एचआईवी लक्ष्यों की एक एंटीबॉडी पर निर्भर सेलुलर Phagocytosis परख में उपयोग के लिए मानव स्तन दूध से Leukocytes के अलगाव
Summary
मां का दूध मानव इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस (एचआईवी) को संचारित करता है, हालांकि एचआईवी संक्रमित माताओं द्वारा स्तनपान कराने वाले शिशुओं में से केवल 15% संक्रमित संक्रमित हो जाते हैं। स्तनपान कराने वाले शिशुओं को प्रतिदिन 105]108 मातृ ल्यूकोसाइट्स का अध्ययन करना पड़ता है, हालांकि इन कोशिकाओं को कम किया जाता है। यहाँ हम स्तन दूध ल्यूकोसाइट्स के अलगाव और उनके phagocytic क्षमता का एक विश्लेषण का वर्णन.
Abstract
यहां तक कि एंटीरेट्रोवायरल दवाओं की अनुपस्थिति में, एचआईवी संक्रमित माताओं द्वारा स्तनपान कराने वाले शिशुओं में से केवल 15% संक्रमित संक्रमित हो जाते हैं, जिससे स्तन के दूध (बीएम) के मजबूत सुरक्षात्मक प्रभाव का सुझाव मिलता है। जब तक स्वच्छ जल और उपयुक्त शिशु फार्मूला तक पहुंच विश्वसनीय नहीं होती, तब तक विश्व स्वास्थ्य संगठन एचआईवी संक्रमित माताओं के लिए स्तनपान बंद करने की सिफारिश नहीं करता है। कई कारकों की संभावना मिलकर काम करने के लिए बीएम संचरण को कम. स्तनपान कराने वाले शिशुओं को दैनिक रूप से105 ]108 मातृ ल्यूकोसाइट्स का सेवन करना, हालांकि जो काफी हद तक स्पष्ट नहीं है, वह बीएम के एंटीवायरल गुणों में इन कोशिकाओं का योगदान है। वर्तमान में हम मानव बीएम से कोशिकाओं को अलग करने के उद्देश्य से मापने के लिए एचआईवी लक्ष्यों के खिलाफ बीएम phagocytes द्वारा एंटीबॉडी पर निर्भर सेलुलर phagocytosis (ADCP), सबसे आवश्यक और व्यापक जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में से एक. कोशिकाओं को स्तनपान के विभिन्न चरणों में प्राप्त 5 मानव बीएम नमूनों से अलग किया गया था। अलगाव कोमल centrifugation के माध्यम से किया गया था दूध वसा और सेल गोली की बार-बार धोने के सावधान हटाने के बाद. एचआईवी लिफाफा (एनवीवी) के साथ लेपित फ्लोरोसेंट मोती एडीसीपी के विश्लेषण के लिए लक्ष्य के रूप में इस्तेमाल किया गया था। ल्यूकोसाइट्स की पहचान करने के लिए कोशिकाओं को CD45 सतह मार्कर के साथ दाग दिया गया था। यह पाया गया कि ADCP गतिविधि नियंत्रण प्रयोगों से ऊपर महत्वपूर्ण था और reproducibly मध्यम रूप से एक एचआईवी-विशिष्ट एंटीबॉडी 830A का उपयोग कर.
Introduction
मानव स्तन दूध (बीएम) मातृ कोशिकाओं है कि कर रहे हैं के शामिल है और 90% व्यवहार्य1. कोशिका संघटन स्तनपान की अवस्था, मां और शिशु की स्वास्थ्य स्थिति तथा व्यक्तिगत भिन्नता से दृढ़ता से प्रभावित होता है, जो1,2,3,4. यह देखते हुए कि बीएम में $103]105 ल्यूकोसाइट्स/एमएल शामिल हैं, यह अनुमान लगाया जा सकता है कि स्तनपान कराने वाले शिशुओं को दैनिक 5 5]108 मातृ ल्यूकोसाइट्स दैनिक5. विभिन्न विवो अध्ययनों से पता चला है कि मातृ श्वेद् युकियों से शिशु को गंभीर रोग प्रतिरोधक क्षमता प्रदान होती है और वे प्रारंभिक घूस5,6,7,8 के इन स्थलों से परे अच्छी तरह से कार्य करते हैं ,9,10,11. शिशु द्वारा अंगीकृत सभी मातृ-व्युत्पन्न कोशिकाओं में प्रतिरक्षा कार्य करने या शिशु के स्वयं के ल्यूकोसाइट्स12के लिए क्षतिपूर्ति करने की क्षमता होती है।
मानव इम्यूनोडेफिशियेंसी वायरस (एचआईवी) का मदर-टू-चाइल्ड ट्रांसमिशन (एमटीसीटी) संसाधन-सीमित देशों में संकट बना हुआ है। के रूप में दस्त और श्वसन रोगों संसाधन सीमित देशों में शिशुओं के बीच मृत्यु दर की पर्याप्त दर के लिए जिम्मेदार हैं, और इन बीमारियों को काफी अनन्य स्तनपान द्वारा कम कर रहे हैं, एचआईवी संक्रमित माताओं के लिए लाभ स्तनपान से13,14,15के जोखिम अधिक हो जाते हैं . जब तक स्वच्छ जल और उपयुक्त शिशु फार्मूला तक पहुंच विश्वसनीय नहीं होती, तब तक विश्व स्वास्थ्य संगठन एचआईवी संक्रमित माताओं के लिए स्तनपान बंद करने की सिफारिश नहीं करताहै। बीएम के माध्यम से लगभग 100,000 MTTs सालाना होते हैं; फिर भी, केवल 15% शिशुओं को उनके एचआईवी संक्रमित माताओं द्वारा स्तनपान संक्रमित हो जाते हैं, बीएम17,18,19,20,21के एक मजबूत सुरक्षात्मक प्रभाव का सुझाव . संचरण को रोकने के लिए कई कारकों की संभावना मिलकर काम करते हैं। महत्वपूर्ण बात यह है कि बीएम में एचआईवी-विशिष्ट एंटीबॉडी (एब्स) को कम एमटीसीटी और/या एचआईवी संक्रमण से कम शिशु मृत्यु के साथ सहसंबद्ध किया गया है22,23. क्या काफी हद तक स्पष्ट नहीं है अपने एंटीवायरल गुणों के लिए बीएम के सेलुलर अंश का योगदान है.
कई Abs विरोधी वायरल गतिविधियों की एक किस्म की सुविधा इम्यूनोग्लोबुलिन अणु के ‘स्थिर’ क्षेत्र द्वारा मध्यस्थता, क्रिस्टलीय टुकड़ा (एफसी), एफसी रिसेप्टर्स के साथ बातचीत के माध्यम से (FcRs) लगभग सभी जन्मजात प्रतिरक्षा कोशिकाओं पर पाया, जिनमें से लगभग सभी मानव बीएम24में पाए जाते हैं। एंटीबॉडी पर निर्भर सेलुलर फैगोसाइटोसिस (एडीसीपी) वायरल संक्रमण की मंजूरी के लिए आवश्यक के रूप में प्रदर्शन किया गया है और एचआईवी25,26,27के MTCT की रोकथाम के मामले में understudied किया गया है, 28 , 29.एचआईवी के एमटीसीटी की रोकथाम के लिए बीएम फागोसाइट्स द्वारा एडीसीपी गतिविधि के संभावित योगदान के बारे में ज्ञान की कमी को देखते हुए, हमारा उद्देश्य कोशिकाओं द्वारा मध्यस्थता किए गए एडीसीपी का अध्ययन करने के लिए मानव बीएम से कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक कठोर विधि विकसित करना था स्तनपान के विभिन्न चरणों में प्राप्त बी.एम.
Protocol
Representative Results
Discussion
यहाँ वर्णित ADCP गतिविधि को मापने के लिए प्रवाह cytometry आधारित तकनीक पहले 201130 में वर्णित किया गया था और के बाद से मजबूत साबित किया गया है और 80 से अधिक अध्ययनों में उद्धृत. यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल पहली बार…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम पांडुलिपि समीक्षा के लिए माउंट सिनाई में Icahn स्कूल ऑफ मेडिसिन में चिकित्सा विभाग और सूक्ष्म जीव विज्ञान विभाग में डॉ सुसान ज़ोला-Pazner धन्यवाद. NIH/NICHD अनुदान संख्या R21 HD095772-01A1 के तहत इस परियोजना के लिए धन प्रदान की. इसके अलावा, आर पावेल चिकित्सा विभाग, संक्रामक रोगों के प्रभाग, माउंट Sinai में Icahn स्कूल ऑफ मेडिसिन से धन द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| 1 µm FluoSpheres NeutrAvidin-Labeled Microspheres | Thermo Fisher | F8776 | |
| BD Pharmingen PE Mouse Anti-Human CD45 | BD | 560975 | |
| Bovine serum Albumin | MP Biomedicals | 8810025 | |
| Corning V-bottom polystyrene 96-well plate | Corning | 3894 | |
| Cytochalasin D | Sigma | 22144-77-0 | |
| EZ-Link NHS-LC-LC-Biotin kit | Thermo Fisher | 21338 | |
| Falcon 15mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352196 | |
| Falcon 50mL Conical Centrifuge Tubes | Corning | 352070 | |
| Fixable Viability Stain 450 | BD | 562247 | |
| Formaldehyde solution | Sigma | 252549 | |
| HBSS without Calcium, Magnesium or Phenol Red | Life Technologies | 14175-095 | |
| Human BD Fc Block | BD | 564219 | |
| Human Serum Albumin | MP Biomedicals | 2191349 | |
| Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers | Kimberly-Clark Professional | 34120 | |
| PBS 1x pH 7.4 | Thermo Fisher | 10010023 | |
| Polystyrene 10mL Serological Pipettes | Corning | 4488 | |
| Protein Concentrators PES, 3K MWCO, 0.5 mL | Pierce | 88512 |
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