हम रीसस मकाक परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं के ट्रांसडक्शन और विस्तार के लिए 9 दिन के प्रोटोकॉल की रूपरेखा तैयार करते हैं जो कोशिका प्रभावकारिता के जलसेक अध्ययन के लिए पर्याप्त संख्या में ब्याज के जीन की उत्कृष्ट सह-अभिव्यक्ति के साथ कोशिकाओं की पैदावार करते हैं।
संक्रामक रोगों और कैंसर के इलाज के लिए उभरते इम्यूनोथेरपी में अक्सर रोग-लक्ष्यीकरण प्रोटीन को एन्कोडिंग जीन के साथ सेलुलर आबादी का ट्रांसड्यूक्शन शामिल होता है। उदाहरण के लिए, कैंसर और वायरल संक्रमणों के इलाज के लिए चिमेरिक एंटीजन रिसेप्टर (सीएआर) -टी कोशिकाओं में सिंथेटिक जीन के साथ टी कोशिकाओं का ट्रांसड्यूक्शन शामिल है जो कार के अणुओं को एन्कोडिंग करते हैं। कार के अणु टी कोशिकाओं को विशेष रूप से पहचानते हैं और कैंसर या वायरल संक्रमित कोशिकाओं को मारते हैं। कोशिकाओं को ब्याज के अन्य जीन के साथ भी सह-पार किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, कोशिकाओं को जीन एन्कोडिंग प्रोटीन के साथ सह-पार किया जा सकता है जो कोशिकाओं को विशिष्ट स्थानों पर लक्षित करते हैं। यहां, हम प्राथमिक परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMCs) को स्थानांतरित करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं जिसमें जीन वायरस-विशिष्ट कार और बी सेल कूप होमिंग अणु केमोकिन रिसेप्टर टाइप 5 (CXCR5) को एन्कोडिंग करते हैं। इस प्रक्रिया में नौ दिन लगते हैं और परिणामस्वरूप ट्रांसड्यूड टी सेल आबादी होती है जो एक केंद्रीय मेमोरी फेनोटाइप बनाए रखता है। एक केंद्रीय स्मृति या कम विभेदित फेनोटाइप के रखरखाव को जलसेक के बाद कोशिकाओं के हठ के साथ संबद्ध करने के लिए दिखाया गया है। इसके अलावा, इस विधि के साथ उत्पादित कोशिकाएं व्यवहार्यता के उच्च स्तर, दो ट्रांसड्यूड जीन की सह-अभिव्यक्ति के उच्च स्तर और इम्यूनोथेराप्यूटिक इन्फ्यूजन के लिए कोशिकाओं की बड़ी मात्रा दिखाती हैं। इस नौ दिन के प्रोटोकॉल मोटे तौर पर कार-टी सेल और अन्य टी सेल इम्यूनोथेरेपी दृष्टिकोण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। यहां वर्णित विधियां हमारे पिछले प्रकाशनों में प्रस्तुत अध्ययनों पर आधारित हैं।
सेलुलर इम्यूनोथेरपी कैंसर और संक्रामक रोगों सहित रोगों के इलाज के लिए एक नए साधन के रूप में उभर रहे हैं । इन इम्यूनोथेरेपी विधियों में अक्सर विशिष्ट अणुओं को व्यक्त करने के लिए आनुवंशिक रूप से चिकित्सीय कोशिकाओं में हेरफेर करना शामिल होता है। उदाहरण के लिए, चिमेरिक एंटीजन रिसेप्टर (सीएआर) टी कोशिकाओं को एक कार अणु को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर किया जाता है जिसमें एक बाह्य डोमेन होता है जो विशेष रूप से रोगग्रस्त कोशिकाओं पर अणुओं को बांधता है और एक सिग्नलिंग डोमेन जो रोगग्रस्त कोशिकाओं को मारने के लिए प्रतिरक्षा कोशिकाओं को ट्रिगर करता है। कैंसर इम्यूनोथेरपी में कार टी कोशिकाओं का सफलतापूर्वक उपयोग किया जा रहा है, और बी सेल ल्यूकेमिया1,2,2,3के इलाज में विशेष रूप से प्रभावी रहा है। एचआईवी जैसे वायरल संक्रमणों के इलाज के लिए कार-टी कोशिकाएं भी विकसित की जा रही हैं। एचआईवी विशिष्ट CARs वायरल संक्रमित कोशिकाओं4की सतह पर लिफाफा प्रोटीन लक्ष्य । इम्यूनोथेरप्यूटिक कोशिकाओं को विशिष्ट ऊतक स्थानों पर चिकित्सीय कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए होमिंग अणुओं को व्यक्त करने के लिए भी इंजीनियर किया जा सकता है। हमने वैक्टर विकसित किए हैं जो वायरस-विशिष्ट कार के साथ-साथ लिम्फोड कूप होमिंग अणु CXCR55दोनों को स्थानांतरित करते हैं।
मानव इम्यूनोडेफिशिएंसी वायरस (एचआईवी) और सिमियन इम्यूनोडेफिशिएंसी वायरस (एसआईवी) सहित कुछ वायरसों की वायरल प्रतिकृति, माध्यमिक लिम्फोइड ऊतकों6में बी सेल रोम के भीतर केंद्रित है। बी सेल रोम कुछ हद तक प्रतिरक्षा विशेषाधिकार प्राप्त साइटें हैं जिनमें वायरस-विशिष्ट सीटीएल का निम्न स्तर चल रहे वायरल प्रतिकृति7,,8की अनुमति देता है। इन कारणों से, सीएक्ससीआर5 की अभिव्यक्ति के माध्यम से कूप में एचआईवी/SIV-विशिष्ट टी कोशिकाओं को लक्षित करना वायरल रूप से संक्रमित कोशिकाओं9,,10के कूप जलाशय को समाप्त करने की रणनीति है । विशेष रूप से, हम CXCR5 सह अभिव्यक्ति के माध्यम से बी सेल रोम के लिए SIV विशिष्ट कार टी कोशिकाओं को लक्षित कर रहे हैं ।
इस प्रोटोकॉल में हम कार/सीएक्ससीआर5 को स्थानांतरित करने और चिकित्सीय जलसेक के लिए पर्याप्त मात्रा की कार/सीएक्ससीआर 5 टी कोशिकाओं का उत्पादन करने के लिए पीबीएमसी का विस्तार करने की विधि का वर्णन करते हैं । इन तरीकों के साथ स्थानांतरित कोशिकाएं एक केंद्रीय स्मृति फेनोटाइप बनाए रखते हैं। अध्ययनों से पता चला है कि केंद्रीय स्मृति टी कोशिकाओं और टी मेमोरी स्टेम कोशिकाओं जैसे कम विभेदित फेनोटाइप वाली कोशिकाएं11,,12से अधिक विभेदित कोशिकाओं की तुलना में बेहतर बनी हुई हैं। इसके अलावा, दत्तक रूप से स्थानांतरित कोशिकाओं का उत्पादन करने के लिए डिज़ाइन किए गए कई प्रोटोकॉलों में अपेक्षाकृत लंबी संस्कृति का समय होता है जिसके परिणामस्वरूप कोशिकाएं अधिक विभेदित फेनोटाइप और कम दृढ़ता13होती हैं। इसके अलावा, रीसस मकाक14,,15 में लक्षित लिम्फोइड ऊतकों के बजाय फेफड़ों के भीतर जमा लंबी संस्कृति के समय के साथ दत्तक रूप से स्थानांतरित कोशिकाओं को स्थानांतरितकर दिया। हम यहां वर्णन और प्रदर्शन करने वाले तरीकों में, हम एक केंद्रीय स्मृति फेनोटाइप बनाए रखने वाली ट्रांसड्यूड टी कोशिकाओं का उत्पादन करने के लिए रीसस मकाक पीबीएमसी को तेजी से स्थानांतरित और विस्तारित करते हैं।
सीडी 4 और सीडी 8 टी दोनों कोशिकाएं हमारे इम्यूनोथेरेपी दृष्टिकोण में शामिल हैं। इस मिश्रित सेल आबादी को इसलिए चुना गया था क्योंकि, नैदानिक परीक्षणों में, सीडी 8 + टी सेल उत्पाद में सीडी 4 + टी कोशिकाओं की अनुपस्थिति को 16जारी रखने के लिए संचार सीडी 8 टी कोशिकाओं की विफलता के साथ सहसंबद्ध किया गया था। यहां वर्णित विधियां पीबीएमसी को एंटी-सीडी 3 और एंटी-सीडी28 एंटीबॉडी के साथ सक्रिय करके शुरू होती हैं जो टी सेल रिसेप्टर को शक्तिशाली रूप से उत्तेजित करते हैं और क्लोनल एनेर्गिक17,,18से बचने के लिए सह-उत्तेजक संकेत प्रदान करते हैं।
सक्रियण के बाद, कोशिकाओं को वायरस-विशिष्ट कार और लिम्फोइड होमिंग अणु CXCR5 को एन्कोडिंग करने वाले गैमारेट्रोवायरल वेक्टर के साथ स्थानांतरित किया जाता है। इसके बाद गैर-अनुयायी कोशिका प्रचार के लिए डिज़ाइन की गई प्लेटों का उपयोग करके ट्रांसड्यूड कोशिकाओं का विस्तार किया जाता है जिसमें आधार पर गैस पारगम्य झिल्ली होती है। यह झिल्ली गैस विनिमय को कुएं के नीचे की अनुमति देती है जिससे कोशिका का अस्तित्व बढ़ जाता है और पोषक तत्वों की उपलब्धता19हो जाती है । इन तरीकों का उपयोग करके, वीवो इन्फ्यूजन अध्ययनों के लिए 9 दिन की समय सीमा में पर्याप्त कार्यात्मक कोशिकाओं का उत्पादन किया जा सकता है। हालांकि यह प्रोटोकॉल रीसस मकाक टी कोशिकाओं को ट्रांसड्यूस करने और विस्तार ित करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिसमें प्रजातियों-विशिष्ट सक्रिय एंटीबॉडी के मामूली संशोधन के साथ, इसका उपयोग अन्य प्रजातियों की कोशिकाओं के साथ किया जा सकता है। ये तरीके हमारे पहले प्रकाशितअध्ययन9,20पर आधारित हैं .
यह प्रोटोकॉल एक टी सेल इम्यूनोथेरेपी उत्पादन रणनीति की रूपरेखा तैयार करता है जो रीसस मकाक पीबीएमसी को ट्रांसड्यू करने के लिए गैमारेट्रोवायरल वेक्टर का उपयोग करता है जो टी सेल आबादी के लिए अग्रणी है जो एक एंटीवायरल कार के साथ-साथ कूप होमिंग रिसेप्टर, सीएक्ससीआर 5 को व्यक्त करता है। पूर्व वीवो संस्कृति समय के कुल 8 दिनों के साथ, व्यवहार्य, कार्यात्मक कार टी कोशिकाओं को एक मात्रा में उत्पादित किया जाता है जो प्रकाशित सीमा10,,21,,22 के भीतर है जो प्रीक्लिनिकल प्रभावकारिता परीक्षण के लिए गैर-मानव वानरों में जलसेक के लिए उपयोग किया जाता है।
ट्रांसड्यूक्शन प्रोटोकॉल की सफलता स्वस्थ, उत्तेजित पीबीएमसी और गैमारेट्रोवायरस की गुणवत्ता तैयारी दोनों पर निर्भर करती है। सफल उत्तेजना और ट्रांसड्यूक्शन प्राप्त करने के लिए, यह आवश्यक है कि संग्रह के बाद पीबीएमसी की ठंड और परिवहन में उचित देखभाल की जाए। आदर्श रूप से, यदि कोशिकाओं को साइट से एकत्र किया जाता है, तो उन्हें तरल नाइट्रोजन में भेज दिया जाता है और जल्दी से दीर्घकालिक तरल नाइट्रोजन भंडारण में रखा जाता है। गैमारेट्रोवायरस द्वारा सफलतापूर्वक स्थानांतरित करने के लिए पीबीएमसी को माइटोटिically रूप से सक्रिय होना चाहिए। एक विरोधी CD3/विरोधी CD28 के साथ उत्तेजना के बाद कोशिकाओं के क्लस्टरिंग के लिए नेत्रहीन निगरानी करनी चाहिए । ठीक से सक्रिय करने में विफलता ट्रांसड्यूक्शन की कम दक्षता का कारण बनेगी। उत्तेजित कोशिकाओं में व्यवहार्यता की निगरानी करना भी महत्वपूर्ण है। उत्तेजना कदम के बाद खराब व्यवहार्यता आमतौर पर कम सफल ट्रांसड्यूक्शन की ओर ले जाती है। चाहे प्रयोगशाला में वायरस की तैयारी का उत्पादन किया जाता है या आउटसोर्स किया जाता है, उन्हें फ्रीज गल चक्रों से बचने के लिए एकल उपयोग एलिकोट में -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए जो वायरस को नुकसान पहुंचा सकता है और ट्रांसड्यूक्शन दक्षता को ख़राब कर सकता है। वायरस को टिटर किया जाना चाहिए ताकि प्रत्येक प्रयोग में लगातार मात्रा में वायरस का उपयोग किया जा सके। ट्रांसड्यूक्शन के लिए वायरस का उपयोग करते समय, वायरस को जल्दी से पिघलाएं और जरूरत होने तक बर्फ पर स्टोर करें। प्रमोटर, एन्हांसर और लिफाफा प्रोटीन का चुनाव सभी लक्ष्य कोशिकाओं में ट्रांस्डुक्शन दक्षता और ट्रांसजीन की अभिव्यक्ति को प्रभावित कर सकता है। इस प्रकार, एक MOI अनुभवजन्य निर्धारित किया जाना चाहिए । इसके अलावा, विस्तार के लिए गैस पारगम्य कुओं के साथ टी कोशिकाओं और प्लेटों का समर्थन करने के लिए डिज़ाइन किए गए मीडिया के उपयोग से ट्रांसड्यूड कोशिकाओं का उत्कृष्ट विस्तार हुआ है। हालांकि, सेल विस्तार दर में पशु परिवर्तनशीलता है। हम एक परीक्षण अध्ययन की सिफारिश करने के लिए एक विशेष सेल तैयारी की क्षमता का निर्धारण करने के लिए transduced और विस्तारित किया जाएगा । विस्तार का स्तर छोटे और बड़े पैमाने पर दोनों ट्रांसप्रेचन में सुसंगत है ।
इस प्रोटोकॉल के उपयोग के साथ, हमने परीक्षण जानवरों में जलसेक के लिए 2.5 x 109 कोशिकाओं का उत्पादन किया है। हालांकि हम यह अनावश्यक पैमाने पर इस समय प्रोटोकॉल पाया है, 6 अच्छी तरह से प्लेटों का उपयोग बड़े पैमाने पर सेल की तैयारी के लिए एक सीमा है और प्रोटोकॉल संशोधन की आवश्यकता के लिए कोशिकाओं की अधिक से अधिक संख्या का उत्पादन होगा । संभावित संशोधनों के उदाहरणों में एक फाइब्रोनेक्टिन-लेपित संस्कृति बैग में ट्रांसड्यूक्शन करना शामिल है ताकि ट्रांसड्यूड कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि की जा सके और विस्तार कदम के लिए एक बड़ी गैस पारगम्य संस्कृति पोत का उपयोग किया जा सके । यद्यपि हमने अभी तक ये परिवर्तन नहीं किए हैं, वे व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उत्पादों का उपयोग करते हैं और वर्तमान प्रोटोकॉल में व्यवहार्य संशोधन हैं।
इस विधि का उपयोग करते हुए, हमने असंक्रमित जानवरों, SIV-संक्रमित जानवरों और एंटीरेट्रोवायरल थेरेपी (एआरटी) के साथ इलाज किए गए SIV-संक्रमित जानवरों से अलग पीबीएमसी से ट्रांसड्यूड कोशिकाओं का उत्पादन किया है। हालांकि, हमने एआरटी इलाज कोशिकाओं20में ट्रांसड्यूक्शन दक्षता में कमी को नोट किया है। यह कमी संभवतः रिवर्स ट्रांसक्रिटेंडा और/या दवाओं द्वारा पूर्णांक के अवरोध के कारण है । एआरटी-उपचारित जानवरों से कोशिकाओं के ट्रांसफेक्शन को इस प्रोटोकॉल में संशोधनों की आवश्यकता होगी जैसे कि पीबीएमसी एकत्र करने से पहले या एक वैकल्पिक वेक्टर के उपयोग के माध्यम से एआरटी दवाओं के इंट्रासेल्युलर स्तर को कम करना जो आमतौर पर उपयोग में आने वाली एआरटी दवाओं से प्रभावित नहीं होता है।
यह महत्वपूर्ण है कि इम्यूनोथेरेपी के लिए उत्पादित कोशिकाएं न्यूनतम विभेदित फेनोटाइप की हों ताकि वे जलसेक12के बाद बनी रहेंगी। यद्यपि कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण के लिए कई प्रोटोकॉल ों को लंबी संस्कृति समय की आवश्यकता होती है, लेकिन भेदभाव में कमी और कार टी सेल फ़ंक्शन13में सुधार दोनों के साथ कम पूर्व वीवो संस्कृति समय को सहसंबद्ध किया गया है। इस ट्रांसड्यूक्शन और विस्तार प्रोटोकॉल की अपेक्षाकृत तीव्र समय सीमा वांछित केंद्रीय स्मृति फेनोटाइप के रखरखाव की अनुमति देती है, जबकि अभी भी उनकी इम्यूनोथेरचिचिचिवाल क्षमता20के परीक्षण के लिए पर्याप्त कोशिकाओं का उत्पादन करती है ।
इस टी सेल इम्यूनोथेरेपी उत्पाद के लिए उत्पादन रणनीति का लक्ष्य टी कोशिकाओं का निर्माण करना है जो SIV-संक्रमित कोशिकाओं को पहचानेंगे, बी सेल कूप में वायरल प्रतिकृति की साइट पर ट्रैफ़िक करेंगे और जानवर में बने रहेंगे जिसके परिणामस्वरूप लंबी अवधि के एंटी-रेट्रोवायरल दवाओं की आवश्यकता के बिना कार्यात्मक इलाज। एक मानव इम्यूनोथेरेपी उत्पाद के अनुवाद के लिए, इस प्रोटोकॉल मानव विशिष्ट एंटीबॉडी और साइटोकिन्स के उपयोग और एक कार्यात्मक इलाज के उत्पादन के अंतिम लक्ष्य के साथ जीएमपी मानकों के कार्यान्वयन के माध्यम से मानव टी कोशिकाओं को स्थानांतरित करने के लिए संशोधित किया जा सकता है एचआईवी.
The authors have nothing to disclose.
इस अध्ययन NIH अनुदान 5R01AI096966-06S1 (पीएस, ईसी, और ईबी), 1UM1AI26617 (पीएस, द्वारा समर्थित था, चुनाव आयोग और ईबी), P51OD01106/P51RR000167 (ईआर), एमएन रीच ग्रांट 5U01HL127479-03 (पीएस), 1R01A143 380-01 (पीएस और ईबी), 1UM14126617 (पीएस और ईसी) के साथ-साथ NIAID डिवीजन ऑफ इंट्राम्यूरल रिसर्च और एनआईएच इंट्राम्यूरल एड्स द्वारा प्रदान की गई धनराशि ने एंटीवायरल कार्यक्रम को लक्षित किया । इन अध्ययनों में उपयोग किए जाने वाले एंटी-सीडी 3 और एंटी-सीडी28 को एनआईएच नॉनह्यूमन प्राइमेट रिएजेंट रिसोर्स (R24 OD010976, U24 AI126683) द्वारा प्रदान किया गया था। इन अध्ययनों में उपयोग किए जाने वाले आईएल-2 एनसीआई प्रीक्लीनिकल रिपॉजिटरी द्वारा प्रदान किया गया था। हम इस CD4-MBL CAR/CXCR5 परियोजना में अपने सहयोगियों, एरिजोना विश्वविद्यालय में डॉ एलिजाबेथ Connick, NIAID, NIH में डॉ एडवर्ड ए बर्जर, विस्कॉंसिन नेशनल प्राइमेट रिसर्च सेंटर में डॉ ईवा जी Rakasz और डॉ ज्योफ हार्ट और मिनेसोटा विश्वविद्यालय में सुश्री प्रीति Haran, हार्वर्ड मेडिकल स्कूल में डॉ लेस्ली Kean और डॉ कैथरीन Bollard हम मिनेसोटा विश्वविद्यालय में डॉ स्कॉट मैकइवर, फ्रेड हचिनसन कैंसर सेंटर में डॉ क्रिस्टोफर पीटरसन, एनआईएच में डॉ मैथ्यू ट्रिवेट, सिएटल चिल्ड्रन अस्पताल में डॉ एग्ने Taraseviciute, और इस प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने में उनकी बहुत उपयोगी सहायता के लिए बच्चों के अनुसंधान संस्थान में डॉ कॉनराड रसेल क्रूज़ का भी शुक्रिया अदा करते हैं । हम गैमारेट्रोवाइरल उत्पादन के लिए मिनेसोटा विश्वविद्यालय में सुश्री ची फान और सुश्री जहोमैरी एलेग्रिया-बेरोकल और रीसस मकाक पीबीएमसी के अलगाव के लिए विस्कॉंसिन-मैडिसन विश्वविद्यालय में सुश्री किम Weisgrau को भी कृतज्ञता से स्वीकार करते हैं ।
Gammaretrovirus preparation | |||
0.025% Trypsin, 0.01% EDTA | Gibco | R-001-100 | |
293T cells | ATCC | CRL-3216 | |
6 well plates, treated | CytoOne | CC7682-7506 | |
DMEM | Gibco | 10569-010 | |
Heat-inactivated FBS | Hyclone | Sh30088.03 | |
Lipofectamine | Invitrogen | 11668019 | transfection reagent |
Opti-Mem | Invitrogen | 31985070 | reduced serum media |
pBS-CMV-gagpol | Addgene | 35614 | A gift from Dr. Patrick Salmon |
pMSGV1 containing CAR P2A CXCR5 | custom order from GenScript | ||
RD114 | A gift from Dr. Ed Berger | ||
T75 flasks | CytoOne | CC7682-4875 | |
VSV-G | pMD.G | A gift from Dr. Scott McIvor | |
T cell stimulation | |||
6 well plates, untreated | CytoOne | CC7672-7506 | |
Anti-CD28 | NHP Reagent Resource | Clone: CD28.2 | |
Anti-macaque CD3 | NHP Reagent Resource | Clone: FN18 | |
Phosphate buffered saline | Gibco | 14190-144 | |
Rhesus macaque PBMC or CD8 T cells | WNPRC | Primary cells | |
For Fibronectin coating | |||
6 well plates, untreated | CytoOne | CC7672-7506 | |
BSA (Fraction V) | HyClone | SH 30574.02 | |
RetroNectin (1 mg/ml) | TaKaRa | T100A | |
For T cell Expansion | |||
G-Rex 6 Well Plate | Wilson Wolf | P/N 80240M | Plates with gas permeable wells |
Media Components | |||
b mercaptoethanol | Gibco | 21985-023 | |
Heat-inactivated FBS | Hyclone | Sh30088.03 | |
IL-2 | NCI Preclinical Repository | ||
Penicillin/Streptomycin/Glutamine | Gibco | 10378-016 | |
X-Vivo-15 medium | Lonza | 04-418Q | |
Variations of Media used | |||
Basic medium: | X-Vivo 15 medium, 10% heat-inactivated FBS, 1 x Penicillin/Streptomycin/L-Glutamine | ||
Expansion medium: | Growth medium + 50 mM b mercaptoethanol | ||
Growth medium: | Basic medium + 50 IU/ml IL-2 | Completion of media by addition of anti-CD28, IL-2 or b-mercaptoethanol should occur on the day of use. | |
Cell counting | |||
Countess cell counting chambers | Invitrogen | AMQAF1000 | |
Countess II FL Automated Cell Counter | Invitrogen | T10282 | |
Trypan blue, 0.4% solution | Invitrogen | T10282 | |
Flow Cytometry | |||
Alexa Fluor 647 Antibody Labeling Kit | Invitrogen | A20186 | for conjugation of MBL antibody |
anti-CD28-BV605 | BD Biosciences | 562976 | |
anti-CD3-AF700 | BD Biosciences | 557917 | |
anti-CD4-FITC | BD Biosciences | 556615 | |
anti-CD8-BV788 | BD Biosciences | 563824 | |
anti-CD95-PerCP Cy5.5 | BD Biosciences | 561655 | |
anti-CXCR5-PE | eBioscience | 12-1985-42 | |
anti-MBL | Invitrogen | MA1-40145-S6 | |
Flow Analysis software | FlowJo, LLC | FlowJo v10 | |
Flow Cytometer | Beckman | CytoFlex | |
Live/Dead Near IR | Invitrogen | L10119 | |
Other equipment | |||
Aerosolve canisters to contain aerosol leakage | Beckman | SX4750 | Safety equipment |
Beckman Allegra Centrifuge | Beckman | Sterilgard e3 | |
Cell culture incubator | Thermo Fisher | Everlast 247 | |
Class II Laminar flow hood | Baker | Heracell Vios 160i | |
Extra-Safe Disposable lab coat | Fisher Scientific | 359232 | Personal protective equipment |
Microplate carriers with biocertified covers | Beckman | SX4750A | Safety equipment |
Rocking platform | Benchmark | C10228 | |
Swinging bucket rotor | Beckman | X13-R | |
X-Gen Nitrile gloves | Genesee | Personal protective equipment |