נתאר מערכת אשר מנצל שלוש שיטות כדי להעריך את הבטיחות והיעילות של תרופות ממוקדות השליה: ויוו הדמיה כדי לפקח nanoparticle הצטברות, אולטרסאונד בתדירות גבוהה כדי לעקוב אחר ההתפתחות העוברית של היפרדות , ו- HPLC לכמת משלוח סמים לרקמות.
אין טיפולים יעילים כיום קיימים סיבוכים הקשורים השליה הריון, לפתח אסטרטגיות למסירה יישוב של סמים טבור תוך מזעור תופעות לוואי עוברית אימהי נותר מאתגר. ננו-חלקיק יישוב נושאות מספקים הזדמנויות חדשות לטיפול בהפרעות היפרדות. לאחרונה להדגים כי פפטיד איגוד סינתטי היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP) יכול לשמש כדי להנחות חלקיקים כדי לספק סמים השליה. ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט מערכת להערכת היעילות של משלוח סמים השליה על ידי BP-plCSA מעסיקה שלוש שיטות נפרד בשילוב: ויוו הדמיה סאונד בתדירות גבוהה (HFUS), ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC). שימוש ב- vivo חלקיקים הדמיה, plCSA BP-מונחה היו דמיינו ב מאחד לשני של בעלי חיים, בעוד HFUS ו- HPLC הדגימו כי plCSA-BP-מצומדת חלקיקים ביעילות, במיוחד נמסר מטוטרקסט השליה. לפיכך, שילוב של שיטות אלה יכול לשמש ככלי יעיל מסירת תרופות השליה יישוב ופיתוח אסטרטגיות טיפול חדש עבור מספר סיבוכים בהריון.
סיבוכים הריון בתיווך השליה, כולל רעלת היריון, אובדן הריון, היפרדות שליה, גיל ההיריון קטנים (מועצת התלמידים), הן נפוצות והפניות ניכר תחלואה עוברית, אימהית, התמותה1,2, 3, ומעט מאוד תרופות הוכחו להיות יעיל בטיפול הריון והפרעות4,5. פיתוח אסטרטגיות עבור משלוח סמים השליה במיקוד סלקטיבי יותר ובטוח יותר במהלך ההריון נותר מאתגר בטיפול התרופה המודרנית.
בשנים האחרונות, מספר דיווחים התמקדו יישוב מסירת תרופות uteroplacental רקמות על ידי ציפוי חלקיקים עם פפטידים או נוגדנים ככלים ממוקדות השליה. אלה כוללים נוגדן6 קולטן (EGFR) גורם הגדילה באפידרמיס-נגד, הגידול-יונת פפטידים (CGKRK ו- iRGD)7, פפטידים, ממוקדות השליה8, פפטידים, ממוקדות להערכת היפרדות9 ונוגדנים נגד אוקסיטוצין קולטן10.
. הנה, נדגים כי פפטיד איגוד סינתטי היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP) יכול לשמש את משלוח ממוקד של חלקיקים, מטענים הסמים שלהם השליה11… PlCSA-BP-מודרכת ‘ חלקיקים הם משלים uteroplacental שדווחו מיקוד שיטות משום שהם יעד trophoblast היפרדות.
שיטה לא פולשנית, הדמיה ויוו שימש כדי לפקח על ביטוי גנים ספציפיים השליה עכברים12, וגם indocyanine גרין (ICG) כבר בשימוש נרחב כדי לעקוב אחר חלקיקים באמצעות קרינה פלואורסצנטית הדמיה מערכות13, 14,15. לפיכך, אנו לווריד מוזרק חלקיקים plCSA-BP-מצומדת עמוסה ICG (plCSA-INPs) כדי להמחיש את ההתפלגות plCSA-INP בעכברים בהריון עם imager-ידי קרינה פלואורסצנטית. לאחר מכן אנחנו מוזרק לווריד מטוטרקסט (MTX)-נטענת plCSA-NPs עכברים בהריון. אולטרסאונד בתדירות גבוהה (HFUS), אחרת לא פולשנית, בזמן אמת הדמיה כלי16,17 השתמשו כדי לעקוב אחר התפתחות העובר, היפרדות בעכברים. לבסוף, השתמשנו ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית (HPLC) לכמת MTX ההפצה מאחד לשני, העוברים.
ב פרוטוקול זה, נתאר בפירוט במערכת שלוש-שיטה המשמשת כדי להעריך את היעילות של תרופות ממוקדות השליה nanocarriers plCSA-BP-מודרכת.
כתב יד זה, אנחנו חלוקה לרמות מערכת 3-שיטה לקביעת אם plCSA-BP-מודרכת ‘ חלקיקים הם כלי יעיל עבור מיקוד משלוח סמים השליה. השימוש ויוו הדמיה לעקוב אחר האות האינפרא-אדום ICG פלורסנט אישר יחודיות מיקוד היפרדות של שימוש plCSA-BP. HFUS, HPLC, הפגנו כי חלקיקים plCSA-BP-מצומדת יכול ביעילות לספק MTX רק תאי השליה, אל הע…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקי הקרן מדעי הטבע הלאומית (81771617), את מדעי הטבע קרן של בפרובינצית גואנג-דונג (2016A030313178) הוענק x.f. ב; מענק מהקרן שנג’ן בסיסי מחקר (JCYJ20170413165233512) הוענק X.F; ו יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות & פיתוח אנושי של מכוני הבריאות הלאומיים תחת פרס מספר R01HD088549 (התוכן מוטלת אך ורק על המחברים, ואינם מייצגים בהכרח הרשמי תצוגות של מכוני הבריאות הלאומיים) כדי N.N.
CD-1 mice | Beijing Vital River | 201 | Female (8-12 week) |
Insulin syringe | BD | 328421 | for IV injection |
Ethanol absolute | Sinopharm Chemical | 10009218 | for nanoparticles synthesis |
Soybean lecithin | Avanti Polar Lipids | 441601 | for nanoparticles synthesis |
DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | for nanoparticles synthesis |
PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | for nanoparticles synthesis |
Ultrasonic processor | Sonics | VCX130 | for nanoparticles synthesis |
Methotrexate (MTX) | Sigma-Aldrich | V900324 | for nanoparticles synthesis |
Indocyanine green (ICG) | Sigma-Aldrich | 1340009 | for in vivo imaging |
phosphate-buffered saline (PBS) | Hyclone | SH30028.01 | |
IVIS spectrum instrument | Perkin Elmer | for in vivo imaging | |
Ultrasound transmission gel | Guanggong | ZC4252418 | for ultrasound imaging |
Isoflurane | Lunan Pharmaceutical | I0040 | for maintain the anesthesia |
Depilatory cream | Nair | TMG001 | for removing fur |
40 MHz transducer | VisualSonics | MS550S | for ultrasound imaging |
High-frequency ultrasound imaging system | VisualSonics | Vevo2100 | for ultrasound imaging |
Avertin | Sigma-Aldrich | T48402 | for anesthesia |
Syringe pump | Mindray | SK-500III | forcardiac perfusion |
0.9% saline solution | Meilunbio | MA0083 | forcardiac perfusion |
1.5 mL Polypropylene tubes | AXYGEN | MCT-150-C | |
-80 °C freezer | Thermo Fisher Scientific | 88600V | |
Centriguge | Cence | H1650R | |
Perchloric acid | Sigma-Aldrich | 311421 | for precipitating protein |
Homogenizer | SCIENTZ | SCIENTZ-48 | for homogenizing tissue |
Syringe filter (0.45 μm) | Millipore | SLHV033RS01 | |
Sodium hydroxide | Sinopharm Chemical | 10019763 | for solving MTX |
HPLC vials | Waters | 670650620 | for HPLC |
Potassium phosphate dibasic | Sinopharm Chemical | 20032117 | for HPLC |
Acetonitrile | JKchemical | 932537 | for HPLC |
C18 column | Waters | 186003966 | for HPLC |
HPLC system | Shimadzu | for HPLC |