マウスにおける可逆シリコンオイル誘発眼圧モデル
Summary
ここでは、シリコーンオイルのカメラインジェクションによるマウス目の眼圧高血圧および緑内化神経変性を誘導するプロトコルと、眼圧の上昇を戻すための前房からのシリコーンオイル除去の手順を提示する。通常。
Abstract
眼内圧の上昇(IOP)は緑内障の十分に文書化された危険因子である。ここでは、ヒトのビトレチナル手術でタンポネード剤としてシリコーンオイル(SO)を用いた術後合併症を模倣するマウスにおいて、安定なIOP上昇を一貫して誘導するための新規で効果的な方法について説明する。このプロトコルでは、SOは、瞳孔を遮断し、水性ユーモアの流入を防ぐために、マウスの眼の前房に注入される。後室は水性のユーモアを蓄積し、これは順番に後部セグメントのIOPを増加させます。単一のSO注射は、信頼性が高く、十分で安定したIOP上昇を生み出し、これは重大な緑内障神経変性を誘発する。このモデルは眼科医科で二次緑内障の真の複製である。さらに臨床設定を模倣するために、SOは、排水経路を再び開き、前房の角度でトラベキュラーメッシュワーク(TM)を通して排出される水性ユーモアの流入を可能にするために、前房から取り外すことができる。IOPはすぐに正常に戻るので、モデルは緑内障網膜神経節細胞に対するIOPを低下させる効果をテストするために使用することができる。この方法は簡単で、特別な装置や繰り返し手順を必要とせず、臨床状況を綿密にシミュレートし、多様な動物種に適用可能であり得る。ただし、わずかな変更が必要な場合があります。
Introduction
網膜神経節細胞(RGC)及びその軸索の進行性喪失は、網膜1における一般的な神経変性疾患である緑内障の特徴である。2040年までに40~80歳の1億人以上の個人に影響を及ぼす。IOPは緑内障の発症および進行における唯一の変更可能な危険因子のままである。緑内障の病因、進行、および潜在的な治療法を探索するためには、ヒト患者の主要な特徴を複製する信頼性が高く、再現性があり、誘導可能な実験的高血圧/緑内障モデルが不可欠である。
IOPは、後房内の毛様体から前房への水性液流入と、前房の角度でトラベキュラーメッシュワーク(TM)を通る流出に依存する。定常状態に達すると、IOP は維持されます。流入が流出を超えたり下回ったりすると、IOP はそれぞれ上昇または下降します。前房の角度を閉塞するか、またはTMを損傷することによって水性流出を減少させることにより、いくつかの緑内障モデルが確立された3、4、5、6、7、8、9、10である。これらのモデルは通常、不可逆的な眼組織損傷に関連しており、前房内の高いIOPは角膜浮腫や眼内炎症などの望ましくない合併症を引き起こし、網膜イメージングおよび視覚機能アッセイを行い、解釈することが困難になる。
これらの欠点を克服するモデルを開発するために、ヒトの静脈小体手術11、12の術後合併症として生じるシリコーンオイル(SO)によって引き起こされる十分に文書化された二次緑内障に着目した。SOは、その高い表面張力のために網膜手術のタンポナードとして使用されます。しかし、SOは水性および静脈内液体よりも軽く、前房への水性の流れを防ぐので、瞳孔を物理的に閉塞させることができる。閉塞は水性ユーモアの蓄積のために後部室のIOPの上昇を引き起こす。これは、二次緑内障の主な特徴を持つ、カメラルSO注射と瞳孔ブロック13に基づく新規な眼高血圧マウスモデルを開発し、特徴づける動機となった:効果的な瞳孔ブロック、SO除去後に正常に戻ることができる重要なIOP上昇、緑内障神経変性。
ここでは、SO注射と除去およびIOP測定を含むマウス眼におけるSO誘発性眼圧の詳細なプロトコルを提示する。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここでは、SOのカメラインスインジェクションによってマウスの目に持続的なIOP上昇を誘導するための簡単で効果的な手順を示します。この手順は顕微鏡の下のマイクロディセクションの経験を持つ誰によってすぐに学ぶことができる。障害の主な潜在的なリスクは、角膜切開からのSOの漏出です。しかし、SOを用いた利点の一つは、油滴が目に見えて測定可能であるため、小さすぎて注射後?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、NIHがYHに対するEY024932、EY023295、およびEY028106を付与することによってサポートされています。
Materials
| 0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
| 32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
| artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
| IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
| microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
| Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
| silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
| veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |
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