Biologische verenigbaarheid profiel op biomaterialen voor bot regeneratie
Summary
Het aantal nieuwe biomaterialen ontworpen voor het herstellen van grote bot laesies groeit voortdurend met als doel het verbeteren bot genezing en het overwinnen van de complicaties geassocieerd met bot transplantatie. Hier presenteren we een multidisciplinaire strategie voor preklinische biocompatibiliteit testen van biomaterialen voor bot reparatie.
Abstract
Grote non-adhesie botbreuken zijn een belangrijke uitdaging in de orthopedische chirurgie. Hoewel de auto- en allogene bottransplantaten uitstekend geschikt zijn voor de genezing van dergelijke laesies, zijn er mogelijke complicaties met hun gebruik. Dus, materiële wetenschappers ontwikkelen synthetische, biocompatibel biomaterialen om deze problemen. In deze studie presenteren wij een multidisciplinair platform voor de evaluatie van biomaterialen voor bot reparatie. We expertise uit bot biologie en immunologie te ontwikkelen van een platform met inbegrip van in vitro osteoclast (OC) en osteoblast (OB) testen en in vivo Muismodellen van bot reparatie, immunogeniciteit en allergeniciteit gecombineerd. We laten zien hoe uit te voeren van de experimenten, het samenvatten van de resultaten, en het verslag over biomaterial biocompatibiliteit. In het bijzonder, we getest OB levensvatbaarheid, differentiatie, en mineralisatie en OC levensvatbaarheid en differentiatie in de context van β-tricalciumfosfaat fosfaat (β-TCP) schijven. We zijn ook getest met een β-TCP/collageen (β-TCP/C) schuim die een commercieel beschikbare materiaal gebruikte klinisch voor bot reparatie in een kritische en middelgrote calvarial bot defect muismodel om te bepalen van de effecten op de vroege fase van het bot genezing. We geëvalueerd in parallelle experimenten, immuun en allergische reacties in muizen. Onze aanpak genereert een profiel van de biologische verenigbaarheid van een bot-biomaterial met een aantal parameters nodig voor het voorspellen van de biocompatibiliteit van biomaterialen gebruikt voor bot genezing en het herstel bij patiënten.
Introduction
Bot reparatie is een complex proces dat met de vorming van het hematoom, ontsteking begint, callus vorming en vervolgens het remodelleren van1,2. Bot regeneratie potentiële is echter beperkt tot de omvang van de bot fractuur1,3. Bijvoorbeeld grote botbreuken, veroorzaakt door trauma, kanker of osteoporose kunnen niet genezen en non-adhesie botbreuken worden genoemd. Deze letsels bot vereisen vaak behandeling ter bevordering van gezonde fysiologische bot reparatie en regeneratie. Momenteel, autograft en allograft bot transplantatie is de aanpak van keuze4 met 2,2 miljoen bot vervanging procedures jaarlijks5. Hoewel deze procedures een hoog slagingspercentage hebben, kunnen er complicaties, bijvoorbeeld, beperkte beschikbaarheid van bot, infectie, donor site morbiditeit en afwijzing4. Nieuwe alternatieven voor weefselengineering bot worden gezocht om deze uitdagingen.
Het ontwerp van biomaterialen op basis van natuurlijke of synthetische polymeren, Biokeramiek of metalen in combinatie met cellen en bioactieve moleculen is op de stijging-6. Ons huidige begrip van fysiologische bot genezing en genezing in de context van biomaterialen is afhankelijk van meerdere factoren zoals de mechanische eigenschappen en meerdere lokale en systemische factoren, met inbegrip van cellen uit de omloop en de breuk site7 ,8,9. Biomaterialen voor bot regeneratie gericht op de bevordering van osteogenicity en Osseointegratie10 en zijn een ideale biocompatibel, biologisch afbreekbaar en poreuze (bevordering van cel migratie, zuurstof en voedingsstoffen). Ze moeten ook sterk genoeg ter ondersteuning van de site van de fractuur ter verlichting van de pijn. Daarnaast zijn inflammatoire factoren vereist het helende proces in te leiden. Echter als de biomaterial buitensporige ontstekingen en allergische reacties induceert, kan dit beperken of hinderen van bot genezing11,12. Een interdisciplinaire benadering is dus nodig om te evalueren van biomaterialen ontwikkeld voor bot reparatie.
In deze studie presenteren wij een preklinische evaluatie van representatieve materialen, 1) Orthovita Vitoss schuim die een commercieel beschikbare poreus Bottransplantatievervanging bestaande uit tricalciumfosfaat is samengesteld uit nanometer middelgrote pure β-tricalciumfosfaat fosfaat (β-TCP) deeltjes en boviene collageen Type 1 (C) (β-TCP/C schuim) en 2) β-TCP schijven. Hier, we illustreren biocompatibiliteit testen van deze primaire osteoblast (OB) met biomaterialen en osteoclast (OC) testen, een in vivo model van bot reparatie, immunologische eenbeoordeling bestaande uit in vitro T lymfocyten proliferatie en cytokine productie, en in vivo immunogeniciteit en allergeniteit, als eerder gemeld13.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hier, laten we een multidisciplinaire aanpak voor de preklinische beoordeling van biocompatibiliteit voor representatieve biomaterialen ontwikkeld voor bot regeneratie en reparatie. We testten de reacties van OBs, OCs, en de helende reactie van in vivo in een kritische bot defect model in muizen, alsmede in vitro en in vivo immuunrespons. We gericht om aan te tonen hoe de testen werken en de gegevens en conclusies die zijn afgeleid van het onderzoek van de biomaterialen samen te vatten. We late…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit onderzoeksproject heeft financiering ontvangen van de Europese Unie zevende kaderprogramma (KP7/2007-2013) onder subsidie overeenkomst nr. 263363.
Materials
| Biomaterials | |||
| β-tricalcium phosphate disks (β-TCP, 14 mm) | Disks were sintered in a muffle furnace at a temperature of 1150 °C. A detailed description of the production can be found in Zimmer et al (doi: 10.1002/jbm.a.34639). Samples were UV-irradiated (15 min for each side) before using in cell cultures. | ||
| Orthovita Vitoss foam (β-TCP/C foam) | Orthovita | 2102-1405 | |
| Mouse osteoblast culture | |||
| Alizarin Red S | Sigma-Aldrich | A5533 | |
| ALP assay buffer (2x) pH 10.4 | Dissolve 200 mM glycine, 2 mM magnesium chloride, 2 mM zinc chloride in ultrapure water and adjust to pH 10. | ||
| Bone growth medium (BGM) | α-MEM + 10% heat-inactivated FBS + 1% penicillin/streptomycin | ||
| Cell lysis buffer: CyQuant cell lysis buffer 20x concentrate | Thermo Scientific | C7027 | Dilute the concentrated cell lysis buffer stock 20-fold in ultrapure water. |
| Cell viability reagent: Presto Blue cell viability reagent | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | A13261 | |
| Collagenase type IV from clostridium histolyticum | Sigma-Aldrich | C5138 | |
| DC protein assay kit II | Bio Rad | 5000112 | DC protein assay kit contains reagent A, reagent B, reagent S and BSA for the reference standard. For reagent A', add 20 µL reagent S to 1000 µL reagent A. |
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D8418 | Steril-filter DMSO before usage. |
| Dispase II (neutral protease, grade II) | Roche | 4942078001 | |
| EnzCheck Phosphatase Assay Kit for alkaline phosphatase activity | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | E12020 | EnzCheck Phosphatase Assay Kit contains 6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl phosphate (DiFMUP), N,N-dimethylformamide and 6,8-difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin (DiFMU). |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma-Aldrich | F7524 | |
| Formalin solution neutral buffered 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| Glycine | Sigma-Aldrich | G8898 | |
| Hexadecylpyrdinium (cetylpyridinium) chloride monohydrate | Sigma-Aldrich | C9002 | |
| L-Ascorbic acid 2-phosphate sesquimagnesium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A8960 | |
| Magnesium chloride hexahydrate | Sigma-Aldrich | M2670 | |
| MEM alpha medium (α-MEM) | Gibco Life Technologies | 11900-073 | |
| Osteogenic mineralization medium (MM) | α-MEM + 10% heat-inactivated FBS + 1% penicillin-streptomycin + 50 µg/mL ascorbic acid + 5 mM β-glycerophosphate | ||
| Penicillin-streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Sigmafast BCIP/NBT | Sigma-Aldrich | B5655 | |
| Trypsin-EDTA (0.5%), no phenol red (10x) | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 15400054 | Dilute the concentrated stock solution 10-fold in 1x PBS. |
| Tween20 | Sigma-Aldrich | P1379 | |
| Ultrapure water: Cell culture water pyrogen free | VWR | L0970-500 | |
| Wash buffer | Add 0.05% Tween20 to 1x PBS. | ||
| Zinc chloride | Sigma-Aldrich | 1.08816 | |
| β-Glycerophosphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | G5422 | |
| 24-well suspension culture plate | Greiner bio-one | 662102 | |
| 24-well tissue culture plate | Greiner bio-one | 662160 | |
| 50 mL conical tube | Greiner bio-one | 227261 | |
| 96-well black plate | Greiner bio-one | 655076 | |
| 96-well transparent plate | Greiner bio-one | 655001 | |
| Centrifuge: VWR Mega Star 600R | VWR | ||
| CO2-Incubator: HeraCell 240 | Thermo Scientific | ||
| Cryovial 2 mL | Greiner bio-one | 122263 | |
| Disposable filter unit FP30/0.2 CA-S | GE Healthcare Life Sciences Whatman | 10462200 | For sterile filtration of enzyme solution. |
| Flatbed scanner: Epson Perfection 1200 Photo | Epson | ||
| Infinite M200 Pro microplate reader | Tecan | ||
| Microcentrifuge tube: Eppendorf tube safe-lock 0.5 mL | VWR | 20901-505 | |
| Microcentrifuge tube: Eppendorf tube safe-lock 1.5 mL | VWR | 21008-959 | |
| Shaker Swip (orbital and horizontal) | Edmund Buehler | ||
| Shaking incubator GFL3032 | GFL | 3032 | |
| Single-use pipet: serum pipet | Greiner bio-one | 612301 | |
| Sterile instruments (scissors, tweezer, curved forceps) | |||
| Tissue culture plate (10 cm) | Greiner bio-one | 664960 | |
| Mouse osteoblast-osteoclast co-culture | |||
| 1α,25-Dihydroxyvitamin D3 | Sigma-Aldrich | 17936 | 1000x concentrated stock (10 µM in ethanol 100%) |
| Acetone | VWR Chemicals | 22065.327 | |
| Bone growth medium (BGM) | α-MEM + 10% heat-inactivated FBS + 1% penicillin-streptomycin | ||
| Distilled water | Carl Roth | 3478.4 | |
| Ethanol (100% vol/vol) | VWR Chemicals | 20821.365 | |
| Ethanol (70% vol/vol) | VWR Chemicals | 93003.1006 | |
| Fast red violet LB salt | Sigma-Aldrich | F3381 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma-Aldrich | F7524 | |
| Formalin solution neutral buffered 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| MEM alpha Medium (α-MEM) | Gibco Life Technologies | 11900-073 | |
| N,N-Dimethylformamide | Sigma-Aldrich | D4551 | |
| Naphthol AS-MX phosphate | Sigma-Aldrich | N4875 | |
| Osteoclast differentiation medium (DM) | α-MEM + 10% heat-inactivated FBS + 1% penicillin-streptomycin + 1 nM 1,25-(OH)2-vitamin D3 + 1 µM prostaglandin E2 | ||
| Penicillin-streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 | |
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Prostaglandin E2 (PGE2) | Cayman Chemical Company | 9003016 | 1000x concentrated stock (1 mM in ethanol 100%) |
| Sodium acetate trihydrate | Sigma-Aldrich | S7670 | |
| Sodium tartrate dibasic dihydrate | Sigma-Aldrich | S8640 | |
| Sterile instruments (scissors, forceps, scalpel) | |||
| TRAP buffer pH 5.0 | Dissolve 40 mM sodium acetate, 10 mM sodium tartrate in ultrapure water and adjust to pH 5. | ||
| Ultrapure water: Cell culture water pyrogen free | VWR | L0970-500 | |
| 24-well suspension culture plate | Greiner bio-one | 662102 | |
| 24-well tissue culture plate | Greiner bio-one | 662160 | |
| 50 mL conical tube | Greiner bio-one | 227261 | |
| Centrifuge: VWR Mega Star 600R | VWR | ||
| CO2-Incubator: HeraCell 240 | Thermo Scientific | ||
| Diamond wafering blade (10.2 cm x 0.3 cm) | Buehler | ||
| Isomet low-speed saw | Buehler | ||
| Petri dish (6 cm) | Greiner bio-one | 628,161 | |
| Screw cap glass bottle 20 mL | Carl Roth | EXY4.1 | |
| Single-use sterile syringe 1 mL | Henry Schein Animal Health | 9003016 | |
| Single-use pipet: serum pipet | Greiner bio-one | 612301 | |
| Sterile needle: Hypodermic needle RW 27 G x 3/4'' | Henry Schein Animal Health | 9003340 | |
| Mouse calvarial defect model | |||
| Analgesia: Buprenorphine (Bupaq) | Richter Pharma AG | ||
| Anesthesia: Ketamine (Ketamidor), Xylazine (Rompun) | Richter Pharma AG/Bayer HealthCare | ||
| Cold sterilant: SafeSept Max | Henry Schein Animal Health | 9882765 | |
| Ethanol (70% vol/vol) | VWR Chemicals | 93003.1006 | |
| Eye ointment: VitA POS 5 g | Ursapharm | ||
| Normal saline solution (0.9% sodium chloride solution) | Fresenius Kabi | ||
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Povidone iodine solution: Braunol 1000 mL | B. Braun | 3864154 | |
| Roti-Histofix 4.5% buffered formalin | Carl Roth | 2213.6 | |
| Tissue adhesive: Histoacryl 5 x 0.5 mL | B. Braun Surgical | 1050060 | |
| Personal protective equipment: surgical gloves, cap and mask, gown | Henry Schein Animal Health | 1045073, 1026614, 9009062, 370406 | |
| Sterile instruments (scalpel, scissors, forceps, needle holder) | |||
| Sterile needles: Hypodermic needles RW 27 G x 3/4'' and 30 G x 1/2'' | Henry Schein Animal Health | 9003340, 9003630 | |
| Single-use sterile syringe 1 mL | Henry Schein Animal Health | 9003016 | |
| Heating plate: Physitemp | Rothacher Medical | TCAT-2LV | |
| Sterile gauze swabs | Henry Schein Animal Health | 220192 | |
| Sterile disposable scalpel (Figur 20) | Henry Schein Animal Health | 9008957 | |
| Surgical/dental drill: Implantmed SI-923 | W&H Dentalwerk Bürmoos GmbH | 16929000 | |
| Handpiece type S-II | W&H Dentalwerk Bürmoos GmbH | 30056000 | |
| Trephine, diameter 4 mm | Hager&Meisinger GmbH | 229040 | |
| Irrigation tubing set 2.2 m | W&H Dentalwerk Bürmoos GmbH | 4363600 | |
| Periosteal elevator 2 mm / 3 mm | Henry Schein Animal Health | 472683 | |
| Non-resorbable suture: Polyester green, DS19, met. 1.5, USP 4/0 75 cm | Henry Schein Animal Health | 300715 | |
| In vitro immune responses | |||
| Anesthesia for euthanasia: Ketamine (Ketamidor), Xylazine (Rompun) | Richter Pharma AG/Bayer HealthCare | ||
| Cell Proliferation ELISA, BrdU (colorimetric) Assay Kit | Sigma-Aldrich | 11647229001 | The kit contains BrdU labeling solution, fixation solution (FixDenat), Anti-BrdU antibody solution, washing buffer and substrate solution. |
| Concanavalin A (ConA) | MP Biomedicals | 150710 | |
| Culture medium splenocytes | RPMI medium + 10% heat-inactivated FBS + 1% penicillin-streptomycin solution + 0.1% gentamicin + 0.2% ß-mercaptoethanol + 1% non-essential amino acids | ||
| Ethanol (70% vol/vol) | VWR Chemicals | 93003.1006 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10500064 | |
| Gentamicin | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 15750037 | |
| Mouse IL-1β ELISA Ready-SET-Go! | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | 88-7013-88 | |
| Mouse IL-2 ELISA MAX Standard | BioLegend | 431001 | |
| Mouse IL-4 ELISA MAX Standard | BioLegend | 431101 | |
| Mouse INF-γ ELISA MAX Standard | BioLegend | 430801 | |
| Non-essential amino acids solution | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11140050 | |
| Penicillin-streptomycin | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 15140122 | |
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Red blood cell (RBC) lysis buffer: BD Pharm Lyse | BD Bioscience | 555899 | |
| RPMI 1640 medium, HEPES | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 52400025 | |
| β-Mercaptoethanol | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 31350010 | |
| 50 mL conical tube | Greiner bio-one | 227261 | |
| 96-well tissue culture plate | Greiner bio-one | 655180 | |
| Centrifuge: VWR Mega Star 600R | VWR | ||
| Cell strainer 40 µm | BD Bioscience | 352340 | |
| Infinite M200 Pro microplate reader | Tecan | ||
| Single-use sterile syringe 1 mL | Henry Schein Animal Health | 9003016 | |
| Sterile surgical instruments (forceps, glass slides) | |||
| High throughput intraperitoneal model | |||
| Anesthesia: Ketamine (Ketamidor), Xylazine (Rompun) | Richter Pharma AG/Bayer HealthCare | ||
| Cold sterilant: SafeSept Max | Henry Schein Animal Health | 9882765 | |
| Ethanol (70% vol/vol) | VWR Chemicals | 93003.1006 | |
| Eye ointment: VitA POS 5 g | Ursapharm | ||
| Mouse IL-1β ELISA Ready-SET-Go! | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | 88-7013-88 | |
| Mouse IL-2 ELISA MAX Standard | BioLegend | 431001 | |
| Mouse IL-4 ELISA MAX Standard | BioLegend | 431101 | |
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Povidone iodine solution: Braunol 1000 mL | B. Braun | 3864154 | |
| Shandon Rapid-Chrome Kwik-Diff Staining Kit | Thermo Scientific | 9990700 | For differential cell count. |
| Heating plate: Physitemp | Rothacher Medical | TCAT-2LV | |
| Hemocytometer: Neubauer chamber | Carl Roth | PC72.1 | |
| Non-resorbable suture: Ethibond Excel 4-0 | Ethicon | 6683H | |
| Resorbable suture: Polysorb | Covidien | SL-5628 | |
| Shandon centrifuge for cytopsin | Thermo Scientific | ||
| Single-use sterile syringe 1 mL | Henry Schein Animal Health | 9003016 | |
| Sterile gauze swabs | Henry Schein Animal Health | 220192 | |
| Sterile needles: Hypodermic needles RW 27 G x 3/4'' and 25 G | Henry Schein Animal Health | 9003340, 420939 | |
| Sterile surgical instruments (scalpel, scissors, forceps, needle holder) | |||
| Trypan blue solution 0.4% | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 15250061 | |
| Subchronic subcutaneous model | |||
| Anesthesia: Ketamine (Ketamidor), Xylazine (Rompun) | Richter Pharma AG/Bayer HealthCare | ||
| Cold sterilant: SafeSept Max | Henry Schein Animal Health | 9882765 | |
| Ethanol (70% vol/vol) | VWR Chemicals | 93003.1006 | |
| Eye ointment: VitA POS 5 g | Ursapharm | ||
| Phosphate-buffered saline 1x (PBS) pH 7.4 | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Povidone iodine solution: Braunol 1000 mL | B. Braun | 3864154 | |
| Roti-Histofix 4.5% buffered formalin | Carl Roth | 2213.6 | |
| Heating plate: Physitemp | Rothacher Medical | TCAT-2LV | |
| Non-resorbable suture: Ethibond Excel 4-0 | Ethicon | 6683H | |
| Personal protective equipment: surgical gloves, cap and mask, gown | Henry Schein Animal Health | 1045073, 1026614, 9009062, 370406 | |
| Single-use sterile syringe 1 mL | Henry Schein Animal Health | 9003016 | |
| Sterile gauze swabs | Henry Schein Animal Health | 220192 | |
| Sterile instruments (scalpel, scissors, forceps, needle holder) | |||
| Sterile needle: Hypodermic needles RW 27 G x 3/4'' | Henry Schein Animal Health | 9003340, 420939 | |
References
- Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: mechanisms and interventions. Nature Reviews Rheumatology. 11 (1), 45-54 (2015).
- Marsell, R., Einhorn, T. A. The biology of fracture healing. Injury. 42 (6), 551-555 (2011).
- Cooper, G. M., et al. Testing the critical size in calvarial bone defects: revisiting the concept of a critical-size defect. Plastic and Reconstructive Surgery. 125 (6), 1685-1692 (2010).
- O’Brien, F. J. Biomaterials & scaffolds for tissue engineering. Materials Today. 14 (3), 88-95 (2011).
- Stanovici, J., et al. Bone regeneration strategies with bone marrow stromal cells in orthopaedic surgery. Current Research in Translational Medicine. 64 (2), 83-90 (2016).
- Anderson, J. M. Future challenges in the in vitro and in vivo evaluation of biomaterial biocompatibility. Regenerative Biomaterials. 3 (2), 73-77 (2016).
- Chen, Z., et al. Osteoimmunomodulation for the development of advanced bone biomaterials. Materials Today. 19 (6), 304-321 (2016).
- Ono, T., Takayanagi, H. Osteoimmunology in bone fracture healing. Current Osteoporosis Reports. 15 (4), 367-375 (2017).
- Tsiridis, E., Upadhyay, N., Giannoudis, P. Molecular aspects of fracture healing: Which are the important molecules?. Injury. 38, S11-S25 (2007).
- Velasco, M. A., Narvaez-Tovar, C. A., Garzon-Alvarado, D. A. Design, materials, and mechanobiology of biodegradable scaffolds for bone tissue engineering. BioMed Research International. 2015, 729076 (2015).
- Bastian, O., et al. Systemic inflammation and fracture healing. Journal of Leukocyte Biology. 89 (5), 669-673 (2011).
- El-Jawhari, J. J., Jones, E., Giannoudis, P. V. The roles of immune cells in bone healing; what we know, do not know and future perspectives. Injury. 47 (11), 2399-2406 (2016).
- Changi, K., et al. Biocompatibility and immunogenicity of elastin-like recombinamer biomaterials in mouse models. Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 106 (4), 924-934 (2018).
- Laczko, J., Levai, G. A simple differential staining method for semi-thin sections of ossifying cartilage and bone tissues embedded in epoxy resin. Mikroskopie. 31 (1-2), 1-4 (1975).
- Nakayama, T., et al. Polarized osteoclasts put marks of tartrate-resistant acid phosphatase on dentin slices–a simple method for identifying polarized osteoclasts. Bone. 49 (6), 1331-1339 (2011).
- Deguchi, T., et al. In vitro model of bone to facilitate measurement of adhesion forces and super-resolution imaging of osteoclasts. Scientific Reports. 6, 22585 (2016).
- Epstein, N. E. An analysis of noninstrumented posterolateral lumbar fusions performed in predominantly geriatric patients using lamina autograft and beta tricalcium phosphate. Spine Journal. 8 (6), 882-887 (2008).
- Epstein, N. E. Beta tricalcium phosphate: observation of use in 100 posterolateral lumbar instrumented fusions. Spine Journal. 9 (8), 630-638 (2009).
- Kallai, I., et al. Microcomputed tomography-based structural analysis of various bone tissue regeneration models. Nature Protocols. 6 (1), 105-110 (2011).
- Lo, D. D., et al. Repair of a critical-sized calvarial defect model using adipose-derived stromal cells harvested from lipoaspirate. Jove-Journal of Visualized Experiments. (68), (2012).
- Gosain, A. K., et al. Osteogenesis in calvarial defects: contribution of the dura, the pericranium, and the surrounding bone in adult versus infant animals. Plastic and Reconstructive Surgery. 112 (2), 515-527 (2003).
- Levi, B., et al. Dura mater stimulates human adipose-derived stromal cells to undergo bone formation in mouse calvarial defects. Stem Cells. 29 (8), 1241-1255 (2011).
- Wang, J., Glimcher, M. J. Characterization of matrix-induced osteogenesis in rat calvarial bone defects: II. Origins of bone-forming cells. Calcified Tissue International. 65 (6), 486-493 (1999).
