Murine distale colostomy gir en murine modell for menneskelig avledning kolitt, en overveiende lymfatisk kolitt i kolon segmentet ekskludert fra fecal strømmen.
Avledning kolitt (DC) er en hyppig klinisk tilstand forekommer hos pasienter med tarm segmenter ekskludert fra fecal strømmen som følge av en viderekobling enterostomy. Etiologien for denne sykdommen er fortsatt dårlig definerte men vises forskjellig fra det klassiske inflammatorisk tarm sykdommer som Crohns sykdom og ulcerøs kolitt. Forskning å dechiffrere patofysiologiske mekanismer fører til utvikling av denne sykdommen har vært hardt hindret av mangelen på en passende murine modell. Denne protokollen genererer en murine modell av DC som muliggjør studiet av immunsystemets rolle og dets interaksjon med microbiome i utviklingen av DC. I denne modellen bruke C57BL/6 dyr er distale deler av kolon utelukket fra fecal strømmen ved å opprette en distale colostomy, utløser utviklingen av mild til moderat betennelse i ekskluderte tarm segmenter og gjengi hallmark lesjoner av menneskelig FM med et moderat systemisk inflammatorisk respons. I motsetning til rotte modell finnes det et stort antall genetisk endret murine modeller på C57BL/6 bakgrunn. Kombinasjonen av disse dyrene med vår modell gjør det mulig for potensielle rollene personlige cytokiner, chemokines eller reseptorer bioaktive molekyler (f.eksinterleukin (IL) -17; Il-10, chemokine CXCL13, chemokine reseptorer CXCR5 og CCR7 og sphingosine-1-fosfat reseptoren 4) skal vurderes i patogenesen av DC. Tilgjengeligheten av congenic musen stammer på C57BL/6 bakgrunn forenkler i stor grad overføringen eksperimenter for å etablere rollene forskjellige celletyper involvert i etiologien FM. Endelig modellen tilbyr muligheten til å vurdere påvirker av lokale tiltak (f.eks, endring av lokale microbiome eller lokale anti-inflammatorisk terapi) på slimhinnene immunitet i berørt og uberørt tarm segmenter og på systemisk immun homeostase.
De siste årene, et betydelig antall ikke-smittsomme kolitt enheter forskjellig fra klassisk inflammatorisk tarm sykdommer (IBDs; dvs., Crohns sykdom eller kolitt ulcerosa) har vært klinisk og histopathologically preget hos mennesker. Patofysiologiske mekanismer fører til utvikling av disse kolitt former er ikke helt forstått delvis fordi aktuelle dyremodeller er knappe. Avledning kolitt er en ansetter nylig beskrevet. Selv om begrepet ble lansert i 1980 av Glotzer1, ble første beskrivelsen av en lignende fenotypen gitt i 1972 av Morson2. Sykdommen utvikler seg i 50% til 91% av pasienter med viderekobling enterostomy, og kliniske intensiteten varierer3,4. Entiteten sykdom gitt årlige forekomsten av rundt 120000 colostomy pasienter i de forente stater, og utgjør en viktig helseproblem.
Det overordnede målet med utvikling av denne protokollen var å gi en murine DC modell som er avhengig av en kolitt utløser lik som sett i menneskelig DC og som gjengir histopathological hovedfunksjonene sykdom av menneskelig. I motsetning til andre murine kolitt modeller, kolitt induksjon i modellen krever ikke genmodifiserte dyr (f.eks, IL-7 transgene mus, N-cadherin dominerende negative mus eller TGFβ– / – mus), bruk av kjemisk irriterende stoffer (f.eks, dekstran sulfat natrium (DSS) – indusert kolitt, eller trinitrobenzene sulfonsyre (TNBS) – indusert kolitt) eller overføring av bestemt celle populasjoner i immun mangelfull mus (som CD45RBhøy overføring modell av kolitt) (for en vurdering, se5). I motsetning til andre modeller lar intakt immunsystemet til våre DC-modellen vurdering av immunologiske mekanismen involvert i DC utvikling. Begrensning av slimhinnene betennelse ekskluderte tarm segmentet lar vurdering av sin ettervirkning mucosal immunitet i andre deler av gastrointestinaltraktus, på immun homeostase i andre immun avdelinger av tarmkanalen (f.eks , Peyers oppdateringer og mesenteriale lymfeknutene), og immun homeostase av hele organismen. Endelig, vår modell utgjør et velegnet verktøy for å undersøke mekanismene som styrer lokale inflammatorisk stimuli fra endringer i den normale lokale miljøet for både den lokale microbiome samt fordøyelsessystemet antigener.
Murine modellen av DC presentert i denne protokollen pålitelig gjengir histopathological funksjonene menneskelige FM (f.eks, de novo utvikling av lymfoide follikler i submucosa betent tarm segmenter, krypten forkorte og reduksjoner i Goblet celle tall). Bortsett fra denne nytte, denne modellen er indusert av en svært lik utløsende faktor og gir en klinisk løpet av moderat til mild alvorlighetsgrad som er mest berørt mennesker.
Å få reproduserbar resultater og akseptabe…
The authors have nothing to disclose.
Ingen
Operation material | |||
heat underlay, 6 watt | ThermoLux, Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
Ethanol 70% (with methylethylketon) | Pharmacie of the University Hospital Greifswald | ||
Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length | Centramed GmbH, Germany | 8308370 | for disinfection of operation field |
Scissor | Aesculap (BRAUN) | BC064R | |
Atraumatic DeBakey forceps | Aesculap (BRAUN) | OC021R | |
Needle holder | Aesculap (BRAUN) | BM012R | |
Vasofix Safety i.v. cannula 22G | Braun Melsungen AG, Germany | 4268091S-01 | |
VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm | ETHICON, Inc. | VCP994H | |
PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm | ETHICON, Inc. | Z991H | |
BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior) | BD Medical | 305501 | |
Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath |
Medications | |||
ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
NaCl 0.9% | Braun Melsungen AG, Germany | 6697366.00.00 | |
Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) | Bayer, Germany | PZN: 01498870 | 0.1 mg/kg s.c. |
Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride) | Grünenthal GmbH, Germany | 10116838 | 1 mg/mL drinking water |
Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) | Cephasaar GmbH, Germany | PZN: 08844252 | 25 mg/kg body weight i.p. |
metronidazole 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germany | PZN: 05543515 | 12.5 mg/kg body weight i.p. |
Food | |||
ssniff M-Z Ereich | ssniff, Germany | V1184-3 | |
Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches | TripleATrading, the Netherlands | SDSHPV-75 | |
Equipment | |||
Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV, Germany | light microscopy | |
VetScan HM 5 | Abaxis, USA | 770-9000 | Veterinary hematology analyzer of 50 µl venous EDTA-blood |
Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath) | Bandelin electronics, Germany | RK 100 H | disinfection of surgical instruments |
Software | |||
NIS-Element BR4 software | Nikon Instruments Europe BV, Germany | ||
GraphPad Prism Version 6 | GraphPad Software, Inc. |