측 벽 변형 된 미세 채널 흐름 제어, 입자 처리, 채널 차원 사용자 지정 및 사용 하는 동안에 다른 재구성을 제공 합니다. 우리는 그들의 모양을 변경할 수 있는 핀의 배열을 측 벽으로 미세 채널을 조작 하는 방법을 설명 합니다.
미세 구성 요소 혼합, 분리, 입자 트랩, 또는 반응 등 다른 주요 미세 기능을 실현 하기 위해 다양 한 도형이 필요 합니다. 미세 채널을 채널 형태를 유지 하면서 제조 후에 변형 높은 spatiotemporal 갖추었을 수 있습니다. 이 갖추었은 기존 “재구성” 또는 “통합” 미세 시스템을 달성 하기 어려운 그런 키 미세 기능에 필요 합니다. 직사각형 핀의 끝의 옆으로 정렬 된 배열 구성 된 변형 측 벽으로 미세 채널 제조 하는 방법을 설명 합니다. 움직이는 그들의 경도 방향에 있는 핀 핀의 끝 위치, 그리고 이렇게, 분할 된 채널 측 벽의 모양을 변경 합니다. 원치 않는 누설 또는 초승달 모양 힘에 의해 발생 하는 인접 한 핀 접착 핀 간격이 발생할 수 있습니다. 핀 간격을 닫으려면, 우리는 탄화수소 중합체 정지-기반 갭 필러는 탄성 장벽에 의해 동반를 도입 했습니다. 이 재구성 가능한 미세 장치 강한 시간에 채널 변위 흐름을 생성할 수 또는 채널의 모든 영역에서 흐름을 중지할 수 있습니다. 이 기능은 촉진 한다, 주문형, 셀, 점성 액체, 가스 거품, 및 비-유체, 처리 경우에 그들의 존재 나 행동 하지 알려져 제조의 때에.
미세 소자-마이크로 크기의 장치를 소량의 액체와 그들의 흐름을 제어-휴대성과, 자주, 경제성 “칩” 형식으로 생물 의학 절차의 소형화를 제공 합니다. 최근 검토1에 설명 된 대로 공간 및 긍정적인 기능으로 구성 된 다양 한 미세 구성 요소 기본 키 유체 함수와 혼합, 분리, 입자 트랩, 또는 반응 등을 실현 하기 위해 개발 되었습니다.
디자인 단계에서 많은 미세 소자의 동작을 결정 하는 동안 어떤 종류의 미세 장치 그들의 구조 또는 동작의 사후 제작 변경 수 있습니다. 여기 우리는 “갖추었을”로이 기능을 참조 하십시오. 미세 시스템의 갖추었을 일반적으로 장치를 디자인 하는 데 필요한 비용과 시간을 줄일 수 및/또는 시간이 지남에 미세 레이아웃 또는 기능 사용자 지정을 수 있습니다.
이전에 장치는 다음 세 가지 범주로 재구성 가능한 미세 기술. 첫 번째, 변형 탄성 채널의 흐름 속도 방향으로 사용 하는 동안 변경 될 수 있습니다. 갖추었을 얻을, 탄성 채널 공 압 압력 소스2, 점자 액추에이터3또는4밀봉 압축 등 다양 한 외부 및 지배할 수 있는 힘에 의해 변형 된다. 두 번째, 재구성 가능한 장치에 의존 모듈 디자인, 멀티 레이어 유체 회로, 자기와 모듈형 채널 상호 연결와 같은 튜브 기반 마이크로5. 세 번째, 장치 자체는 재구성, 하지만 전극 배열 (디지털 마이크로 라고도 함)6,7 , 교수형 드롭 기반 미세 장치8 microdroplet 교통 사용 요청 시 흐름 또는 액체의 경로 전환.
그럼에도 불구 하 고, 이러한 재구성의 많은 토폴로지 및 거시적인 수준에서 제한 됩니다. 예를 들어 많은 통합된 미세 장치 흐름을 중지 하거나 microchannels에서 미리 정의 된 영역을 축소 하 여 흐름 방향을 변경할. 그러나, 위치 및 개수 축소 됩니다 지역 재구성 하지 않습니다. 디지털 마이크로 유체 취급 능력의 다양 한 있지만, 각 작은 물방울의 볼륨에 의해 가능한 흐름을 크게 제한 한다. 또한, 세포 세포 배양의 같은 방울에 교양 때 추가적인 노력이 필요 증발 및 방울에서 가스 소모를 방지 하 고 osmolality 충격과 급격 한 pH 변화를 방지 합니다.
채널 기능 수준 갖추었을 실현, 우리 기계 요소를 동적으로 재구성 사용9에 때 그들의 배열의 구성 되어 움직이는 측 벽과 미세 장치를 제안 했다. 변형 측 벽을 형성 하기 위하여 작은 직사각형 핀이 핀 각 끝 정의 측 벽의 세그먼트 줄지어 있었다. 슬라이딩 핀 전송 허용 되는 측 벽의 변형 또는 셀, 거품, 및 채널 내 입자의 패턴을 허용. 죽은 볼륨을 최소화 하 고 극대화 갖추었을, 인접 한 핀 사이의 거리 최소화 했다. 그러나, 강력한 모 세관 행동에 작은 핀 내부 연결 사이 틈새와 아닌 외부 입력 핀 간격, 미디어 증발, 세균 이나 세포 독성 오염, 그리고 결국 셀을 일으키는 어떤 액체의 누설 원인 죽음입니다. 따라서, 우리는 주기적 핀 작업 및 장기 세포 문화10견딜 누출 무료 분할 된 측 벽 형 재구성 가능한 미세 채널을 개발 했습니다.
이 문서에서는, 우리는 셀 문화 영역에서 점진적 증가 따라 재구성 될 수 있다 분할 된 측 벽으로 미세 세포 배양 장치를 구축 하는 프로토콜을 제공 합니다. 개별 채널 측 벽의 기밀성이 형광 이미징 사용 하 여 테스트 됩니다. 세포 배양 호환성 및 세포 패터 닝의 능력 칩에 세포 배양을 사용 하 여 계산 됩니다.
이 미세 시스템은 적당 한 때마다 적절 한 채널 디자인 미리 결정 될 수 없습니다 요청 시 변경 해야 합니다. 예를 들어이 시스템 세포 성장 또는 마이그레이션, 흐름 또는 트랩 활성 nematodes 또는 채널에 예기치 않게 동작 하는 다른 작은 물체에 따라 채널 폭과 흐름 속도를 조정 하거나 다양 한 원시 샘플 또는 바이오 수락 하도록 사용 될 수 있는 아니 아직 생각 되었다 디자인의 때에.
핀 분할 아닌은 갖춘 미세 채널, 그리고 우리는 그것이 분명히 높은 갖추었을 모든 기존 미세 채널 비교 채널 형태로 믿습니다. 우리가 여기 제공 하는 프로토콜에는 점차적으로 오랜 기간 동안 confluency에서 문화를 계속 셀 문화 표면 영역을 확대와 함께 세포 배양의 미세 장치 수 있게 된다. 장치 또한 미리 기판 또는 어떤 다른 시간에 디자인 또는 제조에 단백질 패턴 없이 셀에서 채널 패턴을 제공 합니다. 또한,이 재구성 가능한 미세 장치 쉽게 그러한 어려운 흐름 자료의 처리 장치를 처리할 수 있는 매우 몇몇 기존 미세 구현 하는 것을 도울 것 이다 강한 채널에서 변위 흐름을 생성 합니다. 즉, 세포 및 다른 미생물, 가스, 및 기타 비-유체 간의 상호 작용 장치 디자인에서 큰 수정 없이이 장치를 사용 하 여 평가할 수 있습니다.
우리는 채널의 한 입구 외부 흐름 제어 방법으로 라플라스 압력 또는 액체 정역학 압력 적용 간주 있다. 우리는 핀과 채널의 천장/바닥 사이의 격차를 통해 공기 환기 채널 쪽으로 흐름 생성 됩니다 때문에 죽은 끝에 액체 추진 권장 하지 않습니다. 많은 액체 작업 같은 핀 작업을 필요 하지 않습니다. 예를 들어 혼합 한 핀 (즉, 이동 1 개의 핀만 앞뒤로 여러 번) 액체를 mashing에 의해 수행할 수 있습니다.
장치의 가장 중요 한 부품은 핀입니다. 길이 정밀, 병렬 처리, 직각도 및 표면 품질은 핀, 처럼 그들은 아닌 형성 해야 합니다 원활 하 게 이동 해야 하 고 인접 한 핀의 움직임을 안내 합니다 합니다. 따라서, 핀 그림 2A와 유사한 그림을 제출 하 여 정밀 가공 전문 회사에서 주문 해야 하는 것이 좋습니다. 추가 기하학적 치수를 요구 하는 회사와 명시적 표면 거칠기 방향 수 있습니다. 그러나, 핀 그들은 신중 하 게 처리 하 고 때때로 질소 산 패 하는 경우 다시 사용할 수 있습니다.
탄성 방 벽은 또 다른 중요 한 기능, 그리고 그것의 형성은 소자의 제조 공정에서 가장 중요 한 단계. 정확 하 게 가공 된 자료는 반복 하 고 안정적인 결과를 얻이 필요 합니다. Uncured 장벽에 핀을 배치 또한 중요 한 단계입니다. 핀 잘 정렬 및 갭 필러와 기포 없이 장벽에 포함 된 유지 되어야 한다. 다음이 단계는이 미세 소자와 일반적인 문제는 핀을 통해 누설 방지.
이 장치를 사용 하 여 다른 일반적인 문제는) frictionally 제 핀, 및 b) 세포 죽음, 그리고 낮은 성장 율. 가능한 원인에 대 한 한) 핀 팁 높이 실리콘 석판에 대 한 금형에 포토 레지스트 층의 높이 사이 에칭된, 표면 및 치수 부적합의 핀 중간, 불 쌍 한 품질의 고르지 못한 테이퍼 (물결 모양) 에칭을 포함. Etchant 배합, 온도, 그리고 동요의 조정 핀 운동을 향상 시킬 수 있습니다. 또한, 왁 스 또는 접착제를 사용 하지 않고 피팅 재판 문제를 해결 하기 위해 힌트를 제공 합니다. 가능한 요인 b에서) 핀, 오류 탄성 장벽에 대 한 접착제의 선택에는 접착제의 불완전 한 치료의 부족 한 패 시 베이 션은. 일부 세포는 세포 접착을 홍보 하는 고분자 단백질 또는 다른 fibronectin 아닌 내부 코팅이 필요할 수 있습니다. 또한, 셀 문화 연습 trypsinization 등 원심 분리에에서 최적화는 아닌 죽은 세포를 줄일 것 이다.
제시 제조 프로토콜의 한계 중 하나는 측 벽 중 하나만 분할은 이다.입니다. 채널의 갖추었을 것 두 측 벽 핀 배열에 의해 구축 되어 있으면 더욱 향상 됩니다. 핀 및 더 이상 제조 단계의 금액을 두 번 필요 합니다, 비록 기술적으로 실행 가능한 옵션입니다.
The authors have nothing to disclose.
이 연구는 KAKENHI (20800048, 23700543)에 의해 지원 되었다.
Oven | Yonezawa | MI-100 | |
10% Nitric Acid | Wako Chemicals | 149-06845 | |
Stainless steel pins | Micro Giken | N/A | 0.3 mm crosssection, Grade 316L stainless steel, wire-cut EDM |
Mold release agent | Fluoro Technology | FG-5093SH | |
Polydimethylsiloxane (PDMS) | Shin-Etsu Chemicals | KE-106 | |
Negative epoxy photoresist | Nippon Kayaku | SU-8 3050 | |
Coverglasses (Rectangular) | Matsunami Glass | 26 x 60mm No.4 | |
Acetone | Kanto Chemicals | 01060-79 | |
Glass slides (Large) | Matsunami Glass | 76 x 52mm No.1 | |
Silicone adhesive | Shin-Etsu Chemicals | KE-41 | |
White petrolatum | Nikko Rica | Sun White P-1 | |
Polytetrafluoroethylene (PTFE) powder | Power House Accele | Microfluon II | |
Clear acrylic plate (3 mm-thick) | Various | N/A | |
Pneumatic dispenser | Musashi Engineering | ML-5000XII | |
Hydrochloric acid | Kanto Chemicals | 180768-00 | |
Computer numerical control (CNC) mill | Pro Spec Tools | PSF240-CNC | |
End mill (4 mm diameter) | Mitsubishi Materials | MS2MSD0400 | |
End mill (1 mm diameter) | Mitsubishi Materials | MS2MSD0100 | |
Adhesive (chemical-resistant and low viscosity ) | Cotronics | Duralco 4460 | |
Borisilicate glass vials | Various | To prepare HNO3+HCl solution (Aqua regia). Always select borosilicate glass. | |
Sodium bicarbonate | Kanto Chemicals | 37116-00 | |
Ultrasonic cleaner | AS ONE | AS12GTU | |
Ultrasonic drill | Shinoda Tools | SOM-121 | Used as a ultrasonic homogenizer. |
Spin coater | Active | ACT-220DII | |
Hotplate | AS ONE | ND-1 | |
Photoplotted film (12,700 dpi) | Unno Giken | N/A | Negative image of the recess at the bottom of a PDMS slab are plotted. |
2-methoxy-1-methylethyl acetate | Wako Chemicals | 130-10505 | |
UV spot light source | Hamamatsu | L8327 | Ultraviolet source |
Nitrogen | Various | N/A | |
Vacuum desiccator and pump | AS ONE | MVD-100, GM-20S | |
Scalpels | Various | No.11 | |
Biopsy punches (1.0mm and 2.0mm) | Kai Medical | BP-10F(1.0m), BP-20F(2.0mm) | |
Glass engraving pen | Various | N/A | |
Cleaning solution | Tama Chemicals | TMSC | Dilute 1:100 with deionized water |
Sputter coater | San-yu Electron | SC-708 | For plasma bonding. |
Dispenser syringe (5 ml) | Musashi Engineering | PSY-5E | |
Plunger | Musashi Engineering | FLP-5E | |
Blunt needle (21G) | Musashi Engineering | PN-21G-B | |
Adapter tube | Musashi Engineering | AT-5E | |
Fermenter | Japan Kneader | PF100 | |
Green fluorescent dye (Alexa Fluor 488 carboxylic acid) | Thermo Fisher | A33077 | |
Large plastic dish | Greiner bio-one | 688161 | |
Absorbent paper | Asahi Kasei | BEMCOT M-1 | |
Inverted microscope | Leica | DMi8 | |
Microscope camera | Qimaging | Retiga 2000R | |
Dulbecco modified Eagle medium (DMEM) | GE Health Care | SH30021.01 | |
Antibiotic-antimycotic solution | Thermo Fisher | 15240-062 | |
Trypsin/EDTA solution | Thermo Fisher | 25200-056 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | GE Health Care | SH30256.01 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Biowest | S1820 | |
Cell counter | FPI | OC-C-S02 | |
Cell culture vessel | VIOLAMO | VTC-D100 | |
15 ml conical tube | Corning | 352095 | |
Shop microscope | PEAK | 2034-20 | |
Hand sprayer | FURUPLA | No.3530 | |
Coverglasses (Rectangular) | Matsunami Glass | 10 x 20mm No.4 | |
CAD/CAM software | Autodesk | Inventor HSM | |
Nitrogen gas pressure regulator | AS ONE | GF1-2506-RN-V | Set to 0.1 MPa |