Мышиных дистальной колостомы, Роман модель колита утечки в мышей C57BL/6
Summary
Мышиных дистальной колостомы предоставляет мышиных модель для человека утечки колит, преимущественно лимфоцитарный колит в сегменте кишки, исключены из фекальных поток.
Abstract
Утечки колит (DC) является частым клинического состояния, происходящие в больных с сегментами кишечника, исключены из фекальных поток вследствие отвлечения enterostomy. Этиология этого заболевания остается нечетко, но представляется, отличается от классической воспалительных кишечника таких заболеваний, как болезнь Крона и язвенный колит. Исследования, направленные расшифровать патофизиологические механизмы, ведущие к развитию этого заболевания серьезно затрудняется отсутствием соответствующей мышиных модели. Этот протокол создает модель мышиных DC, что облегчает изучение роль иммунной системы и ее взаимодействия с микрофлора в развитии DC. В этой модели, с использованием животных C57BL/6 дистальной части толстой кишки исключены из фекальных поток, создавая дистальной колостомы, вызывая развитие легкой до умеренной воспаления в сегментах исключенных кишечника и воспроизводя признаком поражения человека Постоянного тока с умеренной системного воспалительного ответа. В отличие от модели крыса большое количество генетически модифицированные мышиных моделях на фоне C57BL/6 доступны. Сочетание этих животных с нашей моделью позволяет потенциальной роли отдельных цитокинов, chemokines или рецепторов биоактивных молекул (например, интерлейкина (IL) -17; IL-10, хемокиновых CXCL13, хемокиновых рецепторов CXCR5 и CCR7 и рецептор сфингозин-1-фосфата 4) следует оценивать в патогенезе DC. Наличие congenic мыши штаммов на фоне C57BL/6 во многом облегчает передачи эксперименты по созданию ролей типов различных клеток, участвующих в этиологии DC. Наконец, модель дает возможность оценить влияние местных вмешательств (например, модификация местных микрофлора или местных противовоспалительная терапия) на иммунитет слизистой кишечника, подверженных и не подверженных сегментов и по системного иммунного гомеостаза.
Introduction
В последние годы значительное число субъектов колит неинфекционной, отличается от классической воспалительные заболевания кишечника (IBDs; т.е., ulcerosa колит или болезнь Крона) histopathologically и клинически характеризуется в организме человека. Патофизиологические механизмы, ведущие к развитию этих форм колит не поняты полностью частично потому, что соответствующие Животные модели являются скудными. Колит утечки является одним из этих недавно описан сущностей. Хотя термин был придуман в 1980 году Glotzer1, первоначальное описание подобный фенотип было дано в 1972 Morson2. Болезнь развивается в 50% до 91% больных с отвлечения enterostomy и интенсивности ее клинические меняется3,4. Учитывая ежегодной заболеваемости около 120000 колостомы больных в Соединенных Штатах Америки, эта болезнь сущность является важной проблемой здравоохранения.
Общая цель разработки этого протокола был предоставлять мышиных DC модель опирается на триггер колит, аналогичного тому, которое наблюдалось в человека DC и что воспроизводит основной Гистопатологические особенности заболеваний человека. В отличие от других моделей мышиных колит, колит индукции в нашей модели не требуют генетически измененных животных (например, IL-7 трансгенных мышей, N-Кадгерины доминирующей негативные мышей или TGFβ– / – мышей), применение химически раздражающие вещества (например, декстран сульфата натрия (DSS) – индуцированного колит или ТРИНИТРОБЕНЗОЛ перфтороктановой сульфоновой кислоты (ТНБ) – индуцированной колит), или перемещение населения конкретных клеток в иммунной несовершенным мышей (как ввысокой передачи CD45RB модель колита) (обзор, см.5). В отличие от других моделей неповрежденной иммунной системы нашей модели постоянного тока позволяет оценки иммунологического механизма участвуют в развитии DC. Ограничение воспаления слизистых оболочек в сегмент исключенных кишечника позволяет оценить его последствия на слизистой иммунитета в других частях желудочно-кишечного тракта, на иммунного гомеостаза в другие иммунные отсеках кишечного тракта (например , Патчи и mesenteriale лимфоузлы Peyer) и на иммунного гомеостаза всего организма. Наконец наша модель представляет собой соответствующий инструмент для изучения механизмов, контролирующих местных воспалительных раздражителей, возникая от изменений в нормальных местной окружающей среды для как местные микрофлора, а также пищевых антигенов.
Protocol
Representative Results
Discussion
Мышиных модель DC, представленные в настоящем Протоколе надежно воспроизводит Гистопатологические особенности человека DC (например, de novo развитие лимфоидных фолликулов в подслизистой воспаление кишечника сегментов, склеп сокращения и сокращения Кубок числа клеток). Помимо э…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Нет
Materials
| Operation material | |||
| heat underlay, 6 watt | ThermoLux, Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
| Ethanol 70% (with methylethylketon) | Pharmacie of the University Hospital Greifswald | ||
| Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length | Centramed GmbH, Germany | 8308370 | for disinfection of operation field |
| Scissor | Aesculap (BRAUN) | BC064R | |
| Atraumatic DeBakey forceps | Aesculap (BRAUN) | OC021R | |
| Needle holder | Aesculap (BRAUN) | BM012R | |
| Vasofix Safety i.v. cannula 22G | Braun Melsungen AG, Germany | 4268091S-01 | |
| VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm | ETHICON, Inc. | VCP994H | |
| PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm | ETHICON, Inc. | Z991H | |
| BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior) | BD Medical | 305501 | |
| Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath |
| Medications | |||
| ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
| Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
| NaCl 0.9% | Braun Melsungen AG, Germany | 6697366.00.00 | |
| Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) | Bayer, Germany | PZN: 01498870 | 0.1 mg/kg s.c. |
| Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride) | Grünenthal GmbH, Germany | 10116838 | 1 mg/mL drinking water |
| Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) | Cephasaar GmbH, Germany | PZN: 08844252 | 25 mg/kg body weight i.p. |
| metronidazole 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germany | PZN: 05543515 | 12.5 mg/kg body weight i.p. |
| Food | |||
| ssniff M-Z Ereich | ssniff, Germany | V1184-3 | |
| Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches | TripleATrading, the Netherlands | SDSHPV-75 | |
| Equipment | |||
| Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV, Germany | light microscopy | |
| VetScan HM 5 | Abaxis, USA | 770-9000 | Veterinary hematology analyzer of 50 µl venous EDTA-blood |
| Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath) | Bandelin electronics, Germany | RK 100 H | disinfection of surgical instruments |
| Software | |||
| NIS-Element BR4 software | Nikon Instruments Europe BV, Germany | ||
| GraphPad Prism Version 6 | GraphPad Software, Inc. |
References
- Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream. Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).
- Morson, B., Dawson, I. . Gastrointestinal Pathology. , (1972).
- Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. Diversion colitis. A prospective study. Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).
- Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy. Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).
- Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues. Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).
- Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis. Biomed Res Int. 2017, 13 (2017).
- Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice. J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).
- Soave, O., Brand, C. D. Coprophagy in animals: a review. Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).
- Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice–is coprophagy beneficial on a balanced diet. Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).
- Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).
- Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer. J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).
- Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects. Virulence. 5, 12-19 (2013).
- Brown, R. Z. Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L). Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).
- Poole, T. B., Morgan, H. D. R. Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes. Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).
- Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice. Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).
- Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice. Stress. 20, 10-18 (2017).
- Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).
- Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).
- Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis. Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).
- Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).
- Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. Genetic differences among C57BL/6 substrains. Exp Anim. 58, 141-149 (2009).
- Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice. Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).
- Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm. J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).
