마우스 모델 Rubeosis Iridis의 아이리스 Neovascularization 펑크 유발

Summary

아이리스 neovascularization, 허 혈 성 망막 질환의 일반적인 합병증은 신생 녹 내장 시력을 위협 하 될 수 있습니다. 여기, 우리는 신생 변조 물질의 비 침범 성 평가 위해 사용할 수 있는 실험 아이리스 neovascularization를 유도 하는 murine 프로토콜을 설명 합니다.

Abstract

우리 신생의 비 침범 성 평가 위한 일반적인 모델으로 찔린 유도 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 이 모델은 또한 신생 녹 내장, 당뇨병 성 망막 증의 시력을 위협 하는 합병증을 타겟팅에 대 한 관련. 이 메서드와 BALB/c 마우스에 자체 봉인 포도 구멍의 시리즈에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도에 따라 마우스 눈 맥 관 구조의 산 후 성숙의 활용. 마우스 강아지 포도 자국에서 출생 후 하루 12.5, 새끼 자연스럽 게 열 때 그들의 눈, 산 후 날 24.5까지 받을. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 분석할 수 있습니다 쉽게 시간을 통해 비 침 투 적인 비보에 방법으로. 또한, BALB/c 마우스의 반투명 아이리스 최소한의 일반적인 배경 얼룩과 자세한 immunohistologic 분석에 대 한 flatmounted 수 있습니다. 이 모델에서 신생 주로 염증에 의해 구동 됩니다 하 고 플라스 미노 겐 활성화 시스템. 펑크 유발 모델 작은 설치류에 아이리스 neovascularization를 유도 하기 위해 처음 이며 직접 비 침범 성 비보에 신생 과정의 분석을 허용의 이점이 있다. 또한, 모델 신생 vivo에서 관점의 연구의 가능성을 강조는 신생 변조 물질과 결합할 수 있습니다.

Introduction

홍 채, 모양 체 및 맥락 막, 눈의 가장 vascularized 조직 uvea 구성 되어 있습니다. 홍 채 맥 관 구조는 눈의 앞쪽 챔버에 항상성 유지에 필수적 이다. 동맥과 정 맥 사이의 풍부한 anastomotic 연결, 결과로 아이리스 혈관 영양소 뿐만 아니라 자체, 아이리스 하지만¹눈 앞쪽 전체 세그먼트에 산소의 공급을 제공합니다.

새로운 혈관, 또는 기존의 것 들에서 신생 혈관의 형성은 개발 및 상처 치유²등 생리 적 과정에 기본적 이다. 신생은 가늘게 정식 요인, 플라스 미노 겐 활성 제 억제 물 (파이), 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF) 등 여러 염증 성 요인의 군중에 의해 통제 되 고 이러한 요소의 불균형에 pathologic 이어질 수 있습니다. 신생³.

눈, neovascularization 증식 당뇨 성 망막 증 (PDR) 등 신생 녹 내장 (NVG) 시력을 위협 하는 질병의 원인입니다. 이러한 눈 질환에 초점 neovascularization는 일반적으로 망막 조직에 염증 성 불균형에 있으며 모두 후부와 앞쪽 눈 실에서 눈의 신생 요인 rubeosis iridis와 연결 되어 있는 홍 채 병 적인 neoangiogenesis⁴임상 용어. 이러한 병 리 신생을 성인 아이리스의 기능을 나타냅니다. 마우스에서 눈 맥 관 구조 성숙 출생 후 이며 성숙 산 후 계속. 개발의이 특성은 산소에 유도 된 망막, 밀접 하 게 조산⁵의 망막 질환의 임상 상태를 모방 하는 모델의 마우스 모델에 악용 됩니다. 또한, 신생 염증과 재생 메커니즘⁶, 치유 하는 상처에 중추적인 역할 그리고 상처 자체 치유 신생 모델⁷과 연결 되었습니다.

이 연구에서 우리는 펑크 유발 아이리스 neovascularization의 모델을 설명합니다. 포도 자국 limbus의 외부 한계 근처는 상처 치유 시스템을 실행 하 여 홍 채 neovascularization를 유도 수행 됩니다. 때문에 각 막의 투명도, 아이리스 맥 관 구조 될 수 있습니다 쉽게 비보 비 침 투 적인 방법으로 분석. 구멍이 눈 플라스 미노 겐 활성화 및 염증 성 마커⁸의 증가와 관련 있다 홍 채, 혈관 침대의 증가 제시. 제시 모델 신생 신생 화합물, 상영을 공부 하 고 새로운 도구로 큰 잠재력을가지고 고 직접 vivo에서 신생 프로세스의 시각화를 있습니다.

Protocol

BALB/c 마우스 새끼 어느 섹스의 Ophthalmologic 및 비전 연구, 동물의 사용에 대 한 진술에 따라 사용 되었다 그리고 프로토콜 윤리적인 동물 연구에 대 한 스톡홀름의 위원회에 의해 승인 했다. 쥐 새끼, 12 h 주/야 주기, 음식 및 물, 간호 어머니 함께 되었고 매일 모니터링. 참고: 수술 절차에 대 한 마우스와 휘발성 isoflurane 마 취 유지 했다. 눈 연 고는 치료와 사용 되는 물질을 방해…

Representative Results

P12.5에서 흰둥이 BALB/c 마우스 새끼 4 매일 반복 하는 포도 자국을 복종 되었다 (실험적인 하루 0, 4, 8, 12), P24.5까지. P27.5, 마우스 했다 안락사 고 홍 신중 하 게 해 부 (실험 하루 15). 사진 마우스 눈의 홍 채 혈관 반응의 비 침범 성 평가 평가 모든 펑크 시리즈 각 실험 하루에서 전에 수술 stereoscope에 연결 된 카메라와 함께 촬영 했다. 포도 자국 상처 치유 시스템 (<strong class="xf…

Discussion

현재 프로토콜에서 포도 펑크에 의해 아이리스 혈관 반응의 유도 대 한 새로운 방법을 제공 됩니다. 찔린 상처 치유 메커니즘을 트리거합니다 하 고 아이리스^10,11혈관 응답을 촉진 합니다. 이것은 PDR, NVG, 눈의 뒤 세그먼트에서 망막에서 악화 신생 응답 rubeosis iridis, 홍 채^{12의 증가 vascularization의 임상 상태에서 완결 등 눈 병 리와 ,<…}

Materials

Bonn eye scissors	Bausch & Lomb	23060
Clayman-Vannas curved scissors	Bausch & Lomb	E3383 C
Clayman-Vannas straight scissors	Bausch & Lomb	E3383 S
Objective adapter for camera	Handcrafted	N/A	Or any system that allows adapting a camera to the microscope
Heating Pad 100-110 watts	Non Applicable	N/A	Available in pet/veterinarian stores
Hypodermic 30g beveled needle	KDM GmBH germany	911914
Iphone 4S	Apple	Non Applicable	Or other high resolution image acquistion device
Isoflurane	Baxter	KDG 9623
McPherson tying forceps	Bausch & Lomb	E1815 S
Micro tying forceps	Bausch & Lomb	63140
Minims tetracaine hydrochloride	Bausch & Lomb	N/A	1 % (w/v) Eye Drops
Neutral-buffered formalin	Bioreagens	0018-40
Normal saline solution	Fresenius Kabi	210352	0.9 % (w/v) NaCl in injectable water
Phosphate-buffered saline	ThermoFisher Scientific	10010023	Balanced and buffered PBS pH 7.4
Petri dish 10 cm	Starstedt	83.3902
Petri dish 3 cm	Starstedt	83.3900
Safe Seal Tube 2.0 mL	Starstedt	72.685.200	Or any eppendorf style tubes
TC plate 96-well	Starstedt	83.3924
Transfer pipette 3.5 mL	Starstedt	86.1171	Or any other Pasteur pipette style
Univentor 400 anesthesia unit	Univentor Limited	N/A	Or equivalent flow regulator with induction chamber and mask for volatile anesthesia
Wild M650 surgical microscope	Wild Heerbrugg	N/A	Or other surgical or magnifying stereoscope