Bewertung neuroprotektive Wirkung Glycyrrhizae Radix et Rhizoma extrahieren mit einer vorübergehenden mittlere zerebrale Arterie Okklusion Maus-Modell
Summary
In dieser Studie modifizieren wir eine vorhandene experimentellen Methode um mehr reproduzierbare Ergebnisse zu erhalten, durch die Schaffung einer mittleren zerebralen Arterie Okklusion (MCAO) Maus-Modell. Orale Verabreichung von Glycyrrhizae Radix et Rhizom (GR)-Methanol-Extrakt (GRex) nach Schlaganfall Induktion deutlich zurückgegangen insgesamt Infarkt Volumen im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollgruppe.
Abstract
Ischämie Reperfusion des zerebralen Blutflusses nach einem Schlaganfall gefolgt führt zu den Tod von Nervenzellen und Verlust von Gehirngewebe. Die am häufigsten verwendete Tiermodell zur Erforschung von Schlaganfall ist das mittlere zerebrale Arterie Okklusion (MCAO) Modell. Frühere Studien haben verschiedene Infarkt Größen berichtet, auch wenn die gleichen experimentellen Tierarten unter ähnlichen Bedingungen der MCAO verwendet wurde. Daher entwickelten wir eine verbesserte experimentelle Methode um diese Diskrepanz zu beheben. Mäuse wurden MCAO mit einem Filament als Okklusion Material imitieren menschlichen Schlaganfall Bedingungen unterworfen und Filament Dicke wurde optimiert, um mehr reproduzierbare Infarkt Volumen zu schaffen. Mäuse mit einem Methanol behandelten Auszug aus Glycyrrhizae Radix et Rhizom (GRex) nach Schlaganfall Induktion zeigte eine deutlich verminderte totale Infarkt Volumen und erhöhte Anzahl der Überlebenden Zellen im Vergleich zu den unbehandelten Kontrollgruppe. Das experimentelles Protokoll erfolgreich geändert und reproduzierbar demonstriert die wohltuende Wirkung von GRex auf ischämischen Schlaganfall.
Introduction
Schädigung des Gehirns verursacht durch Ischämie und Reperfusion des zerebralen Blutflusses führt zu den Tod von Nervenzellen und Verlust von Gehirngewebe. Diese Art der Schädigung des Gehirns steigt mit der zunehmenden Verbreitung von zerebrovaskulären Erkrankungen, die durch die Verbreitung von Stoffwechselerkrankungen wie Adipositas, Bluthochdruck und Diabetes Mellitus1,2. Die absolute Zahl der älteren Patienten mit Schlaganfall weltweit sprunghaft angestiegen, und die Kosten der medizinischen Versorgung für diese Patienten, die oft mit langfristigen Behinderungen zurückbleiben, ist eine große gesellschaftliche Belastung. Daher sollten sekundäre Behinderungen so weit wie möglich reduzieren die wirtschaftliche Belastung1,2gemildert werden.
Das am häufigsten verwendete Nagetiere Modell der Hirninfarkt ist das mittlere zerebrale Arterie (MCA) Okklusion (MCAO) Modell, in dem die MCA mit einem Silikon-beschichtete chirurgische Box-Filament, Durchblutung, blockieren verschlossen ist verursacht ischämischen Schlaganfall3, 4. mit einem Faden wie Okklusion Material die Kontrolle der Okklusion Zeit und Beständigkeit ermöglicht durch Manipulation der Dauer der Intra-luminalen Filament Einfügung.
Frühere Studien haben gezeigt, dass selbst wenn das gleiche Modell für Nager MCAO benutzt wird, das Gesamtvolumen der Hirninfarkt zwischen Experimente variiert, verursacht geringe Reproduzierbarkeit der Studien. Um die Reproduzierbarkeit zu verbessern, haben wir die Dicke der Glühfaden Minze verwendet im Experiment optimiert. Die Ergebnisse einer Vorstudie zerebralen ischämischen und induzierte Infarkt hat gezeigt, dass eine ischämische länger als 60 min die volumetrische Region erlaubt beschädigt Hirngewebe beobachtet und quantifiziert werden.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), auch bekannt als Lakritze, bestehend aus den getrockneten Wurzeln und Wurzelstöcke von Glycyrrhiza Uralensis und G. Glabra. Es wird für verschiedene Zwecke, u.a. als Lebensmittelzusatzstoff und medizinisch5,6,7in der chinesischen und koreanischen traditionellen Medizin eingesetzt.
In einer früheren Studie8, Vorbehandlung mit GR-Methanol-Extrakt (GRex) zeigte eine Anti-apoptotische Wirkung bei MCAO Mäusen einschließlich bedeutende Prävention aus dem Rückgang der Proteinexpression von B-Zell-Lymphom 2 (Bcl-2) und Bcl extragroßen (Bcl-xL). Diese Studie wurde durchgeführt, um die Reproduzierbarkeit der herkömmlichen MCAO-Maus-Modell wird gesteigert, Bewertung ihrer Effizienz zu ermitteln, ob Post-Infarkt-Behandlung mit GRex effektiv das Infarkt-Volumen in MCAO-induzierten zerebralen Schäden reduziert.
Protocol
Representative Results
Discussion
Mit der zunehmenden Verbreitung von Stoffwechselerkrankungen wie chronischem Bluthochdruck, Diabetes und Hyperlipidämie, die wichtigsten Risikofaktoren für einen Schlaganfall sind geworden Schlaganfall-Prävention und Behandlung ein wichtiger Bereich der medizinischen Forschung12, 13. Defizite in Sprache und Bewegung nach einem Schlaganfall sind stark korreliert mit dem Grad der Beschädigung des Gehirns Gewebe14 und führen zu einer sch…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nicht anwendbar.
Materials
| Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
| Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
| Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
| Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
| Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
| Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
| Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
| Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
| Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
| Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
| Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
| Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
| Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
| Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
| Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
| Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
| Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
| Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
| Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
| Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
| Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
| Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
| Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
| Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
| Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
| Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
| #4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
| #5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
| #6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
| #7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
| Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
| Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
| Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |
References
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