Modelo murino de tumores hepáticos metastáticos no cenário de lesão de reperfusão de isquemia
Summary
Nós descrevemos em detalhe um modelo clinicamente relevante do tumor das metástases do fígado do cancro colorretal (crlm) e a influência do reperfusão da isquemia do fígado (I/R) no crescimento e na metástase do tumor. Este modelo pode ajudar a compreender melhor os mecanismos subjacentes à promoção cirurgia-induzida do crescimento metastático do fígado.
Abstract
A lesão de isquemia e reperfusão hepática (I/R), um desafio clínico comum, continua sendo um processo fisiopatológico inevitável que tem demonstrado induzir múltiplos danos nos tecidos e órgãos. Apesar dos avanços recentes e das aproximações terapêuticas, a morbosidade total permaneceu insatisfatória especial nos pacientes com anomalias parenquimatosas subjacentes. No contexto do crescimento agressivo do cancro e da metástase, o I/R cirúrgico é suspeitado para ser o promotor que regula o retorno do tumor. Este artigo tem como objetivo descrever um modelo murino clinicamente relevante de I/R hepática e metástase hepática colorretal. Ao fazê-lo, pretendemos ajudar outros investigadores a estabelecer e aperfeiçoar este modelo para a sua prática de investigação de rotina para compreender melhor os efeitos do fígado I/R sobre a promoção de metástases hepáticas.
Introduction
O fígado é um dos locais mais comuns para o desenvolvimento da doença metastática1. A mortalidade é quase invariavelmente atribuível a complicações associadas ao crescimento tumoral no fígado. Em pacientes com tumores sólidos metastáticos no fígado, a cirurgia continua sendo uma intervenção crucial para o controle da doença e uma possível abordagem curativa. Entretanto, a maioria vasta dos pacientes apresenta finalmente com doença periódica, predominante no fígado2,3. Durante a cirurgia hepatic, o sangramento intraoperativo é comum, frequentemente necessitando a transfusão de sangue e as aproximações técnicas diferentes para o controle do sangramento, incluindo métodos de aperto vasculares. No entanto, tais medidas causam isquemia/reperfusão hepática (I/R) ao tecido hepático. Os efeitos adversos da I/R na função hepatocelular têm sido bem documentados. O insulto do fígado I/R inflama cascatas inflamatórias durante a restauração do fluxo sanguíneo através de vias inflamatórias4. Não só a lesão hepática I/R contribui para a insuficiência hepática, mas a evidência atual também mostra que a lesão de I/R estimula a adesão de células tumorais, e promove a incidência de formação de metástases e o crescimento da doença micrometastática existente5. Nós temos relatado previamente que o esforço cirúrgico induz a ativação de pilhas imunes que ajuda não somente no crescimento do tumor preliminar, mas igualmente facilita metástases capturando pilhas de cancro dentro da circulação6.
Aqui nós descrevemos em detalhe uma técnica para estabelecer um modelo do tumor do rato da metástase do fígado. Neste modelo, também apresentamos um método para induzir lesão de reperfusão hepática de isquemia que atua como um substituto para o estresse cirúrgico presente clinicamente durante hepatectomias. Os métodos combinados da injeção do cancro e do I/R hepatic podem com sucesso interpretar o desenvolvimento de CRLM nos pacientes que se submeteram ao Resection preliminar do tumor.
Protocol
Representative Results
Discussion
O modelo animal descrito neste manuscrito é baseado em duas abordagens principais. O primeiro é reconhecer a capacidade das células cancerosas para localizar e proliferar nos lóbulos do fígado. O segundo é estudar o efeito da lesão hepática de reperfusão de isquemia influenciando o crescimento tumoral e as metástases. Este modelo permite o estudo relevante de metástases do fígado na ausência de metástases secundárias em um rato imuno-competente. O modelo é útil para abordar as questões de eficiência me…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores agradecem a Sara Minemyer e Alexander comerci pela revisão linguística.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
References
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