Her presenterer vi en protokoll for å teste anlegg virulens med anlegget patogen Magnaporthe grisea. Denne rapporten vil bidra til storskala screening av pathotypes av sopp isolerer og tjene som et utgangspunkt for å forstå motstandsdyktig mekanismer for planter under molekylær avl.
Planter har et kraftig system for å forsvare seg mot potensielle trusler av patogene sopp. For agriculturally viktig planter, men gjeldende tiltak for å bekjempe slike patogener bevise for konservative og dermed ikke tilstrekkelig effektiv, og de kan potensielt utgjøre miljørisiko. Derfor er det svært nødvendig å identifisere vert-motstand faktorene å hjelpe inne kontrollerende anlegget sykdommer naturlig gjennom identifikasjon av motstandsdyktig germplasm, isolering og karakterisering av motstand gener og molekylære oppdrett av motstandsdyktig kultivarer. I denne forbindelse, det er behov å etablere en nøyaktig, rask og omfattende inoculation metode å avle og utvikle anlegget motstand gener. Ris sprenge fungal patogen Magnaporthe grisea forårsaker alvorlig sykdomssymptomer og yield tap. M. grisea har nylig dukket opp som en modell organisme for å studere mekanismer av plante-fungal patogen interaksjoner. Derfor rapportere vi utviklingen av en plante virulens test metoden som gjelder M. grisea. Denne metoden gir både spray inoculation med en conidial suspensjon og såret inoculation med mycel kuber eller dråper av conidial suspensjon. Det viktigste trinnet i såret inoculation metoden for frittstående ris blader er å lage sår på anlegget blader, som unngår forstyrrelser forårsaket av verten gjennomtrenging motstand. Dette spray/såret protokollen bidrar til rask, nøyaktig og omfattende screening av pathotypes av M. grisea isolerer. Dette integrert og systematisk anlegget infeksjon metoden vil tjene som et utgangspunkt for å få et bredt perspektiv av problemene i anlegget patologi.
Ris blast, forårsaket av M. grisea, er en av de mest alvorlige sykdommene for ris varianter verdensomspennende1,2. Prosessen som M. grisea infiserer Salix inkluderer conidia produksjon og overflate vedlegg, en conidia spiring og appressorium formasjon, en formasjon av penetrasjon pinne og smittsomme hypha differensiering, og en sykdom spre 3. alle disse stadiene er vanlig i mange andre plante patogene sopp, og, faktisk, en blokade av helst enkelt forhindrer infeksjon av Salix. Den økonomiske betydningen og genetisk tractability, M. grisea har dukket opp som en modell organisme for å studere mekanismer av plante-fungal patogen interaksjoner1,4. Derfor vil studere molekylære grunnlaget for disse utviklingsstadier i M. grisea bidra til å belyse molekylære mekanismer underliggende fungal virusets og identifikasjon av kandidat målet gener for screening og utforme roman soppmidler5.
Nylige rapporter om M. grisea infeksjon har fokusert på molekylære mekanismer av pre penetrasjon scenene, spesielt conidiation, appressorium dannelse, penetrasjon pinnene og smittsomme vekst3, 6. det er derfor viktig å utvikle en detaljert protokoll for å teste M. grisea infeksjon. Her presenterer vi en detaljert metode for en infeksjon test som benytter spray-mediert infeksjon analyser med en conidial suspensjon og inoculation av sår med mycelial pluggene til M. grisea. I denne rapporten fokuserer protokollen på kultur stammer, utarbeidelse av den conidiation løsningen for sprøyting og mycelial plug-mediert inoculation planter med M. grisea. Denne fremgangsmåten er beskrevet i detalj nedenfor, og en skjematisk visning viser hele arbeidsflyten metoden og en typisk lesjon er vist i figur 1 og 2, henholdsvis.
Plante sykdom motstand genene spiller en viktig rolle i å forebygge infeksjoner av patogener, inkludert sopp patogener1,12. Ris blast er brukt som modell å forstå naturen av patogen befolkningen strukturer og identifisere anlegget motstand gener4. Derfor er det nødvendig å undersøke sykdom motstand genotype og avirulence genotyper av de viktigste variantene av agricultural planter i stor skala å identifisere sykdom-motstandsdyktig p…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av spesiell vitenskapelig prosjektet Beijing landbruk University (YQ201603) og vitenskapelige prosjektet i Beijing pedagogiske Committee (KM201610020005).
Agar | AOBOX Biotechnology(China) | 01-023 | |
Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
Tween-20 | Coolaber(China) | CT11551-100ml | |
Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
Vacuum pump | Leybold | D25B | |
Dissection needle | FST | 26000-35 | |
Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |