les paramètres de la clinique 4 , 5 , 6 , 7.
Des principales raisons pour les échecs de traitement AUD actuelle sont liée à la nature hétérogène de AUD8. Alors que les facteurs environnementaux et génétiques contribuent au développement de AUD, héritabilité représente environ 50 à 60 % du risque d’apparition de9. Comme pour le traitement de la dépression, il est largement admis que les patients souffrant de AUD aura besoin une grande variété de médicaments qui sont adaptés pour répondre aux besoins de chaque patient10.
De toute évidence, il y a un besoin urgent de traitements plus efficaces qui serait facilitée si le processus déjà difficile et fastidieux de découverte de médicaments ont été rationalisés3. À cette fin, le protocole suivant démontre l’applicabilité préclinique de deux modèles de rongeurs boire largement utilisé pour examiner les fondements neurobiologiques de AUD11. Plus précisément, la méthode introduite dans les présentes peut évaluer l’efficacité des composés candidats à réduire l’alcool consommation en « modéré » et « binge drinking » scénarios utilisant le choix de deux bouteilles (à confirmer) et de boire dans les sombres paradigmes (DID), respectivement. Les deux paradigmes examinent auto-administration d’éthanol non-opérant, auquel cas souris avalent éthanol oralement et à volonté et donc illustrer visage haute et validité comme modèle d’alcoolisme humain11conceptuelle.
En boire, également connu sous le nom de libre choix, boire, boire, de préférence à confirmer ou boire sociale, deux bouteilles de solution sont disponibles en permanence dans la cage. Une bouteille contient l’eau, et l’autre une solution diluée d’éthanol, auquel cas la concentration d’éthanol peut varier (par exemple., 5-30 % v/v)11,12. Les souris ont accès en permanence à deux bouteilles et peuvent donc choisir la quantité à boire dans chaque bouteille.
Ce modèle évalue la consommation d’éthanol de chaque souris (g/kg), ainsi que le ratio de préférence de l’éthanol (volume d’éthanol consommé ÷ total volume liquide consommé). Il est couramment utilisé pour comparer les niveaux de consommation d’alcool à travers différentes souches de souris, ou après une manipulation génétique spécifique (par exemple., knock-out du gène ou précipitation) et les résultats dans les concentrations d’éthanol de sang (BECs) similaires à ce que l’on trouve chez les humains lorsque boire avec modération13,14.
Dans la procédure DID, 3 h après le début du cycle de sombre, la bouteille de cage maison d’eau est échangée avec une bouteille de solution d’éthanol de 20 % (v/v) pour un accès limité à boire session. Les sessions potables observés comme cycle de 4 jours consécutif, durée 2 h les jours 1-3 et 4 h le jour 4. Jours 1-3 servent comme période d’alcool-accoutumance avant du tester au jour 4. Par conséquent, souris fiable consomme suffisamment d’éthanol pour atteindre BECs > 100 mg/dL et présentent par conséquent, les effets sur le comportement d’ivresse trouvées chez l’homme qu’est les beuveries13,14,15. Accès à l’eau est disponible à tout moment autre que la session de boire.
Il y a plusieurs variations d’un accès limité à boire. Par exemple, dans le modèle d’accès intermittent, souris recevoir deux bouteilles (de l’eau contenant un et l’autre contenant 20 % (v/v) d’éthanol) uniquement sur les lundi, mercredi et vendredi avec un délai d’attente de 24 h et 48 h en semaine et le week-end, respectivement16. Après plusieurs semaines d’accès intermittent, les souris vont progressivement et volontairement dégénèrent boire niveaux, finit par atteindre BECS semblable à ce qui est observé dans le modèle DID. DID, cependant, semble être le modèle couramment utilisé pour évaluer le comportement de consommation excessive comme. Autres modèles de consommation intermittente existent, mais ils s’appuient sur la restriction de l’accès à la nourriture ou vapeur chambre induit des augmentations auto-administration volontaire, ce qui les rend moins représentatif des volontaires humains alcool consommation16.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dans le monde entier estimations indiquent qu’autant que 76 millions de personnes remplissent les critères pour justifier un diagnostic pour l’utilisation d’alcool trouble (AUD). Malheureusement, les traitements pharmaceutiques actuellement disponibles sont en grande partie inefficaces et mise au point est nécessaire pour compenser les besoins de cette population clinique20. À cette fin, le texte suivant protocole vise à faciliter cette entreprise en illustrant deux d’entre les plus él?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu, en partie, par la recherche des subventions SC ILEC NIH/RRRNC/NCATS–UL1TR000130 (D.L.D.), AA022448 (D.L.D.) et l’école de pharmacie de l’USC.
Materials
| 1 L graduated cylinder | VWR | https://us.vwr.com/store/product/20935285/marisco-single-scale-cylinder-graduates-john-m-maris-co | To prepare ethanol solution. |
| 1 L glass bottle | Pyrex (Fisher Scientific) | https://www.fishersci.com/shop/products/pyrex-reusable-media-storage-bottles-12/p-42752 | To prepare ethanol solution. |
| 100 mL graduated cylinder | Fisher Scientific | https://www.fishersci.com/shop/products/kimble-chase-kimax-class-a-to-contain-graduated-cylinders-8/p-4369311 | To prepare ethanol solution. |
| Analox | One potential method of analyzing DID blood samples is by using the analox machine | ||
| ball-bearing sipper tubes | Ancare Corp. | http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point | Length: 2.5 inches, Diameter: 5/16 inches, Model: TD100 |
| C57BL/6J Mice | Jackson lab | https://www.jax.org/strain/000664 | May also come from internal breeding colony |
| disposable serological pipets | VWR International (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4760455/vwr-disposable-serological-pipets-polystyrene-sterile-plugged | 10 mL, 18 mL, or 25 mL |
| ethanol, pure, 190 proof (95%), USP, KOPTEC | Decon Labs (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4542412/ethanol-pure-190-proof-95-usp-koptec | — |
| heat gun | Master Appliances Corp. | http://www.masterappliance.com/master-heat-guns-kits/ | |
| heat shrink tubing | — | — | Diameter: 3/8 inches |
| industrial knife/blade | — | — | — |
| metal cage plate | — | — | Should be available through the university/institutional vivarium |
| mouse RO water | — | — | Should be available through the university/institutional vivarium |
| portable electronic scale | Ohaus (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/4789377/portable-electronic-cs-series-scales-ohaus | — |
| red light headlamp | nyteBright (Amazon) | https://www.amazon.com/LED-Headlamp-Flashlight-Red-Light/dp/B00R0LMMF8/ref=sr_1_1?ie=UTF8&qid=1499591137&sr=8-1-spons&keywords=red+lamp+headlamp&psc=1 | — |
| silicone stoppers | Fisher | — | — |
| thermometer | Fisher Scientific | https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-hygro-thermometer-clock-large-display-2/p-4077232 | — |
| weigh boat | VWR International (VWR) | https://us.vwr.com/store/product/16773534/vwr-pour-boat-weighing-dishes | The lid from a pipete tip box is an appropriate alternative |
References
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