人血清抗水药物蛋白-4 免疫球蛋白 g 的细胞检测

Summary

细胞基检测是检测血清抗水品-4 免疫球蛋白 G 的一种广泛使用的方法。该方法可用于神经髓炎光谱疾病的临床诊断和科学研究。

Abstract

抗水蒸汽蛋白-4 (AQP4) 免疫球蛋白 G (IgG) 是诊断视神经标志物的核心诊断视神经标志物的视神经功能性的视神经功能障碍。细胞基检测 (CBA) 是一种广泛使用的检测人血清抗 AQP4 IgG 的方法, 具有较高的灵敏度和特异性。简单地说, 血清抗 AQP4 IgG 是由 AQP4 转染细胞捕获的, 该细胞固定在生物芯片上, 然后由荧光标记的二级抗体检测到。荧光显微镜用于可视化荧光, 荧光强度由至少两名有经验的临床医生进行评估。可以结合抗 AQP4 IgG 检测结果、临床表现和神经放射学结果, 对 NMOSD 进行最终诊断。根据以往的研究, CBA 比其他抗 AQP4 IgG 检测方法更敏感、更具体, 可用于 NMOSD 的临床诊断和研究。该方法有局限性;例如, 目前还缺乏评估血清抗 AQP4 IgG 滴度的国际量表。本文介绍了一种利用 CBA 检测人血清抗 AQP4 IgG 的详细方案。

Introduction

血清 AQP4 IgG 是诊断视神经髓炎视神经标志物的视神经标志物 (NMOSD)¹。细胞基检测 (CBA) 是一种应用广泛的抗 AQP4 IgG 检测方法, 具有较高的灵敏度和特异性。这里介绍了 CBA 的详细协议。

AQP4 是一种水通道蛋白, 有六个跨越膜的单位和两个围绕一个水孔²的螺旋域。抗 AQP4 IgG 通过与目标 AQP4 结合参与 NMOSD 的发病机制, 其主要位于星形胶质细胞³的端部。研究表明, 在约三分之二的 NMOSD 患者^中, 抗 Aqp4 igg 呈阳性。在最新的 NMOSD 国际诊断标准中, 抗 AQP4 IgG 被认为是一个核心诊断生物标志物⁵。在这方面, 建立可靠的检测人血清抗 AQP4 IgG 的方案, 促进 NMOSD 的临床诊断至关重要。

目前, 有各种抗 aqp4 igg 检测方法, 如 cba、组织基检测、酶联免疫吸附法和流式细胞术^6、7。CBA 采用欧盟90细胞捕获抗 AQP4 igg, 这些细胞与人体 AQP4 转染。通过荧光二级抗体检测捕获的抗 AQP4 IgG, 然后通过显微镜观察。越来越多的证据表明, cba 比其他抗 aqp4 igg 检测方法^更敏感、^{更具体, 6、7.}根据 meta 分析, CBA 的敏感性和特异性分别为76% 和 99%, 高于组织基和酶联免疫吸附法 6.此外, 还对抗 AQP4 IgG 的诊断检测进行了多中心比较.共有来自15个欧洲诊断中心的193个研究对象注册了⁷人。采用四种不同的检测血清抗 AQP4 IgG⁷的方法。结果表明, CBA 比其他方法更敏感和具体⁷。由于 AQP4 是以两个主要异形 (AQP4-M1 和 AQP4-MO音二) 表示的, 抗 AQP4 IgG 捕获单元是用 AQP4-M1 或 AQP4-MOT 转染的。然而, 哪种类型的捕获细胞更好仍有争议。一项调查支持了以 aqp4-m1 为基地的 cba⁸, 而另一些调查表明, 以 aqp4-“3·23” 运动为基地的 cba 更好地^7、9、10.然而, 由于 IGG 约束不具体, 基于 AQP4-“3·23” 运动的 CBA 可能会产生错误的阳性结果^.Jarius 等人^{11. 11个}国家报告说, aqp4-m1 和 AQP4—-“3·23” 运动 cba 的抗性 Aqp4 igg 探测率没有明显差异。

总之, 血清抗 AQP4 IgG 是 NMOSD 的核心生物标志物。与其他抗 AQP4 IgG 检测方法相比, CBA 具有更高的特异性和敏感性。目前仍有争议的是, AQP4-M1-或基于 AQP4-23 的 CBA 更好。本文介绍了一种基于 AQP4-M1 的 CBA 的详细方案, 该方案可用于 NMOSD 的临床诊断和研究。

Protocol

这一程序得到了吉林大学第一医院伦理委员会的批准, 并在大约 1, 500个科目上进行。 1. 患者注册和血液样本采集 将血清抗 AQP4 IgG 的实验室检测应用于临床患者的主要投诉和症状, 如下所示。也要进行身体检查。视神经炎: 患者视力缺陷, 如视力丧失和视力下降。急性骨炎: 患者可能出现瘫痪、感觉缺陷和自主功能障碍。区域后发组综合征: 患者可能有不明原…

Representative Results

使用这里描述的程序, 血清中的特异性抗 AQP4 IgG 是可检测的。在手术过程中, 在反应场中添加了预稀释样品、阳性对照和负对照, 其中包含转染和未转染的区域 (图 2)。在转染区的负对照荧光主要表明二级抗体与生物芯片上转染细胞的非特异性结合 (图 3)。同质弱荧光可见 (图 3)。在阳性对照中, 在反应场中?…

Discussion

我们描述了一种广泛使用的检测人血清中抗 AQP4 IgG 的方法。抗 AQP4 IgG 与 NMOSD 密切相关, 建立可靠的抗 AQP4 IgG 检测方法对 NMOSD 的临床诊断至关重要。首先, 抗 AQP4 IgG 是 NMOSD 特有的。多发性硬化症也是一种免疫介导的中枢神经系统疾病, 与 NMOSD¹²有许多相似之处。然而, 抗 AQP4 IgG 在 NMOSD¹³中只有阳性。其次, 抗 AQP4 IgG 在 NMOSD 患者中很常见。约三分之二的 NMOSD 患者…

Materials

Anti-aquaporin-4 IIFT	Euroimmun	FA 1128-2005-50	Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium.
CellSens Dimension	OLYMPUS	N/A	photograph software
Gel & clot activator tube	Improve medical	623040202	From a local Chinese company