Мы описать систему, которая использует три метода для оценки безопасности и эффективности препарата плаценты целевой доставки: в vivo imaging для мониторинга наночастиц накопления, высокочастотный ультразвук для мониторинга развития плаценты и плода и ВЭЖХ для количественного определения доставку лекарственного препарата в ткани.
В настоящее время нет эффективного лечения существуют для осложнений беременности, плацента связанные, и разработки стратегий для целенаправленной доставки препаратов плаценты при сведении к минимуму побочные эффекты матери и плода остается сложным. Целевые наночастиц перевозчики обеспечивают новые возможности для лечения плацентарной расстройств. Недавно мы продемонстрировали, что пептид синтетических плацентарной хондроитин сульфат A привязки (plCSA-BP) могут использоваться для руководства наночастиц для доставки препаратов плаценты. В этом протоколе, мы подробно описать систему для оценки эффективности доставки наркотиков в плаценту, plCSA-BP, которая использует три отдельных методов, используемых в комбинации: в vivo изображений, высокочастотный ультразвук (HFUS) и высокая производительность Жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Используя в естественных условиях изображений, plCSA ВР руководствуясь наночастиц были подробно освещены в плаценты живых животных, в то время как HFUS и ВЭЖХ показали, что plCSA ВР конъюгированных наночастиц эффективно и конкретно доставлен метотрексата плаценты. Таким образом сочетание этих методов может использоваться как эффективный инструмент для целенаправленной доставки препаратов плаценты и разработки новых стратегий лечения ряда осложнений беременности.
Осложнения беременности, плацента опосредованной, включая преэклампсии, потери беременности, отслойка и малые гестационного возраста (SGA), являются общими и приводят к существенной плода и материнской заболеваемости и смертности1,2, 3и очень немногие лекарства доказали быть эффективным для лечения беременность болезни4,5. Разработка стратегий для более избирательный и безопасной доставки плаценты целевой лекарств во время беременности остается сложным в современной медикаментозной терапии.
В последние годы несколько докладов были сосредоточены на целевой доставки наркотиков uteroplacental тканей наночастицами покрытие с пептидами или антител как плаценты ориентированных инструментов. К ним относятся антитела анти эпидермального фактора роста рецепторов (EGFR)6 , опухоль самонаведения пептиды (CGKRK и iRGD)7, плаценты целевой пептиды8, плацентарной пептиды, ориентированные на сосудистую9 и антител против рецепторов окситоцина10.
Здесь мы демонстрируем, что пептид синтетических плацентарной хондроитин сульфат A привязки (plCSA-BP) может использоваться для целенаправленной доставки наночастиц и их полезных препарата плаценты11. PlCSA ВР руководствуясь наночастиц дополняют сообщил uteroplacental, ориентация методы, потому что они ориентированы на плацентарный трофобласта.
Неинвазивный метод в естественных условиях изображения была использована для контроля экспрессии плаценты конкретных генов мышей12, а indocyanine Грин (ГСИ) широко используется для отслеживания наночастиц с помощью флуоресценции визуализации систем13, 14,15. Таким образом мы внутривенно вводят plCSA BP-конъюгированных наночастиц, загружен с ГСИ (plCSA-INPs) для визуализации распределения plCSA-INP в беременных мышей с флуоресцентным тепловизор. Затем мы внутривенно вводят метотрексата (MTX)-plCSA НПС загружается беременных мышей. Высокочастотный ультразвук (HFUS), другой неинвазивный, реальном времени обработки изображений инструмент16,17 был использован для мониторинга развития плода и плаценты в мышей. Наконец мы использовали высокой производительности жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для количественной оценки распределения MTX плаценты и плода.
В этом протоколе мы подробно описываются три метода система, используемая для оценки эффективности препарата плаценты целевой доставки plCSA ВР руководствуясь nanocarriers.
В этой рукописи мы наметим систему трех метод для определения, являются ли plCSA ВР руководствуясь наночастиц эффективным инструментом для ориентации доставки препаратов плаценты. Использование в vivo imaging для мониторинга инфракрасный сигнал флуоресцентные ГСИ подтвердил плацентар?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана субсидий из национального фонда естественных наук (81771617) и естественные науки фонд провинции Гуандун (2016A030313178) присуждена X.F.; Грант от Шэньчжэнь основной исследовательский фонд (JCYJ20170413165233512) присуждена X.F; Юнис Кеннеди Шрайвер национального института здоровья ребенка и развития человеческого потенциала национальных институтов здоровья под награду номер R01HD088549 (содержание является исключительно ответственности авторов и не обязательно отражают официальной виды национальных институтов здравоохранения) для н.н.
CD-1 mice | Beijing Vital River | 201 | Female (8-12 week) |
Insulin syringe | BD | 328421 | for IV injection |
Ethanol absolute | Sinopharm Chemical | 10009218 | for nanoparticles synthesis |
Soybean lecithin | Avanti Polar Lipids | 441601 | for nanoparticles synthesis |
DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | for nanoparticles synthesis |
PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | for nanoparticles synthesis |
Ultrasonic processor | Sonics | VCX130 | for nanoparticles synthesis |
Methotrexate (MTX) | Sigma-Aldrich | V900324 | for nanoparticles synthesis |
Indocyanine green (ICG) | Sigma-Aldrich | 1340009 | for in vivo imaging |
phosphate-buffered saline (PBS) | Hyclone | SH30028.01 | |
IVIS spectrum instrument | Perkin Elmer | for in vivo imaging | |
Ultrasound transmission gel | Guanggong | ZC4252418 | for ultrasound imaging |
Isoflurane | Lunan Pharmaceutical | I0040 | for maintain the anesthesia |
Depilatory cream | Nair | TMG001 | for removing fur |
40 MHz transducer | VisualSonics | MS550S | for ultrasound imaging |
High-frequency ultrasound imaging system | VisualSonics | Vevo2100 | for ultrasound imaging |
Avertin | Sigma-Aldrich | T48402 | for anesthesia |
Syringe pump | Mindray | SK-500III | forcardiac perfusion |
0.9% saline solution | Meilunbio | MA0083 | forcardiac perfusion |
1.5 mL Polypropylene tubes | AXYGEN | MCT-150-C | |
-80 °C freezer | Thermo Fisher Scientific | 88600V | |
Centriguge | Cence | H1650R | |
Perchloric acid | Sigma-Aldrich | 311421 | for precipitating protein |
Homogenizer | SCIENTZ | SCIENTZ-48 | for homogenizing tissue |
Syringe filter (0.45 μm) | Millipore | SLHV033RS01 | |
Sodium hydroxide | Sinopharm Chemical | 10019763 | for solving MTX |
HPLC vials | Waters | 670650620 | for HPLC |
Potassium phosphate dibasic | Sinopharm Chemical | 20032117 | for HPLC |
Acetonitrile | JKchemical | 932537 | for HPLC |
C18 column | Waters | 186003966 | for HPLC |
HPLC system | Shimadzu | for HPLC |