والسيليكون عكسها الناجمة عن النفط العين ارتفاع ضغط الدم النموذج في الفئران
Summary
هنا ، ونحن نقدم بروتوكول للحث علي ارتفاع ضغط الدم العين والضمور العصبي الزرق في عيون الفار عن طريق حقن انتراكاميرال من زيت السيليكون والاجراء لأزاله زيت السيليكون من الغرفة الاماميه للعودة ضغط العين مرتفعه العاديه.
Abstract
ارتفاع ضغط العين (IOP) هو عامل خطر موثقه جيدا لزرق. هنا نحن وصف رواية ، طريقه فعاله للحث باستمرار مستقره IOP الارتفاع في الفئران التي تحاكي مضاعفات ما بعد الجراحة من استخدام زيت السيليكون (SO) كعامل تاموناد في جراحه شبكيه الإنسان. في هذا البروتوكول ، يتم حقن SO في الغرفة الاماميه للعين الماوس لمنع التلميذ والحيلولة دون تدفق الفكاهة المائية. الغرفة الخلفية تتراكم الفكاهة المائية وهذا بدوره يزيد من IOP من الجزء الخلفي. وتنتج حقنه واحده SO الارتفاع الموثوق بها ، وكافيه ، ومستقره IOP ، والتي تؤدي إلى الضمور العصبي جلوكوكاتوس كبيره. هذا النموذج هو تكرار حقيقي من الزرق الثانوي في عيادة العين. لمزيد من تقليد الاعداد السريرية ، SO يمكن ازالتها من الغرفة الاماميه لأعاده فتح مسار الصرف الصحي والسماح تدفق الفكاهة المائية ، والتي يتم تصريفها من خلال العمل المشصي (TM) في زاوية الغرفة الاماميه. لان IOP يعود بسرعة إلى طبيعتها ، ويمكن استخدام النموذج لاختبار تاثير خفض IOP علي الخلايا العقديه الشبكية جلوكوكاتوس. هذا الأسلوب هو واضح ، لا يتطلب معدات خاصه أو تكرار الإجراءات ، يحاكي عن كثب الحالات السريرية ، ويمكن ان تكون قابله للتطبيق علي الأنواع الحيوانية المتنوعة. ومع ذلك ، قد يلزم اجراء تعديلات طفيفه.
Introduction
الفقدان التدريجي للخلايا العقدة الشبكية (RGCs) والمحاور الخاصة بهم هو السمة المميزة للجلوكوما ، وهو مرض عصبي شائع في شبكيه العين1. وسوف تؤثر علي أكثر من 100,000,000 الافراد 40 − 80 سنه من قبل 20402. ولا يزال البرنامج هو عامل الخطر الوحيد القابل للتعديل في تطور الزرق وتطوره. من أجل استكشاف المرض ، والتقدم ، والعلاجات المحتملة من الجلوكوما ، ويمكن الاعتماد عليها ، واستنساخها ، ومحفز العين التجريبية ارتفاع ضغط الدم/الزرق النموذج الذي يتطابق مع السمات الرئيسية للمرضي البشر أمر حتمي.
يعتمد IOP علي تدفق الفكاهة المائية إلى الغرفة الاماميه من الجسم الهالهاري في الغرفة الخلفية والتدفق من خلال العمل المشصي (TM) في زاوية الغرفة الاماميه. عند الوصول إلى حاله مستقره ، يتم الحفاظ علي IOP. وعندما يتجاوز التدفق الوافد أو يقل عن التدفق الوافد ، يرتفع البرنامج أو ينخفض علي التوالي. من خلال خفض تدفق مائي اما عن طريق انسداد زاوية الغرفة الاماميه أو عن طريق اتلاف TM ، وقد أنشئت عده نماذج الجلوكوما3،4،5،6،7،8،9،10. وترتبط هذه النماذج عاده مع تلف انسجه العين لا رجعه فيه ، وارتفاع IOP في الغرفة الاماميه أيضا يسبب مضاعفات غير المرغوب فيها مثل وذمه القرنية والتهاب العين ، مما يجعل التصوير الشبكية والبصريات وظيفة الاختبارات صعبه لأداء وتفسير.
لتطوير نموذج يتغلب علي أوجه القصور هذه ، ركزنا علي الزرق الثانوي الجيد الموثق الناجم عن زيت السيليكون (لذلك) الذي يحدث كمضاعفات ما بعد العملية الجراحية لجراحه الشبكية البشرية11،12. لذلك يتم استخدامها كدك في العمليات الجراحية في الشبكية بسبب التوتر سطحه عاليه. ومع ذلك ، يمكن لذلك جسديا اوككلودي التلميذ لأنه أخف من السوائل المائية والزجاجية ، مما يمنع التدفق المائي إلى الغرفة الاماميه. تسبب العرقلة ارتفاع IOP في الغرفة الخلفية بسبب تراكم الفكاهة المائية. هذا دافع لنا لتطوير وتوصيف نموذج الماوس ارتفاع ضغط الدم العين الجديدة علي أساس الحقن انتراكاميرال SO وكتله حدقة13, مع السمات الرئيسية للجلوكوما الثانوية: كتله العفن فعاله, ارتفاع iop الكبيرة التي يمكن ان تعود إلى وضعها الطبيعي بعد أزاله SO, والضمور العصبي جلوكوكاتوس.
هنا نقدم بروتوكولا مفصلا لارتفاع ضغط الدم العين المستحثة في عينه الماوس ، بما في ذلك حقن وأزاله وقياس IOP.
Protocol
Representative Results
Discussion
هنا نظهر اجراء بسيطه ولكنها فعاله للحث علي ارتفاع IOP المستدامة في العين الماوس عن طريق حقن انتراكاميرال من SO. ويمكن تعلم هذا الاجراء بسرعة من قبل اي شخص لديه خبره في التشريح المجهري تحت المجهر. الخطر المحتمل الرئيسي للفشل هو تسرب SO من شق القرنية. ومع ذلك ، واحده من مزايا استخدام SO هو ان لان ق?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة منح EY024932, EY023295, و EY028106 إلى YH.
Materials
| 0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
| 32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
| artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
| IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
| microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
| Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
| silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
| veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |
References
- Chang, E. E., Goldberg, J. L. Glaucoma 2.0: neuroprotection, neuroregeneration, neuroenhancement. Ophthalmology. 119 (5), 979-986 (2012).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: a systematic review and meta-analysis. Ophthalmology. 121 (11), 2081-2090 (2014).
- Pang, I. H., Clark, A. F. Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy. Journal of Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).
- Morrison, J. C., Johnson, E., Cepurna, W. O. Rat models for glaucoma research. Progress in Brain Research. 173, 285-301 (2008).
- McKinnon, S. J., Schlamp, C. L., Nickells, R. W. Mouse models of retinal ganglion cell death and glaucoma. Experimental Eye Research. 88 (4), 816-824 (2009).
- Chen, S., Zhang, X. The Rodent Model of Glaucoma and Its Implications. Asia Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia). 4 (4), 236-241 (2015).
- Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (1), 207-216 (2010).
- Chen, H., et al. Optic neuropathy due to microbead-induced elevated intraocular pressure in the mouse. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (1), 36-44 (2011).
- Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection. Experimental Eye Research. 91 (3), 415-424 (2010).
- Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 52 (3), 1671-1675 (2011).
- Ichhpujani, P., Jindal, A., Jay Katz, L. Silicone oil induced glaucoma: a review. Graefes Archieves for Clinical and Experimental Ophthalmology. 247 (12), 1585-1593 (2009).
- Kornmann, H. L., Gedde, S. J. Glaucoma management after vitreoretinal surgeries. Current Opinion in Ophthalmology. 27 (2), 125-131 (2016).
- Zhang, J., et al. Silicone oil-induced ocular hypertension and glaucomatous neurodegeneration in mouse. Elife. 8, (2019).
- Kwong, J. M., Caprioli, J., Piri, N. RNA binding protein with multiple splicing: a new marker for retinal ganglion cells. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 51 (2), 1052-1058 (2010).
- Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina. Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).
- Smith, R. S. . Systematic evaluation of the mouse eye : anatomy, pathology, and biomethods. , (2002).
