כלים ביתיים פשוטים לטיפול בזבובי פירות-דרוסופילה מלאנוסטר
Summary
המתואר כאן הוא השימוש בכמה כלים תוצרת בית כדי להעביר, לצנן, ולהרוג מבוגרים Drosophila ילה, כמו גם לנקות את התרבות זכוכית מבחנות ולאסוף ביצים. כלים אלה קלים לעשות והם יעילים למדי בטיפול Drosophila ילה.
Abstract
הזבוב הפרי, דרוזופילה מלאנוסטר, משמש רבות גם בחינוך ביולוגי ובביולוגיה. טיפול בזבובים מבוגרים נפוץ אך קשה בפועל, כאשר זבובים מבוגרים עפים. הפגינו כאן היא איך לעשות כמה כלים פשוטים וחסכוניים כדי לטפל בבעיות קשות בטיפול Drosophila ילה. חורים בפקקים מוקצף נעשים ומfunnels ומוכנסים לתוך החורים. לאחר מכן, הזבובים זזים רק בכיוון אחד לתוך מכלול הפיפטה/משפך של הצינורות , ומאפשר שליטה יעילה על העברת הבוגרים לתוך או מתוך בקבוקון. הפרוטוקולים הקיימים שונו לזבובים מצננים על ידי התקררות בקרח כתוש והעברתם אל משטח קר, קשה מסכה. מסכה מכוסה פיסת גזה רפואי שמחזיק ללא קיבוע זבובים מהמים המרוכז כאשר נבדק תחת stereomicroscope. הזבובים מורדמים בסופו של דבר לספירה ולמיון או למחיקה על ידי המיקרוגל. הכלוב בצורת בקבוק פותחה גם עבור איסוף ביצים, כמו גם מכשיר לחסכון בעבודה וליווי פרוטוקול לניקוי בקבוקים של תרבות זכוכית.
Introduction
זבוב הפירות, דרוסופילה מלאנוסטר, הוא אורגניזם מודל המשמש רבות בחינוך ביולוגי ובביולוגיה לחקר מגוון רחב של נושאים1,2. הבעיות הבסיסיות בטיפול בדרוסופילה הן העברת מבוגרים ממבחנה לבקבוקון ולשתק את הזבובים כך שיהיה קל יותר לטפל בהם, כמו כל המבוגרים (למעט מוטציות מסוימות3,4) יכולים לעוף.
מקובל, חוקר מעביר זבובים ממבחנה אחת לאחרת על ידי החזקת שני מבחנות פה-לפה, הקשה על זבובים למטה או לאפשר זבובים לטוס לתוך בקבוקון אחר, ולאחר מכן הפרדת וחיבור מחדש שני מבחנות4. כמובן, הדבר דורש שפתיחת שני מבחנות בקוטר זהה, וקשה לשלוט בכמות הזבובים המועברים. בינתיים, זה דורש ידיים מהירות כדי לבצע את העבודה, ובריחה זבובים תועים יכול לגרום לבעיות עבור המעבדה או הכיתה. הוספת זבובים בתולין נוספים או זבובים זכרים לצלב כבר מוכן היא משימה שגרתית נוספת בניסויים דרוזוהילה . מקובל, זבובים חייב להיות מקיבוע במבחנה לפני תוספת של זבובים נוספים.
מבוגרים מרדימים באופן שגרתי על ידי אתר, CO2, או מצמרר5. לעומת החשיפה לאתר ושיתוף2 , מצמרר הוא הסוכן החסכוני ביותר עבור ששתק למבוגרים דרוסופילה ואת הפחות מזיק הן זבובים וחוקרים (בעיקר סטודנטים צעירים)6,7. עם זאת, מים העבים באופן רציף על פני השטח הקר או מרטיב את הזבובים. קשה לקבוע את פנוטיפים של זבובים רטובים, והם יכולים בקלות להיפגע במהלך מניפולציה8,9. זה שמר על שיטת הצינון. להיות מקובלת יותר
כלים עבור העברת הזבוב ושיטה לקירור מעופף כבר תוארו בעבר10. להלן, מדווחים שטכניקת הרדמה מצמררת ששונתה, הינה בטוחה, אמינה ואפשרית לניסויים בדרוזוהילה . מתואר גם במאמר זה 1) שיטות להרוג מבוגרים עבור ספירה, מיון, או השמטה, 2) התקנים לחסכון בעבודה ופרוטוקולים לניקוי מבחנות של תרבות זכוכית, ו 3) כלוב פשוט לאיסוף ביצים. הכלים תוכנן בקלות וחסכוני המתואר כאן יכול לשמש כדי לטפל בנושאים קשים של טיפול בזבוב, ושיטות אלה נבדקו והוכחו להיות חזקים, אמין, קל לטפל עבור חוקרים מנוסים ומתחילים.
Protocol
Representative Results
Discussion
מספר כלים תוצרת בית לטיפול בפעילויות בסיסיות הכרוכות בגידול בדרוזוהילה ובניסויים מתוארים במאמר זה. כלים אלה פשוטים אך יעילים למדי. כמעט, כל מעבדה יכולה לעשות את הכלים האלה בקלות, ומחקר או מעבדה להוראה לא צריך למצוא חלופה מוכנה שהיא אולי לא זמינה באופן מקומי.
העברת טיסה …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
לא
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
References
- Jennings, B. H. Drosophila – a versatile model in biology & medicine. Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).
- JoVE Science Education Database. . Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).
- Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. Laboratory Culture of Drosophila. Drosophila Protocols. , (2000).
- Greenspan, R. J. Fly pushing: The theory and practice of Drosophila genetics. Cold Spring Harbor Laboratory Press. , (2004).
- Ashburner, M., Thompson, J., Ashburner, M., Wright, T. R. F. The laboratory culture of Drosophila. The genetics and biology of Drosophila. 2a, 1-109 (1978).
- Ratterman, D. M., O'Donnell, M. A. Eliminating ether by using ice for Drosophila labs. Tested Studies For Laboratory Teaching. , 259-265 (2003).
- . Culturing techniques for Drosophila Available from: https://www.ptbeach.com/cms/lib/NJ01000839/Centricity/Domain/113/ap%20biology%20Labs/Culturing%20techniques%20for%20Drosophila.pdf (2019)
- Markow, T. A., O'Grady, P. M. . Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).
- Artiss, T., Hughes, B. Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap & Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging. The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).
- Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments. Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).
- . Egg-laying cages for drosophila Available from: https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17 (2018)
- Roberts, D. B. . Drosophila: a practical approach. , (1998).
- Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. Two devices for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).
- Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese). Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).
- Yang, D. . Genetics laboratory investigation. , (2016).
- Yang, D. Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species. Scientific Reports. 8, (2018).
- Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila. Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).
