Bu iletişim kuralı kaldırma ve süre onlar pulmoner arter sağ kalp kateterizasyonu sırasında sıkışmış kalır Swan-Ganz kateter balon ipuçlarını bağlı pulmoner arter endotel hücreleri (PAECs) arıtma açıklar için yapışık sönük balon kaldırma hastanın vücut takip.
Patolojiler çeşitli dinlenme 25 mmHg aşan bir ortalama pulmoner arter basıncı olarak tanımlanan pulmoner hipertansiyon (PH), yol açar. Daha fazla tanılamak ve PH yönetmek için neyin Swan-Ganz kateter pulmoner arter dala gelişmiş ve bir balon kateter ucu arasına bir şey koy şişirilir tekrarlanan sağ kalbe katerizasyon (RHC) hasta tabi. Bu makalede sayede pulmoner arter endotel hücreleri (PAECs) olabilir Swan-Ganz kateter balon ipuçları RHC sonra hasat ve sözde PAECs arındırmak için bir anti-CD146 benzeşme sütun tekniği ile saf bir protokol göstermektedir. Bu hücreler hemodinamik ölçümleri RHC sırasında elde edilen tamamlayacak pulmoner damarlara endotel biyolojik durumun yerinde bir anlık görüntü görüntü sağlamak için kullanılan. Hasat ve saf PAECs sonraki analitik deneyleri gibi akışı cytometery veya her iki hücre kültürü için kullanılan.
Mevcut ABD ve Avrupa kurallar sağ kalp kateterizasyonu pulmoner hipertansiyon1tanısı için gerektirir. Doktorlar ve bilim adamları bu hastalığı anlamak isteyen RHC sırasında toplanan hemodinamik veriler tamamlayacak pulmoner damarlara biyolojik örnekleri arzu. Ne yazık ki, pulmoner vasküler biyopsi ile ilişkili risk çok yüksek, ve bu nedenle biyolojik pulmoner damarlara nadiren hiç RHC geçiren yaşam hastalardan elde ettiyseniz örneklerdir. Çok fikir üzerinden elde edilmiştir, ancak pulmoner damar dokusu kadavra üzerinden elde edilen veya explanted akciğerler, bu örnekler bir yaşam hastada unfolding olduğunu PH hastalık süreci biyoloji yansıtmaktadır edemiyoruz. 2013 yılında, biz ilk pulmoner arter endotel hücreleri (PAECs) pulmoner arter dalları Swan-Ganz kateter balon ucu ile fiziksel temas sırasında RHC yalanlarım ve kateter ipuçları küçük rakamlarla kurtarıldı bildirdi yordam sonra2.
Bu makale bizim teknik kaldırma ve pulmoner arter endotel hücrelerinin (PAECs) arıtma için sağ kalp kateterizasyonu takip Swan-Ganz kateter balon ipuçları gösterir. Şimdiye kadar bu hasat tekniği gerçekleştirmek için metodoloji yetersiz ayrıntılı teknik gerçekleştirme laboratuvarlar arasında tek tip sonuçlar sağlamak için edebiyat olarak tarif edilmiştir. Bu makale kateter ipuçları nihai ürün arıtılmış CD146 + endotel hücre için başucu koleksiyonundan tekniği, görüntülenmeyecektir gösteri sunan bu eksikliği aşmak için hazırlanmıştır. Bu teknik pH çeşitli etiologies pathobiology araştırma ilerleyen yardım ve muhtemelen hemodinamik veriler RHC sırasında toplanan tamamlayacak yeni tanı testleri geliştirme neden.
Bu teknik pulmoner vasküler ilaç ve araştırma alanında için önem taşımaktadır explanted veya kadavra akciğerler üzerinde bir anlık görüntüsünü pulmoner endotel in situ ve aksine önceki çalışmalar biyoloji erişim sağlar, değil temsil etmiyor konunun akciğer için bir son nokta. Son zamanlarda, biz bu hücrelerde bir anti-apoptotik biyomarker daha doğrusu fenotipleme yararı olabilir göstermiştir pulmoner hipertansiyon3çeşitleri ile ilgili. Elde edilen hücre verimidir nispeten küçük ~ 5, 000-25.000 PAECs örnek başına ve bu hücreler (zor ama imkansız değil) kültür için. Zeki klinisyenler ve araştırmacılar pulmoner vasküler araştırma, tanılama ve prognostics ilerlemek için bu arkadaşı teknikleri arasında sinerji bulmak inanıyoruz.
Bu makalede açıklanan tekniği en iyi pulmoner vasküler endotel çalışmak için önceki deneysel paradigmalar çerçevesinde beğeni topluyor. PAECs insanlardan elde etmek için önceki girişimleri explanted/kadavra akciğerler5 ve kısa ömürlü bir girişim bir kateter pulmoner arter biyopsisi6/ yetenekli geliştirmek için sınırlı olmuştur. Bir Son İnceleme7‘ de belirtildiği gibi mevcut teknik PAECs yaşayan bir insan edinmek ve bunu birden fazla zaman noktalarda hastalık ve/veya tedavi ilerleme yapmak için onun yetenek tarafından akciğer doku hasat ayırt edilir. Ancak, bir arkadaşı teknik son zamanlarda indüklenen sayede pluripotent kök hücreler (IPSCs) transdifferentiated PAECs4,5içine olabilir bildirilmiştir ki unutulmamalıdır. Bu teknik hastaya özgü PAECs bol kültürleri üretir ve hastaya özgü genetik arka plan efektleri PAEC biyoloji üzerinde bir çalışma sağlar. Bu avantajlara rağmen bu IPSC kaynaklı PAECs yerel microenvironment ve hastaya özgü genetik arka plan arasındaki etkileşimi hakkında herhangi bir bilgi sunamıyoruz. Kendi grubu “kateter ucu” ve IPSC teknikleri alan8ilerleyen sinerjik olması muhtemeldir görünüm sunmuştur.
Bu mevcut ve tarihsel bağlamda, bu teknik sınırlamaları olması gerekmektedir. İlk olarak, bu yöntem türetilmiş PAECs verimi önemli ölçüde değişebilir unutmamak gerekir. İletişim kuralı kaynak malzeme büyük kaybına neden beklenir adımları verilmediği muhtemelen, hasta-, hastalık durumu ve hekim özel faktörler Bu değişkenliği için katkıda bulunur. Tablo 1 CD146 + PAEC hasat kateter ipuçları çeşitli farklı hastalık durumlarında pulmoner hipertansiyon hastalarının elde edilen kullanan çeşitli ve hekim operatörleri çeşitli verimleri temsilcisi gösterir. İkinci olarak, hücre verimleri genel düşük olan ve canlılığı kültür için daha düşük henüz bizim ellerde olduğu ispatlanmıştır. Biz daha önce bu yöntem1kullanılarak PAECs kültürleri büyüdü, biz örnek çoğunun die-off takip progenitör hücre alt grubunu bu sonuçları temsil kurtarma varsayalım ve sadece bizim ellerde zaman zaman başarılı olur. Örneğin, yalnızca birkaç düzine yapışık PAECs kültüründe bir hasat kaplama sonra sabah bulmak anormal değildir. Sık sık bu mikro-kültürler genişleme için sağ çıkamayız. Daha fazla çalışma PAECs canlılığı sürdürmek bir şekilde bu protokolü ve durumları kültür hastaya özgü PAEC hasat yayılması istenen amacı elde etmek için en iyi duruma getirmek için gereklidir. Son olarak, biz adapte olması CD146 pozitif seçim hücrelerle endotel hücreleri4, perisitlerden, düz kas hücreleri ve nadir CD146 + T hücreleri9,10dolaşan gibi diğer CD146 +, kirlenme dışlayamazsınız. Yine de, bu hücreler çok az sayıda bu şekilde toplanan örneklerinde olduğu kabul ve CD146 bu iletişim kuralı için önemli ölçüde daha diğer hücre işaretleri (aynı zamanda kan kaynaklı çeşitli üzerinde CD31 gibi endotel hücrelerinin daha belirlidir hücreleri) trombosit11de dahil olmak üzere. Özgüllük iyileştirme amaçlı herhangi bir gelecekteki iyileştirmeler verim üzerindeki olası olumsuz etkileri karşı dengeli olmalıdır.
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar ve kateter örnekleri yüzlerce sağlanması kolaylaştırdı birkaç yıl için personel Allegheny General Hospital pulmoner hipertansiyon ve kalp yetmezliği gelişmiş hizmet destek hekimlerin teşekkür etmek istiyorum Bu metodoloji duruma getirilmesi.
100mm culture dish | Fisher | NC9385690 | |
15 mL Centrifuge Tubes | Midsci | C15R | |
16% Formaldehyde | Fisher | PI28908 | |
50 mL centrifuge tubes | Midsci | C50R | |
Accutase | Thermo | A1110501 | cell detachment solution |
Cell Scraper | Fisher | 08-100-241 | |
Endothelial Cell Growth media | Cell Applications | 211-500 | |
Forceps | any | ||
Hemostat | any | ||
LoBind microfuge tube | Fisher | 13-698-794 | |
Miltenyi CD146 beads | Miltenyi | 130-093-596 | |
Miltenyi FCR blocker | Miltenyi | 130-059-901 | |
Miltenyi LS columns | Miltenyi | 130-042-401 | |
Miltenyi magnet | Miltenyi | MidiMACS | |
Miltenyi RBC lysis buffer | Miltenyi | 130-094-183 | |
PBS | Fisher | BP2438-4 | |
Scissors | any | ||
Syringes | BD | 309597 |