Orthotopen Injektion von Brustkrebs-Zellen in den Mäusen Mamma Fettlappen
Summary
Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Möglichkeit, einzupflanzen und dieses orthotopen Brust Krebs Mausmodell mit einer richtigen Mamma Fettlappen Umgebung kann verwendet werden, um verschiedene Aspekte zu untersuchen Krebs.
Abstract
Eine ordnungsgemäße Tiermodell ist entscheidend für ein besseres Verständnis der Krankheiten. Animal Modelle hergestellt durch verschiedene Methoden (subkutane Injektionen, Xenotransplantate, Genmanipulation, chemische Reagenzien Induktion, etc.) haben verschiedene pathologische Charaktere und spielen eine wichtige Rolle bei der Untersuchung bestimmte Aspekte der Krankheiten. Obwohl kein einheitliches Modell der ganzen menschlichen Krankheitsverlauf völlig nachahmen kann, spielen orthotopen Organe Krankheitsmodelle mit geeigneten Stromazellen Rahmenbedingungen eine unersetzliche Rolle bei Krankheiten zu verstehen und mögliche Drogen-screening. In diesem Artikel beschreiben wir, wie zu implantieren Brustkrebszellen in Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Weg und folgen der Metastasierung zu entfernten Organen. Mit den richtigen Funktionen Primärtumor Wachstum, Brust und Brustwarze pathologischen Veränderungen, und ein hohes Auftreten von anderen Organen Metastasen ahmt dieses Modell maximumly menschlichen Brust Krebs fortschreiten. Primärtumor Wachstum in Situ, lang-Fernmetastasen und der Tumor Mikroumgebung von Brustkrebs können durch die Verwendung dieses Modells untersucht werden.
Introduction
Brustkrebs ist die häufigste Ursache für weibliche Sterblichkeit weltweit. Mit seiner progressiv steigender Inzidenz ist Brustkrebs eine ernste Herausforderung für die öffentliche Gesundheit1geworden. Murine Krebs Modelle sind gute Brücken zwischen präklinischen und klinischen Studien, und eine gute mimische murinen Krankheitsmodell erhöhen die Genauigkeit der Forschung zur Krankheit und Medizin.
Primärtumor Wachstum beginnt den Fortschritt der malignen Erkrankungen, Metastasen und Komplikationen die Hauptursachen des Todes und der Armen Lebensqualitäten in den meisten Krebspatienten sind. Mehrere murinen Modelle werden verwendet, um die Pathologie der menschlichen Brust Krebs2,3,4zu imitieren. Xenograft-Modelle sind für Krebs-Studie, die pathologischen Zeichen zu verstehen und zu Bildschirm Drogen für die Sicherheit und Wirksamkeit5,6,7verbreitet. Gentechnisch veränderte Mäuse (GEM) werden generiert, um menschlichen Brustkrebs zu imitieren, indem Sie auf bestimmte Onkogene oder Tumor-Suppressor-Gene-8. GEM haben einen relativ einfachen und uniformierten Hintergrund zu verstehen, die Rolle der Gene Krebs Fortschritte; künstlichen Umwelt und Hintergrund sind jedoch begrenzt, die Metastasen Pathologie zu untersuchen und verwandte Therapien9. Menschlichen Krebszellen, wobei menschliche pathologische Züge können nur implantiert werden in immundefiziente Mäuse, und die Unzulänglichkeit der Tumor-Host immun Interaktion zu verzerrten Ergebnissen10führen kann.
Wo die soliden Tumoren initiiert hat einen direkten Einfluss auf die biologische und pathologischen Zeichen der Krankheit11,12,13. Da Krebs Fortschritte der komplizierten Interaktionen zwischen Tumorzellen, stromale Zellen, Zellen der Immunologie, Entzündungszellen, Wachstumsfaktoren und Proteasen ergibt sich, Primärtumoren implantiert in Situ besseren Einblick und imitieren die kanzerösen Prozess Zellen genauer als Tumoren induziert durch chemische Mittel oder eine subkutane Injektion des Tumors. Chemische Mittel verwendet, um Tumore zu induzieren, Forscher und Umwelt schädlich sein können und sind in einigen Ländern sogar verboten. Wegen des Fehlens einer Mamma Fettlappen Umgebung kann der pathologische Fortschritt eine subkutane Injektion mit unterscheiden sich in echten Brustkrebs-Patientinnen, deren Krebs stammt und von der Mamma Fettlappen reizt. Die Nachteile des subkutanen Injektionen Heranziehung die orthotopen Modelle Tumorwachstum zu studieren. In früheren Untersuchungen angegeben hoch metastatische Tumoren der MDA-MB-231, entwickelt nach sieben orthotopen Transplantationen, die Bedeutung der Injektion Lage14. Vor kurzem war die orthotopen Implantation von Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster mit Chirurgie gemeldeten15,16. Mit der Mamma Pad-Umwelt, das Tumorwachstum und die Migration in entfernte Organe decken den gesamten Prozess von Brustkrebs bei pathologisch relevanten Websites wodurch dieses Modell eine Miniatur des Fortschritts der menschlichen Krankheiten. Allerdings versucht die Haut nach der Operation automatisch zur Selbstheilung, die bringen des potenziellen Risikos einer Störung der normalen Brust-Krebs-Entstehung und die Ergebnisse beeinflussen können.
Wir haben einige Brust-Krebs-Modelle verglichen und gründete eine minimalinvasive orthotopen Modell zur Untersuchung der Auswirkungen der Medikamente auf Brust Krebs Fortschreiten17,18. In dieser Studie ein video Protokoll zum Orthotopically injizieren Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasive Weise präsentiert. Diese orthotopen Injektion Methode ohne Operation ist in vielerlei Hinsicht vorteilhaft. Zuerst, die Bedienung ist einfach und schnell, ca. 1 Minute pro Maus. Zweitens mit Primärtumor Herde direkt pathologischen Websites ab, es deckt den ganzen tumorigenic Prozess der Brust Tumorprogression aus dem Wachstum des Tumors in anderen Organen Metastasen, bietet eine gute experimentellen Tiermodell für das Studium der Zusammenspiel von Tumorzellen und Tumor Mikroumgebung. Es kann außerdem ein wertvolles Modell, die Behandlungseffekte in allen Stadien von Brustkrebs zu schätzen. Das Ziel dieser Methode ist zu einem Tiermodell zu maximumly mimischen menschlichen Brust Krebs fortschreiten.
Protocol
Representative Results
Discussion
In dieser Studie verwendeten Zellen sind 4T1-luc2, murine Triple-negativem Brustkrebs-Zellen mit Luciferase zu beschriften, sind ein nützliches Werkzeug für die Investierung Antitumor- und antimetastatic Wirkungen von Medikamenten aufgrund ihrer sehr invasive Natur2,19 . Luciferases, stabil, um die nächste Zellgeneration werden verwendet, um den lebenden Tumor zeigen Zellen, sowohl bei der Brustdrüse und bei anderen entfernten Organen20</sup…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchte der National Natural Science Foundation of China (Grant Nr. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), der Beijing Natural Science Foundation (Grant Nr. 7172095, 7162084, 7162083), und Xu Xia Stiftung des Beijing Hospital of Traditionelle chinesische Medizin (gewähren, Nein, xx201701). Wir danken Prof. Chang-Zhen Liu, Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences für Biolumineszenz Bilder.
Materials
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | – | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | – | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | – | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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