Questo studio descrive il metodo di iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nei ratti e discute i comportamenti correlati al dolore risultanti e i cambiamenti istopatologici, che forniscono riferimenti per applicazioni future.
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Articolo metodologico
Modello di dolore da osteoartrite indotto dall'iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nei ratti
In questo articolo
Sommario
Abstract
Gli attuali modelli animali di osteoartrite (OA) possono essere suddivisi in modelli spontanei e modelli indotti, entrambi i quali mirano a simulare i cambiamenti fisiopatologici dell'OA umana. Tuttavia, come sintomo principale nella fase avanzata dell'OA, il dolore influisce sulla vita quotidiana dei pazienti e non ci sono molti modelli disponibili. Il modello indotto da mono-iodoacetato (MIA) è il modello di dolore OA più utilizzato, utilizzato principalmente nei roditori. MIA è un inibitore della gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi, che causa morte dei condrociti, degenerazione della cartilagine, osteofiti e cambiamenti misurabili nel comportamento animale. Inoltre, nel modello indotto da MIA possono essere rilevate alterazioni dell'espressione della metalloproteinasi della matrice (MMP) e citochine pro-infiammatorie (IL1 β e TNF α). Questi cambiamenti sono coerenti con le condizioni fisiopatologiche di OA negli esseri umani, indicando che la MIA può indurre un modello di dolore OA misurabile e di successo. Questo studio mira a descrivere la metodologia di iniezione intra-articolare di MIA nei ratti e discutere i conseguenti comportamenti correlati al dolore e i cambiamenti istopatologici.
Introduzione
L'osteoartrite (OA) è la malattia articolare più comune al mondo, che colpisce circa il 10-12% delle popolazioni negli adulti1. L'articolazione più generalmente coinvolta è il ginocchio e l'OA ha una maggiore incidenza negli anziani, in particolare nelle donne2. Come malattia cronica, l'OA si sviluppa progressivamente nel corso dei decenni in insufficienza articolare con sintomi come perdita di cartilagine, infiammazione sinoviale, osteofitosi, diminuzione della funzione e dolore cronico3. Secondo l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'OA è la quarta malattia più diffusa nelle femmine e l....
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Protocollo
Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono state approvate dal Comitato per le norme mediche e l'etica dell'Università medica cinese di Zhejiang e sono conformi alla legislazione cinese sull'uso e la cura degli animali da laboratorio.
1. Iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nel ginocchio
- Dopo una settimana di acclimatazione, dividere casualmente e equamente 40 ratti maschi di Sprague-Dawley del peso di 180-200 g (4-5 settimane) in quattro gruppi (n = 10 ratti / gruppo).
NOTA: I ratti nel gruppo di controllo saranno iniettati intra-articolarmente con 50 μL di soluzione salina, mentre i ratti nei gruppi sperimen....
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Risultati
Con questa metodologia, abbiamo stabilito un modello di dolore OA nel ratto e rilevato i cambiamenti risultanti. MWT e TWL riflettevano rispettivamente l'allodinia meccanica e l'iperalgesia termica. Come mostrato in Figura 1, MIA ha indotto allodinia meccanica e iperalgesia termica presente in modo dose-dipendente. Sorprendentemente, la diminuzione della MWT ha raggiunto un picco da 21 giorni a 28 giorni, e poi è rimbalzata, suggerendo che la riparazione articolare può verificarsi in questa .......
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Discussione
Il modello di ratto di OA indotto da MIA è un modello consolidato e ampiamente utilizzato. L'iniezione intra-articolare di MIA provoca inizialmente un'infiammazione grave e acuta, che dà origine alla fase più lunga e degenerativa di OA17,18. In questa ricerca, abbiamo misurato la sensibilità nocicettiva mediante MWT e TWL e valutato le alterazioni dell'andatura con un sistema di imaging. Rapporti precedenti hanno rilevato che l'iniezione di MIA potrebbe aumentare.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato finanziato dalla Zhejiang Provincial Natural Science Foundation of China (Grant No: LY17H270016), dalla National Natural Science Foundation of China (Grant No: 81774331, 81873049 e 81673997) e dallo Zhejiang Provincial Science and Technology Project of Traditional Chinese Medicine of China (Grant No: 2013ZQ007 e 2016ZZ011).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Anticorpo anti-collagene II | Abcam(UK) | 34712 | Anticorpo primario per immunoistochimica (IHC) |
| Anticorpo anti-collagene X (Col10) | Abcam(UK) | 49945 | Anticorpo primario per IHC |
| DigiGait Imaging System | Mouse Specifics (Boston, MA, USA) | Attrezzatura per l'analisi dei modelli di andatura | |
| Eosin | Sigma-Aldrich | 861006 | Il colorante per l'HE colorazione |
| Fast Green FCF | Sigma-Aldrich | F7252 | Il colorante per la colorazione SO |
| Anticorpo anti-topo di capra | ZSGQ-BIO (Pechino, Cina) | PV-9002 | Anticorpo secondario per IHC |
| Anticorpo anti-coniglio di capra | ZSGQ-BIO (Pechino, Cina) | PV-9001 | Anticorpo secondario per IHC |
| Ematossilina | Sigma-Aldrich | H3163 | Il colorante per la |
| MIA | Sigma-Aldrich | I4386-10G | polvere |
| MMP13 | Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA) | 69926 | Anticorpo primario per IHC |
| Centro modulare di inclusione tissutale | Thermo Fisher Scientific (USA) | EC 350 | Produce blocchi di paraffina. |
| Apparecchio per test plantare | UgoBasile (Italia) | 37370 | Apparecchiatura per il test TWL |
| Kit di reagenti PrimeScript RT (Perfect Real Time) | TaKaRa Biotechnology Co. Ltd. (Dalian, Cina) | RR037A | Estrazione di RNA totale da cellule in coltura |
| Microtomi rotanti e scorrevoli | Thermo Fisher Scientific (USA) | HM325 | Sezioni precise di paraffina. |
| Safranin-O | Sigma-Aldrich | S2255 | Il colorante per la colorazione SO |
| Tissue-Tek VIP 5 Jr | Sakura (Giappone) | Processore di infiltrazione sottovuoto |
Riferimenti
- Hunter, D. J., Schofield, D., Callander, E. The individual and socioeconomic impact of osteoarthritis. Nature Reviews Rheumatology. 10 (7), 437-441 (2014).
- Neogi, T. The epidemiology and impact of pain in osteoarthritis. Osteoarthritis and Cartilage. 21
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Ristampe e permessi
