माउस में Myocardial इन्फेक्शन का अध्ययन करने के लिए एक Cryoinjury मॉडल
Summary
यह लेख चूहों में मायोकार्डियल क्रायोरियकेज के बाद कार्डियक रीमॉडेलिंग का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल को दर्शाता है।
Abstract
पशु मॉडल का उपयोग तीव्र कोरोनरी सिंड्रोम और इसकी जटिलताओं के लिए नई चिकित्सीय रणनीतियों के विकास के लिए आवश्यक है. इस लेख में, हम एक murine cryoinjury infarct मॉडल है कि उच्च reproducibility और प्रतिकृतिता के साथ सटीक infarct आकार उत्पन्न करता है प्रदर्शित करता है. संक्षेप में, जानवर के intubation और sternotomy के बाद, दिल छाती से उठाया जाता है. एक हाथ में तरल नाइट्रोजन वितरण प्रणाली की जांच को क्रायोरिय चोट पैदा करने के लिए मायोकार्डियल दीवार पर लागू किया जाता है। बिगड़ा वेंट्रिकुलर समारोह और विद्युत चालन इकोकार्डियोग्राफी या ऑप्टिकल मानचित्रण के साथ नजर रखी जा सकती है। infarcted क्षेत्र के Transmural मायोकार्डियल remodeling कोलेजन जमाव और cardiomycytes के नुकसान की विशेषता है. अन्य मॉडलों की तुलना में (उदाहरण के लिए, लाड-लिगेशन), इस मॉडल को और अधिक वर्दी infarct आकार उत्पन्न करने के लिए एक हाथ में तरल नाइट्रोजन वितरण प्रणाली का इस्तेमाल करता है।
Introduction
तीव्र कोरोनरी सिंड्रोम (एसीएस) पश्चिमी दुनिया 1,2में मौत के प्रमुख कारण है। कोरोनरी धमनियों के तीव्र कब्जे से इस्कीमिक झरना और प्रभावित हृदय ऊतक3के परिगलन को सक्रिय किया जाता है . क्षतिग्रस्त मायोकार्डियम धीरे-धीरे गैर-संकुचनीय निशान ऊतक द्वारा प्रतिस्थापित किया जाता है, जो दिल की विफलता के रूप में नैदानिक रूप से प्रकट होता है4,5. एसीएस के उपचार में हाल ही में प्रगति के बावजूद, ACS और ACS से संबंधित दिल की विफलता की व्यापकता बढ़ रही है, और चिकित्सीय विकल्प सीमित हैं6,7. इसलिए, ACS और इसकी जटिलताओं का अध्ययन करने के लिए पशु मॉडल विकसित करना बहुत रुचि का है।
तारीख करने के लिए, सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया पशु मॉडल ACS और ACS प्रेरित मायोकार्डियल remodeling अध्ययन करने के लिए छोड़ दिया उतरते कोरोनरी धमनी (एलएडी) का लिगेशन है। एलएडी का लिगेशन एसीएस के दौरान मानव मायोकार्डियल ऊतक के समान मायोकार्डियम के तीव्र इस्कीमिया की ओर जाता है। हालांकि, असंगत infarct आकार LAD ligation के Achilles एड़ी रहते हैं. लाड की शल्यिक परिवर्तन और शारीरिक परिवर्तनशीलता के कारण असंगत अकर्मक ताक आकार मिलता है और इस प्रक्रिया की पुनरुत्पाद्यता तथा प्रतिकृतितामेंबाधा उत्पन्न होती है. इसके अलावा, लाड लिगेशन में एक उच्च अंतर-और पोस्टसर्जिकल मृत्यु दर होती है। प्रजनन क्षमता में सुधार और मृत्यु दर को कम करने के लिए हाल के प्रयासों के बावजूद11,12,जानवरों की बड़ी संख्या अभी भी ठीक से विरोधी remodeling उपचार का मूल्यांकन करने की जरूरत है.
हाल के वर्षों में एसीएस के वैकल्पिक मॉडलों का प्रस्ताव किया गया है और इसका अध्ययन किया गया है , जिनमें रेडियो आवृत्ति13, थर्मल14 या क्रायोजेनिक चोटें15,16,17,18शामिल हैं . वर्तमान क्रायोइंजरी विधियां तरल नाइट्रोजन में धातु की छड़ को पूर्व ठंडा करने के लिए विषय के हृदय ऊतक15,16को नुकसान पहुंचाती हैं। हालांकि, इस प्रक्रिया को पर्याप्त infarct आकार जनरेट करने के लिए कई बार दोहराया जा करने के लिए की आवश्यकता है। ऊतक की तुलना में उच्च चालकता और छड़ी की कम गर्मी क्षमता के कारण, जांच जल्दी गर्म हो जाती है, और ऊतक ठंडा हो जाता है (और इस प्रकार infarcted) विषमता से। इन सीमाओं को दूर करने के लिए, हम यहाँ एक cryoinfarction मॉडल एक हाथ से आयोजित तरल नाइट्रोजन वितरण प्रणाली का उपयोग वर्णन. इस मॉडल reproduible, प्रदर्शन करने के लिए आसान है और तेजी से और मज़बूती से स्थापित किया जा सकता है. कोरोनरी शरीर रचना विज्ञान से स्वतंत्र एक पुन: उत्पादन ीय ट्रांसम्योरल अफ़सर घाव उत्पन्न होता है, जो अंततः हृदय विफलता की ओर जाता है। इस विधि उपन्यास चिकित्सीय औषधीय और ऊतक इंजीनियरिंग आधारित रणनीतियों के मूल्यांकन के लिए remodeling प्रक्रिया का अध्ययन करने के लिए विशेष रूप से उपयुक्त है.
Protocol
Representative Results
Discussion
यह लेख ACS और संबंधित औषधीय और चिकित्सीय विकल्पों की जांच करने के लिए एक माउस cryoinjury मॉडल का वर्णन करता है.
सबसे महत्वपूर्ण कदम हृदय ऊतक पर क्रायोप्रोब का अनुप्रयोग है। संपर्क अवधि को इष्टतम infarct आ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम उसे तकनीकी सहायता के लिए Christiane Pahrmann धन्यवाद. D.W. मैक्स Kade फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था. टी.डी. अन्य Kr$ner Fondation (2012[EKES.04) और ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1] से अनुदान प्राप्त किया. एस एस ड्यूश Forschungsgemeinschaft (DFG) से अनुसंधान अनुदान प्राप्त किया; SCHR992/3- 1, SCHR992/4-1).
Materials
| 10 ml Syringe | Thermo Scientific | 03-377-23 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| 8-0 Ethilon suture | Ethicon | 2808G | |
| Absorption Spears | Fine Science Tools | 18105-01 | |
| BALB/c | The Jackson Laboratory | Stock number 000651 | |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| Blunt Forceps | Fine Science Tools | 18025-10 | |
| Buprenex | Reckitt Benckiser | NDC Codes: 12496-0757-1, 12496-0757-5 | Buprenorphine |
| Cryoprobe 3mm | Brymill Cryogenic Systems | Cry-AC-3 B-800 | |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Forceps curved | S&T | 00284 | |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Gross Anatomy Probe | Fine Science Tools | 10088-15 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| ISOFLURANE | Henry Schein Animal Health | 029405 | |
| IV Catheter 20G | B. Braun | 603028 | |
| Mini-Goldstein Retractor | Fine Science Tools | 17002-02 | |
| NaCl 0.9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | saline |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Needle Holder, Curved | Harvard Apparatus | 72-0146 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Small Animal Ventilator | Kent Scientific | RV-01 | |
| Spring Scissors – Angled to Side | Fine Science Tools | 15006-09 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15400-12 | |
| Vaporizer | Kent Scientific | VetFlo-1205S |
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