चूहों में एक रिवर्सिबल सिलिकॉन तेल-प्रेरित नेत्र उच्च रक्तचाप मॉडल
Summary
यहां, हम सिलिकॉन तेल के इंट्राकैमराल इंजेक्शन द्वारा माउस आंखों में नेत्र उच्च रक्तचाप और मोतियाबिंद न्यूरोडिजेनरेशन को प्रेरित करने के लिए एक प्रोटोकॉल पेश करते हैं और पूर्वकाल कक्ष से सिलिकॉन तेल हटाने की प्रक्रिया को ऊंचा इंट्राओकुलर दबाव वापस करने के लिए सामान्य.
Abstract
ऊंचा इंट्राओकुलर प्रेशर (आईओपी) मोतियाबिंद के लिए एक अच्छी तरह से प्रलेखित जोखिम कारक है। यहां हम चूहों में स्थिर आईओपी ऊंचाई को लगातार प्रेरित करने के लिए एक उपन्यास, प्रभावी विधि का वर्णन करते हैं जो मानव विट्रेओरेटिनल सर्जरी में टैम्पोनाड एजेंट के रूप में सिलिकॉन तेल (एसओ) का उपयोग करने की पोस्ट-ऑपरेटिव जटिलता की नकल करता है। इस प्रोटोकॉल में, एसओ को पुतली को ब्लॉक करने और जलीय हास्य के प्रवाह को रोकने के लिए माउस आई के पूर्वकाल कक्ष में इंजेक्ट किया जाता है। पीछे चैंबर जलीय हास्य जमा करता है और यह बदले में पीछे के खंड के IOP बढ़ जाती है । एक एकल एसओ इंजेक्शन विश्वसनीय, पर्याप्त और स्थिर आईओपी ऊंचाई पैदा करता है, जो महत्वपूर्ण मोतियाबिंद न्यूरोडिजेनरेशन को प्रेरित करता है। यह मॉडल नेत्र क्लिनिक में माध्यमिक मोतियाबिंद की एक सच्ची प्रतिकृति है। नैदानिक सेटिंग की नकल करने के लिए, एसओ को जल निकासी मार्ग को फिर से खोलने और जलीय हास्य के प्रवाह की अनुमति देने के लिए पूर्वकाल कक्ष से हटाया जा सकता है, जिसे पूर्वकाल कक्ष के कोण पर ट्रैबेकुलर मेशवर्क (टीएम) के माध्यम से सूखा जाता है। क्योंकि आईओपी जल्दी से सामान्य हो जाता है, मॉडल का उपयोग मोतियाबिंद रेटिना गैंगलियन कोशिकाओं पर आईओपी को कम करने के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है। यह विधि सीधी है, विशेष उपकरणया दोहराने की प्रक्रियाओं की आवश्यकता नहीं है, बारीकी से नैदानिक स्थितियों का अनुकरण करती है, और विविध पशु प्रजातियों पर लागू हो सकती है। हालांकि, मामूली संशोधनों की आवश्यकता हो सकती है।
Introduction
रेटिना गैंगलियन कोशिकाओं (आरजीसी) और उनके एक्सोन का प्रगतिशील नुकसान मोतियाबिंद की पहचान है, जो रेटिना1में एक आम न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारी है । यह 2040 2 तक 100 मिलियन से अधिक व्यक्तियों को 40−80 साल पुराना प्रभावित करेगा। आईओपी मोतियाबिंद के विकास और प्रगति में एकमात्र संशोधित जोखिम कारक बना हुआ है। मोतियाबिंद के रोगजनक, प्रगति और संभावित उपचारों का पता लगाने के लिए, एक विश्वसनीय, प्रजनन योग्य, और अप्रेरित प्रयोगात्मक नेत्र उच्च रक्तचाप/मोतियाबिंद मॉडल जो मानव रोगियों की प्रमुख विशेषताओं को दोहराता है, अनिवार्य है ।
आईओपी पूर्वकाल कक्ष में सिलियरी शरीर से पूर्वकाल कक्ष में जलीय हास्य प्रवाह पर निर्भर करता है और पूर्वकाल कक्ष के कोण पर ट्रैबेकुलर मेशवर्क (टीएम) के माध्यम से बहिर्वाह करता है। एक स्थिर स्थिति तक पहुंचने पर, आईओपी बनाए रखा जाता है। जब आवक अधिक हो जाती है या बहिर्वाह से कम होती है, तो आईओपी क्रमशः उगता है या गिरता है। पूर्वकाल कक्ष के कोण को कम करके या टीएम को नुकसान पहुंचाकर जलीय बहिर्वाह को कम करके, कई मोतियाबिंद मॉडल स्थापित किए गए हैं3, 4,5,6,7,8,9,10। ये मॉडल आम तौर पर अपरिवर्तनीय नेत्र ऊतक क्षति से जुड़े होते हैं, और पूर्वकाल कक्ष में उच्च आईओपी भी कॉर्नियल एडीमा और इंट्राओकुलर सूजन जैसी अवांछित जटिलताओं का कारण बनता है, जो रेटिना इमेजिंग और दृश्य कार्य को प्रदर्शन और व्याख्या करना मुश्किल बनाते हैं।
इन कमियों को दूर करने वाले मॉडल को विकसित करने के लिए, हमने सिलिकॉन तेल (एसओ) के कारण अच्छी तरह से सुप्रलेखित माध्यमिक मोतियाबिंद पर ध्यान केंद्रित किया जो मानव विट्रेओरेटिनल सर्जरी11,12की एक पश्चात जटिलता के रूप में होता है। इसलिए इसका उपयोग उच्च सतह तनाव के कारण रेटिना सर्जरी में टैम्पोनेड के रूप में किया जाता है। हालांकि, एसओ शारीरिक रूप से पुतली को ऑक्सील्ड कर सकते हैं क्योंकि यह जलीय और विट्रेसस तरल पदार्थ ों की तुलना में हल्का होता है, जो पूर्वकाल कक्ष में जलीय प्रवाह को रोकता है। बाधा जलीय हास्य संचय के कारण पीछे के कक्ष में IOP ऊंचाई का कारण बनता है । इसने हमें माध्यमिक मोतियाबिंद की प्रमुख विशेषताओं के साथ इंट्राकैमराल एसओ इंजेक्शन और पुपिलरी ब्लॉक13पर आधारित एक उपन्यास नेत्र उच्च रक्तचाप माउस मॉडल विकसित करने और चित्रित करने के लिए प्रेरित किया: प्रभावी प्यूपिलरी ब्लॉक, महत्वपूर्ण आईओपी ऊंचाई जो एसओ हटाने के बाद सामान्य हो सकती है, और मोतियाबिंद न्यूरोडिजेनरेशन।
यहां हम माउस आंख में एसओ-प्रेरित नेत्र उच्च रक्तचाप के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल पेश करते हैं, जिसमें एसओ इंजेक्शन और हटाने और आईओपी माप शामिल हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां हम एसओ के इंट्राकैमराल इंजेक्शन द्वारा माउस आंख में निरंतर आईओपी ऊंचाई को प्रेरित करने के लिए एक सरल लेकिन प्रभावी प्रक्रिया प्रदर्शित करते हैं। इस प्रक्रिया को माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोडिस?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को NIH अनुदान EY024932, EY023295, और YY028106 YH द्वारा समर्थित है ।
Materials
| 0.5% proparacaine hydrochloride | Akorn, Somerset | ||
| 10mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| 18G needle | BD | with Regular Bevel, Needle Length:25.4 mm | |
| 2,2,2-Tribromoethanol (Avertin) | Fisher Scientific | CAS# 75-80-9 | 50g |
| 32G nano | BD | 320122 | BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm |
| 33G ophalmology needle | TSK/ VWR | TSK3313/ 10147-200 | |
| 5mL syinge | BD | Luer-Lok Tip | |
| AnaSed Injection (xylazine) | Butler Schein | 100 mg/ml, 50 ml | |
| artificial tears | Alcon Laboratories | 300651431414 | Systane Ultra Lubricant Eye Drops |
| BSS PLUS Irrigating solution | Alcon Laboratories | 65080050 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | NARISHIGE | PC-10 | |
| EZ-7000 Classic System | EZ system | ||
| Isoflurane | VetOne | 502017 | isoflurane, USP, 250ml/bottle |
| IV Administration sets | EXELint/ Fisher | 29081 | |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | VEDCO | 50989-996-06 | KETAVED 100mg/ml * 10ml |
| microgrind bevelling machine | NARISHIGE | EG-401 | |
| Miniature EVA Tubing | McMaster-Carr | 1883T4 | 0.05" ID, 0.09" OD, 10 ft. Length |
| silicon oil (SILIKON) | Alcon Laboratories | 8065601185 | 1,000 mPa.s |
| Standard Glass Capillaries | WPI/ Fisher | 1B150-4 | 4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm |
| TonoLab tonometer | Colonial Medical Supply, Finland | ||
| veterinary antibiotic ointment | Dechra Veterinary | 1223RX | BNP ophthalmic ointment, Vetropolycin |
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