Un modello del Glaucoma indotto da sutura Circumlimbal nei ratti e nei topi
Summary
Ipertensione oculare cronica è indotta applicando una sutura circumlimbal in ratti e topi, che conduce al deterioramento strutturale e funzionale delle cellule ganglionari retiniche coerente con il glaucoma.
Abstract
La sutura di circumlimbal è una tecnica per indurre glaucoma sperimentale nei roditori cronicamente elevando la pressione intraoculare (IOP), un ben noto fattore di rischio per il glaucoma. Questo protocollo dimostra una guida dettagliata su questa tecnica a lungo Evans ratti e topi C57BL/6. In anestesia generale, una “” sutura viene applicata sul conjunctiva, intorno all’equatore e dietro il limbus dell’occhio. Il collega occhio serve come controllo non trattato. Nel corso della durata del nostro studio, che era un periodo di 8 settimane per ratti e 12 settimane per i topi, IOP è rimanere elevato, come misurato regolarmente di tonometria di rimbalzo in animali coscienti senza anestesia topica. In entrambe le specie, gli occhi suturati ha mostrato le caratteristiche dell’elettroretinogramma costanti con disfunzione retinica interna preferenziale. Tomografia ottica di coerenza ha mostrato selettiva assottigliamento dello strato di fibre nervose retiniche. L’istologia della retina del ratto in sezione trasversale trovato ridotta densità delle cellule nello strato delle cellule del ganglio, ma nessun cambiamento in altri strati cellulari. Macchiatura delle retine di piatto-montato del mouse con un marker specifico di cellule del ganglio (trasformante) ha confermato la perdita delle cellule del ganglio. La sutura di circumlimbal è un semplice, minimamente invasiva e conveniente modo per indurre ipertensione oculare che porta alla lesione delle cellule del ganglio in topi e ratti.
Introduction
Modelli animali forniscono che un’importante piattaforma per la ricerca del laboratorio di cellulare processi sottostanti patogenesi del glaucoma, nonché valutare potenziali interventi terapeutici. Diversi modelli viscoelastici sono stati sviluppati per produrre elevazione sostenuta pressione intraoculare (IOP), il più importante fattore di rischio per il glaucoma. Metodi che sono stati applicati per elevare la IOP includono: iniezione salina ipertonica in episcleral vene1, photocoagulation del laser del trabecolato2 o delle vene limbal3e l’iniezione intracameral di sostanze come fantasma rosso globuli4, microsfere5,6 e viscoelastico agenti7. Ogni approccio presenta vantaggi e limitazioni.
Un buon modello per il glaucoma dovrebbe imitare il processo di malattia, con la minima complicazione come opacities trauma, infiammazione e media. Queste complicazioni sono associate frequentemente con le procedure utilizzate per indurre l’altezza dello IOP e possono confondere l’interpretazione dei risultati. Ad esempio, paracentesi della camera anteriore, anche quando non vengono introdotte sostanze estranee, sono stato indicato per causare il trauma e l’infiammazione che non è rappresentativo di cambiamento glaucomatoso tipico8,9. Oltre all’importanza di evitare l’infiammazione, mantenere chiarezza ottica facilita in vivo imaging ed elettrofisiologia per monitorare la progressione della malattia. Anche se non è chiaro in che misura queste complicazioni possono interessare le indagini di malattia, può essere meglio evitare penetrante dell’occhio durante l’induzione del modello. L’approccio di sutura circumlimbal evita la penetrazione del globo e facilita in vivo valutazione longitudinale della struttura retinica e della funzione. Ancora più importante, questo modello si differenzia da quelle precedenti nella sua capacità di restituire IOP ai valori basali di rimozione della sutura quando richiesto. Normalizzazione di IOP può essere utile per studiare il cellulare e correlati molecolari del ganglio reversibile e irreversibile delle cellule ferita10,11,12,13,14.
Questo articolo si concentra sulla tecnica per l’induzione del modello. Caratterizzazione della lesione retinica indotta da questo modello nei ratti e nei topi può essere trovato più dettagliatamente altrove15,16,17,18,19.
Protocol
Representative Results
Discussion
La sutura di circumlimbal è un nuovo modello di ipertensione oculare cronica. Oltre agli studi da cui i risultati rappresentativi sono provenienza16,18, questo modello animale è stato utilizzato in una serie di recenti studi15,23,24,25 ,26. Confronto tra questi rapporti precedenti dimostra che il me…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è finanziato dalla National Health e contributo al progetto Medical Research Council of Australia (1046203), Australian Research Consiglio futuro Fellowship (FT130100338).
Materials
| normal saline | Baxter International Inc | AHB1323 | Maintain corneal hydration during surgery |
| Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | Disinfection of surgical instrument |
| Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietory Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for suture procedure |
| ocular lubricant | Alcon Laboratories | 1618611 | Proprietory Name: Genteal, ocular lubricant to keep the other eye moist |
| Needle holder (microsurgery) | World Precision Instruments | 555419NT | To hold needle during ocular surgery |
| Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | Topical ocular analgesia |
| Scissors (microsurgery) | World Precision Instruments | 501232 | To cut excessive suture stump during ligation |
| Surgical drape | Vital Medical Supplies | GM29-612EE | Ensure sterile enviornment during surgery |
| Suture needle for rats (microsurgery) | Ninbo medical needles | 151109 | 8-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Suture needle for mice (microsurgery) | Ninbo medical needles | 160905 | 10-0 nylon suture attached with round needle, cutting edge 3/8, dual-needle, suture length 30cm |
| Tweezers (microsurgery) | World Precision Instruments | 500342 | Manipulate tissues during ocular surgery |
| rebound tonometer | TONOLAB, iCare, Helsinki, Finland | TV02 | for intraocular pressure monitoring |
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