免疫球蛋白G(IgG)N-甘油采用亲水相互作用色谱UPLC的特征是。 此外,IgG N-甘油的结构明显分离。这里介绍这个实验方法,以便它可以在研究环境中广泛使用。
Glycomics 是组学系统研究的一个新的子专业,在发现下一代疾病易感性、药物靶点发现和精密医学的生物标志物方面具有巨大潜力。替代IgG N-甘油已报告在几个常见的慢性疾病,并建议在临床应用(即,诊断和预测疾病的生物标志物)有很大的潜力。IgG N-甘油采用亲水相互作用色谱法(HILIC)超高性能液相色谱(UPLC)进行广泛描述。UPLC是一种稳定的检测技术,具有良好的可重复性和较高的相对定量精度。此外,IgG N-甘甘的结构明显分离,血浆中的甘油成分和相对丰度具有特征。
人类蛋白质的N-糖基化是一种常见和必要的转化后修饰1,有助于相对准确地预测疾病的发生和发展。由于其结构的复杂性,预计将有超过5000个甘油结构,为疾病2提供诊断和预测生物标志物的巨大潜力。附于免疫球蛋白G(IgG)的N-甘油已被证明对IgG的功能至关重要,IgG N-糖基化参与亲炎和抗炎系统之间的平衡3。差异IgG N-糖基化参与疾病发展和进展,代表疾病病理学中涉及的易感性和功能机制。IgG N-糖基化的炎症作用与衰老、炎症性疾病、自身免疫性疾病和癌症4相关。
随着检测技术的发展, 以下方法在高通量胶质中应用最广泛:亲水相互作用色谱(HILIC)具有荧光检测(UPLC-FLR)的高性能液相色谱,用激光诱导荧光的多路毛细管凝胶电泳 电感检测(xCGE-LIF)、矩阵辅助激光解吸/电光飞行质谱仪(MALDI-TOF-MS)和液相色谱电喷雾质谱(LC-ESI-MS).这些方法克服了以前低通量、结果不稳定、灵敏度特异性差等缺点。
UPLC被广泛用于探索IgG N-糖基化与某些疾病(即衰老7、肥胖8、血脂异常9、II型糖尿病10、高血压11、缺血性中风12和帕金森病13)之间的联系。与上述其他三种方法相比,UPLC 具有以下优势5、14。首先,它提供了一种相对定量分析方法,涉及总面积规范化的数据分析提高了每个样本的可比性。其次,设备成本和所需的专业知识相对较低,这使得实施和将糖基化生物标志物转化为临床应用变得更加容易。这里介绍UPLC,以便它可以更广泛地使用。
UPLC作为相对定量分析方法5,15。结果表明,UPLC是一种稳定的检测技术,具有良好的可重复性和相对定量精度。每个峰值中的甘油量以 UPLC(相对值)的总集成面积的百分比表示。相对定量提高了测试样品的可比性。此外,96孔蛋白G板用于一次用96个样品来纯化IgG,用于高通量检测。蛋白质G结合IgG的能力大于蛋白质A的能力,如先前研究15、1…
The authors have nothing to disclose.
这项工作得到了中国国家自然科学基金(81673247和81872682)和澳大利亚-中国合作赠款(NH&MRC – APP1112767-NSFC 8156128020)的资助。
2-aminobenzamide, 2-AB | Sigma, China | ||
96-well collection plate | AXYGEN | ||
96-well filter plate | Pol | 0.45 um GHP | |
96-well monolithic plate | BIA Separations | ||
96-well plate rotor | Eppendorf Co., Ltd, Germany | T_1087461900 | |
Acetic acid | Sigma, China | ||
Acetonitrile | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Ammonium bicarbonate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Ammonium formate | Beijing Minruida Technology Co., Ltd. | ||
Constant shaking incubator/rocker | Zhicheng analytical instrument manufacturing co., Ltd, China | ZWY-10313 | |
Dextran Calibration Ladder/Glycopeptide column | Watts technology Co., Ltd, China | BEH column | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma, China | ||
Disodium phosphate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Electric ovens | Tester instruments Co., Ltd | 202-2AB | |
Empower 3.0 | Waters technology Co., Ltd, America | ||
Ethanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Formic acid | Sigma, China | ||
GlycoProfile 2-AB Labeling kit | Sigma, China | ||
HCl | Junrui Biotechnology Co., Ltd, China | ||
High-speed centrifuge | Eppendorf Co., Ltd, Germany | 5430 | |
Igepal | Sigma, China | ||
Low temperature centrifuge | Eppendorf Co., Ltd, Germany | ||
Low temperature refrigerator | Qingdao Haier Co., Ltd | ||
Manifold 96-well plate | Watts technology Co., Ltd, China | 186001831 | |
Methanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Milli-Q pure water meter | Millipore Co., Ltd, America | Advantage A10 | |
NaOH | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
PH tester | Sartorius Co., Ltd, Germany | PB-10 | |
Phosphate buffered saline, PBS | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Pipette | Eppendorf Co., Ltd, Germany | 4672100, 0.5-10μl & 10-100μl & 20-200μl & 1000μl | |
PNGase F enzyme | Sigma, China | ||
Potassium dihydrogen phosphate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Propan-2-ol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
SDS | Sigma, China | ||
Sodium chloride | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Sodium cyanoborohydride (NaBH3CN) | Sigma, China | ||
Spectrophotometer | Shanghai Yuanxi instrument Co., Ltd | B-500 | |
Transfer liquid gun | Smer Fell Science and Technology Co., Ltd, China | 4672100 | |
Tris | Amresco, America | ||
Ultra-low temperature refrigerator | Thermo Co., Ltd, America | MLT-1386-3-V; MDF-382E | |
Ultra-performance liquid chromatography | Watts technology Co., Ltd, China | Acquity MLtraPerformance LC | |
Vacuum Pump | Watts technology Co., Ltd, China | 725000604 | |
Volatilizing machine/Dryer | Eppendorf Co., Ltd, Germany | T_1087461900 | |
Vortex | Changzhou Enpei instrument Co., Ltd, China | NP-30S | |
Water-bath | Tester instruments Co., Ltd | DK-98-IIA | |
Weighing balance | Shanghai Jingke Scientific Instrument Co., Ltd. | MP200B |