JoVE Journal > Immunology and Infection
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Immunology and Infection

قياس مستقبلات مكملة الإريثروسيت 1 باستخدام قياس التدفق الخلوي

Published: May 19, 2020
doi:
10.3791/60810
, , , , ,
1Oncogeriatric Coordination Unit,Reims University Hospitals, Maison Blanche Hospital, 2Faculty of Medicine,University of Reims Champagne-Ardenne, 3URCACyt, Flow cytometry technical platform,University of Reims Champagne-Ardenne, 4Department of Immunology,Reims University Hospitals, Robert Debre Hospital, 5Department of Internal Medicine and Geriatrics,Reims University Hospitals, Maison Blanche Hospital, 6Faculty of Medicine,University of Reims Champagne-Ardenne

Summary

والهدف من هذه الطريقة هو تحديد كثافة CR1 في كريات الدم الحمراء من أي موضوع عن طريق مقارنة مع ثلاثة مواضيع التي يعرف كثافة CR1 الكريات الحمراء. تستخدم هذه الطريقة قياس الخلايا المتدفقة بعد المناعة من كريات الدم الحمراء للأشخاص بواسطة جسم مضاد أحادي النسيلة مضاد لـ CR1 إلى جانب نظام مضخم باستخدام phycoerythrin (PE).

Abstract

CR1 (CD35, مكمل مستقبلات نوع 1 لC3b/C4b) هو غشاء الوزن الجزيئي عالية جليكوبروتين من حوالي 200 كيلو دا التي تسيطر على استكمال التنشيط, ينقل المجمعات المناعية, ويشارك في استجابات المناعة الفكاهية والخلوية. CR1 موجود على سطح العديد من أنواع الخلايا، بما في ذلك كريات الدم الحمراء، ويعرض تعدد الأشكال في الطول، والهيكل (Knops، أو KN، مجموعة الدم)، والكثافة. متوسط كثافة CR1 لكل كريات الدم الحمراء (CR1/E) هو 500 جزيء لكل كريات الدم الحمراء. تختلف هذه الكثافة من فرد إلى آخر (100-1200 CR1/E) ومن كريات حمراء إلى أخرى في نفس الشخص. نقدم هنا طريقة قوية لقياس الخلايا المتدفقة لقياس كثافة CR1/E ، بما في ذلك في الموضوعات التي تعبر عن كثافة منخفضة ، بمساعدة نظام تضخيم المناعة. وقد مكنتنا هذه الطريقة من إظهار انخفاض التعبير عن كريات الدم الحمراء CR1 في أمراض مثل مرض الزهايمر (AD) ، الذئبة الجهازية erythematosus (SLE) ، الإيدز ، أو الملاريا.

Introduction

CR1 (استكمال مستقبلات النوع 1، CD35) هو 200 كيلو دا بروتين سكري عبر الغشاء الموجود على سطح العديد من أنواع الخلايا، مثل كريات الدم الحمراء1،B الخلايا الليمفاوية2،الخلايا الأحادية، بعض الخلايا التائية،خلايادالجريب 3، الخلايا الفلكية الجنينية4،والخلايا البوائية الكروية5. CR1 التدخل مع ليغاندس C3b, C4b, C3bi6,,7,,8,,9,وحدة فرعية من مكون تكملة الأولى, C1q10 و MBL (المنان ملزمة lectin)11 يمنع تفعيل تكملة وتشارك في استجابة المناعة الفكاهية والخلوية.

في الرئيسيات ، بما في ذلك البشر ، تشارك كريات الدم الحمراء CR1 في نقل المجمعات المناعية إلى الكبد والطحال ، لتنقية الدم ومنع تراكمها في الأنسجة الضعيفة مثل الجلد أو الكلى12،13،14. هذه الظاهرة من التصاق المناعة بين المجمعات المناعية والكريات الحمراء يعتمد على عدد جزيئات CR115. في البشر ، فإن متوسط كثافة CR1 /E هو 500 فقط (أي 500 جزيء من CR1 لكل إريثروسيت). تختلف هذه الكثافة من فرد إلى آخر (100-1200 CR1/E) ومن كريات حمراء إلى أخرى في نفس الشخص. بعض الأفراد من النمط الظاهري “فارغة” التعبير عن أقل من 20 CR1/E16.

يتم تنظيم كثافة CR1/E من قبل اثنين من أليلات autosomal المشتركة المهيمنة المرتبطة بطفرة نقطة في intron 27 من الترميز الجيني لCR1 * 117،18. تنتج هذه الطفرة موقع تقييد إضافي لإنزيم HindIII. شظايا القيد التي تم الحصول عليها بعد الهضم مع HindIII في هذه الحالة هي 7.4 كيلوبايت للأليل مرتبطة بتعبير قوي من CR1 (H: allele عالية) و 6.9 كيلوبايت للأليل المرتبطة بالتعبير CR1 منخفضة (L: allele منخفضة). تم العثور على هذا الرابط في القوقازيين والآسيويين ولكن ليس في السكان المنحدرين من أصل أفريقي19.

ويرتبط أيضا مستوى التعبير عن ERythrocyte CR1 مع وجود الطفرات النيوكليوتيدات نقطة في exon 13 ترميز SCR 10 (I643T) وفي exon 19 ترميز SCR16 (Q981H). وهو مرتفع في homozygous 643I/981Q وانخفاض في homozygous 643T/981H الأفراد20. وهكذا، يعبر الأفراد “المنخفضون” عن حوالي 150 CR1/E، ويعبر الأفراد “المتوسطون” عن حوالي 500 CR1/E، ويعبر الأفراد “المرتفعون” عن حوالي 1000 CR1/E.

بالإضافة إلى تعدد الأشكال كثافة الكريات الحمراء هذا ، يتميز CR1 بتعدد الأشكال الطول المطابق لأربعة أنماط من الأحجام المختلفة: CR1 * 1 (190 kDa) ، CR1 * 2 (220 kDa) ، CR1 * 3 (160 kDa) ، وCR1 * 4 (250 kDa)21 وتعدد الأشكال المضادة للطبيعة المقابلة لمجموعة الدم KN22.

نقدم طريقتنا على أساس قياس التدفق الخلوي لتحديد كثافة CR1/E. باستخدام ثلاثة مواضيع تعرف كثافتها CR1/E، يعبر عن مستوى كثافة منخفض (180 CR1/E)، ومستوى كثافة متوسطة (646 CR1/E)، ومستوى كثافة عالية (966 CR1/E)، فمن السهل قياس شدة الفلورسال (MFI) المنخفضة لخلايا الدم الحمراء أو خلايا الدم الحمراء (RBC)، أو RBC MFI، بعد المكافحة المناعية لـ CR1 باستخدام مقياس تدفق. يمكن للمرء بعد ذلك رسم خط قياسي يمثل MFI كدالة لكثافة CR1/E. قياس MFI من المواضيع التي CR1 / E كثافة غير معروفة ومقارنتها مع هذا الخط القياسي ، فمن الممكن تحديد الأفراد CR1 / E كثافة. وقد استخدمت هذه التقنية لسنوات عديدة في المختبر، ومكنتنا من الكشف عن انخفاض في التعبير عن الكريات الحمراء CR1 في العديد من الأمراض مثل الذئبة الجهازية (SLE)23،متلازمة نقص المناعة المكتسب (الإيدز)24، الملاريا25، ومؤخرا مرض الزهايمر (AD)26،27. تطوير الأدوية التي تستهدف CR1 إلى زوجين مع كريات الدم الحمراء، كما هو الحال في الأدوية المضادة للتجلط28 يتطلب تقييم كثافة CR1/E، وتوافر تقنية قوية لتحديد CR1.

عرض البروتوكول أشواط في singlicate. وهو قابل للتكيف لتحديد كثافة CR1/E على العديد من الأفراد باستخدام 96 لوحات بئر محددة متاحة تجاريا (انظر جدول المواد). لتحقيق هذه الغاية، فمن السهل لتكييف طريقتنا إلى أي لوحة جيدة 96. لكل عينة، يتم توزيع تعليق الخلية من كريات الدم الحمراء (0.5 × 106– 1 × 106 كريات الدم الحمراء) لكل بئر. لكل بئر، أولاً يتم إضافة الأجسام المضادة لCR1 الأولية، ثم العقدية PE، والجسم المضاد الثانوي المضاد للستريبتافيدين، ومرة أخرى streptavidin PE، وذلك باستخدام نفس التخفيفات مثل تلك من طريقتنا، ولكن عن طريق تكييف وحدات التخزين واحترام التناسب.

وينبغي سحب عينات الدم من مواضيع النطاق ومن المواضيع التي يتعين قياسها كميا ً لـ CR1 في نفس الوقت، وتخزينها في الثلاجة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، والتعامل معها عند 4 درجات مئوية (على الثلج و/أو في الثلاجة).

Protocol

وقد استعرضت لجنة الأخلاقيات الإقليمية بروتوكول جمع الدم البشري والتعامل معه ووافقت عليه، ورقم البروتوكول هو 2011-A00594-37. ولأن البروتوكول التالي يصف التعامل مع الدم البشري، ينبغي اتباع مبادئ توجيهية مؤسسية للتخلص من المواد الخطيرة بيولوجياً. يجب ارتداء معدات السلامة المختبرية، مثل معاطف ال…

Representative Results

الكريات الحمراء من ثلاثة مواضيع التي من المعروف كثافة CR1 (“منخفضة” الموضوع [180 CR1/E], موضوع “متوسط” [646 CR1/E]، وموضوع “عالية” [966 CR1/E])، ومن بين اثنين من المواضيع التي كثافة CR1 التي تحتاج إلى تحديد كانت مناعية من قبل الأجسام المضادة المضادة لCR1 إلى جانب نظام تضخيم باستخدام فلوروكروم phycoerythrin. في البداية…

Discussion

تتوفر العديد من التقنيات لتحديد كثافة الكريات الدم الحمراء CR1 (CR1/E). وكانت التقنيات الأولى المستخدمة agglutination من خلايا الدم الحمراء من قبل الأجسام المضادة المضادة لCR131 وتشكيل الورود في وجود كريات الدم الحمراء المغلفة مع C3b32. تم استبدال هذه التقنيات البدائية بسرعة ب?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نشكر جميع أعضاء URCACyt ، منصة قياس الخلايا التدفق ، وموظفي قسم علم المناعة ، وموظفي قسم الطب الباطني وطب الشيخوخة ، الذين ساهموا في تحسين البروتوكول والتحقق من صحته. تم تمويل هذا العمل من قبل مستشفيات جامعة ريمس (رقم المنحة AOL11UF9156).

Materials

1000E Barrier Tip Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France 2079E sample pipetting
1-100 µL Bevelled, filter tip Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany S1120-1840 sample pipetting
Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3) Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook immunostaining
Blouse protection
Bovin serum albumin (7,5%) Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France 15260037 cytometry
Centrifuge Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France 11176917 centrifugation
Clean Solution BD, F-38801 Le Pont de Claix, France 340345 cytometry
Comorack-96 Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath 944060P rack
Cytometer Setup & Tracking Beads Kit BD, F-38801 Le Pont de Claix, France 655051 cytometry
Formaldehyde solution 36.5 % Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France F8775-25ML Fixation
10 µL Graduated, filter tip Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany S1121-3810 sample pipetting
LSRFORTESSA Flow Cytometer BD, F-38801 Le Pont de Claix, France 647788 cytometry
Microman Capillary Pistons Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath 067494 sample pipetting
Micronic 1.40 mL round bottom tubes Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath MP32051 mix
Micropipette Microman – type M25 – Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath 066379 sample pipetting
Phosphate buffered Saline (PBS) Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France 10010031 cytometry
Pipette PS 325 mm, 10 mL Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath 391952 sample pipetting
powder-free Nitrile Exam gloves Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA 486802 sample protection
Reference 2 pipette, 0,5-10 µL Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France 4920000024 sample pipetting
Reference 2 pipette, 20-100 µL Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France 4920000059 sample pipetting
Reference 2 pipette, 100-1000 µL Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France 4920000083 sample pipetting
Rinse Solution BD, F-38801 Le Pont de Claix, France 340346 cytometry
Round bottom tube Sarstedt, F-70150 Marnay, France 55.1579 cytometry
Safe-Lock Tubes, 1.5 mL Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France 0030120086 mix
streptavidin R-PE Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France AS-60669 immunostaining
Tapered Centrifuge Tubes 50 mL Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France 10203001 mix
Vector anti streptavidin biotin Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France BA-0500 immunostaining
Vortex-Genie 2 Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA SI-0236 mix
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fearon, D. T. Identification of the membrane glycoprotein that is the C3b receptor of the human erythrocyte, polymorphonuclear leukocyte, B lymphocyte, and monocyte. Journal of Experimental Medicine. 152 (1), 20-30 (1980).
  2. Ross, G. D., Winchester, R. J., Rabellino, E. M., Hoffman, T. Surface markers of complement receptor lymphocytes. Journal of Clinical Investigation. 62 (5), 1086-1092 (1978).
  3. Reynes, M., et al. Human follicular dendritic cells express CR1, CR2, and CR3 complement receptor antigens. The Journal of Immunology. 135 (4), 2687-2694 (1985).
  4. Gasque, P., et al. Identification and characterization of complement C3 receptors on human astrocytes. The Journal of Immunology. 156 (6), 2247-2255 (1996).
  5. Pascual, M., et al. Identification of membrane-bound CR1 (CD35) in human urine: evidence for its release by glomerular podocytes. Journal of Experimental Medicine. 179 (3), 889-899 (1994).
  6. Fearon, D. T. Regulation of the amplification C3 convertase of human complement by an inhibitory protein isolated from human erythrocyte membrane. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 76 (11), 5867-5871 (1979).
  7. Dobson, N. J., Lambris, J. D., Ross, G. D. Characteristics of isolated erythrocyte complement receptor type one (CR1, C4b-C3b receptor) and CR1-specific antibodies. The Journal of Immunology. 126 (2), 693-698 (1981).
  8. Schreiber, R. D., Pangburn, M. K., Muller-Eberhard, H. J. C3 modified at the thiolester site: acquisition of reactivity with cellular C3b receptors. Bioscience Reports. 1 (11), 873-880 (1981).
  9. Ross, G. D., et al. Generation of three different fragments of bound C3 with purified factor I or serum. II. Location of binding sites in the C3 fragments for factors B and H, complement receptors, and bovine conglutinin. Journal of Experimental Medicine. 158 (2), 334-352 (1983).
  10. Klickstein, L. B., Barbashov, S. F., Liu, T., Jack, R. M., Nicholson-Weller, A. Complement receptor type 1 (CR1, CD35) is a receptor for C1q. Immunity. 7 (3), 345-355 (1997).
  11. Ghiran, I., et al. Complement receptor 1/CD35 is a receptor for mannan-binding lectin. Journal of Experimental Medicine. 192 (12), 1797-1808 (2000).
  12. Cornacoff, J. B., et al. Primate erythrocyte-immune complex-clearing mechanism. Journal of Clinical Investigation. 71 (2), 236-247 (1983).
  13. Waxman, F. J., et al. Complement depletion accelerates the clearance of immune complexes from the circulation of primates. Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1329-1340 (1984).
  14. Waxman, F. J., et al. Differential binding of immunoglobulin A and immunoglobulin G1 immune complexes to primate erythrocytes in vivo. Immunoglobulin A immune complexes bind less well to erythrocytes and are preferentially deposited in glomeruli. Journal of Clinical Investigation. 77 (1), 82-89 (1986).
  15. Horgan, C., Taylor, R. P. Studies on the kinetics of binding of complement-fixing dsDNA/anti-dsDNA immune complexes to the red blood cells of normal individuals and patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis & Rheumatology. 27 (3), 320-329 (1984).
  16. Pham, B. N., et al. Analysis of complement receptor type 1 expression on red blood cells in negative phenotypes of the Knops blood group system, according to CR1 gene allotype polymorphisms. Transfusion. 50 (7), 1435-1443 (2010).
  17. Wilson, J. G., et al. Identification of a restriction fragment length polymorphism by a CR1 cDNA that correlates with the number of CR1 on erythrocytes. Journal of Experimental Medicine. 164 (1), 50-59 (1986).
  18. Rodriguez de Cordoba, S., Rubinstein, P. Quantitative variations of the C3b/C4b receptor (CR1) in human erythrocytes are controlled by genes within the regulator of complement activation (RCA) gene cluster. Journal of Experimental Medicine. 164 (4), 1274-1283 (1986).
  19. Herrera, A. H., Xiang, L., Martin, S. G., Lewis, J., Wilson, J. G. Analysis of complement receptor type 1 (CR1) expression on erythrocytes and of CR1 allelic markers in caucasian and african american populations. Clinical Immunology and Immunopathology. 87 (2), 176-183 (1998).
  20. Birmingham, D. J., et al. A CR1 polymorphism associated with constitutive erythrocyte CR1 levels affects binding to C4b but not C3b. Immunology. 108 (4), 531-538 (2003).
  21. Dykman, T. R., Hatch, J. A., Aqua, M. S., Atkinson, J. P. Polymorphism of the C3b/C4b receptor (CR1): characterization of a fourth allele. The Journal of Immunology. 134 (3), 1787-1789 (1985).
  22. Moulds, J. M., Moulds, J. J., Brown, M., Atkinson, J. P. Antiglobulin testing for CR1-related (Knops/McCoy/Swain-Langley/York) blood group antigens: negative and weak reactions are caused by variable expression of CR1. Vox Sanguinis. 62 (4), 230-235 (1992).
  23. Cohen, J. H., Lutz, H. U., Pennaforte, J. L., Bouchard, A., Kazatchkine, M. D. Peripheral catabolism of CR1 (the C3b receptor, CD35) on erythrocytes from healthy individuals and patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Clinical & Experimental Immunology. 87 (3), 422-428 (1992).
  24. Jouvin, M. H., Rozenbaum, W., Russo, R., Kazatchkine, M. D. Decreased expression of the C3b/C4b complement receptor (CR1) in AIDS and AIDS-related syndromes correlates with clinical subpopulations of patients with HIV infection. AIDS. 1 (2), 89-94 (1987).
  25. Waitumbi, J. N., Donvito, B., Kisserli, A., Cohen, J. H., Stoute, J. A. Age-related changes in red blood cell complement regulatory proteins and susceptibility to severe malaria. The Journal of Infectious Diseases. 190 (6), 1183-1191 (2004).
  26. Mahmoudi, R., et al. Alzheimer’s disease is associated with low density of the long CR1 isoform. Neurobiology of Aging. 36 (4), 5-12 (2015).
  27. Mahmoudi, R., et al. Inherited and Acquired Decrease in Complement Receptor 1 (CR1) Density on Red Blood Cells Associated with High Levels of Soluble CR1 in Alzheimer’s Disease. International Journal of Molecular Sciences. 19 (8), 2175 (2018).
  28. Zaitsev, S., et al. Human complement receptor type 1-directed loading of tissue plasminogen activator on circulating erythrocytes for prophylactic fibrinolysis. Blood. 108 (6), 1895-1902 (2006).
  29. Scatchard, G. The attractions of proteins for small molecules and ions. Annals of the New York Academy of Sciences. 51 (4), 660-672 (1949).
  30. Cohen, J. H., et al. Enumeration of CR1 complement receptors on erythrocytes using a new method for detecting low density cell surface antigens by flow cytometry. Journal of Immunological Methods. 99 (1), 53-58 (1987).
  31. Minota, S., et al. Low C3b receptor reactivity on erythrocytes from patients with systemic lupus erythematosus detected by immune adherence hemagglutination and radioimmunoassays with monoclonal antibody. Arthritis & Rheumatology. 27 (12), 1329-1335 (1984).
  32. Miyakawa, Y., et al. Defective immune-adherence (C3b) receptor on erythrocytes from patients with systemic lupus erythematosus. The Lancet. 2 (8245), 493-497 (1981).
  33. Lida, K., Mornaghi, R., Nussenzweig, V. Complement receptor (CR1) deficiency in erythrocytes from patients with systemic lupus erythematosus. Journal of Experimental Medicine. 155 (5), 1427-1438 (1982).
  34. Tao, K., Nicholls, K., Rockman, S., Kincaid-Smith, P. Expression of complement 3 receptors (CR1 and CR3) on neutrophils and erythrocytes in patients with IgA nephropathy. Clinical Nephrology. 32 (5), 203-208 (1989).
  35. Nickells, M., et al. Mapping epitopes for 20 monoclonal antibodies to CR1. Clinical and Experimental Immunology. 112 (1), 27-33 (1998).
  36. Oi, V. T., Glazer, A. N., Stryer, L. Fluorescent phycobiliprotein conjugates for analyses of cells and molecules. The Journal of Cell Biology. 93 (3), 981-986 (1982).
  37. Chaiet, L., Wolf, F. J. The properties of streptavidin, a biotin-binding protein produced by streptomyces. Archives of Biochemistry and Biophysics. 20 (106), 1-5 (1964).
  38. Cockburn, I. A., Donvito, B., Cohen, J. H., Rowe, J. A. A simple method for accurate quantification of complement receptor 1 on erythrocytes preserved by fixing or freezing. Journal of Immunological Methods. 20 (271), 59-64 (2002).
  39. Chen, C. H., et al. Antibody CR1-2B11 recognizes a non-polymorphic epitope of human CR1 (CD35). Clinical & Experimental Immunology. 148 (3), 546-554 (2007).
  40. Ripoche, J., Sim, R. B. Loss of complement receptor type 1 (CR1) on ageing of erythrocytes. Studies of proteolytic release of the receptor. Biochemical Journal. 235 (3), 815-821 (1986).
  41. Moldenhauer, F., Botto, M., Walport, M. J. The rate of loss of CR1 from ageing erythrocytes in vivo in normal subjects and SLE patients: no correlation with structural or numerical polymorphisms. Clinical & Experimental Immunology. 72 (1), 74-78 (1988).
  42. Cohen, J. H., Lutz, H. U., Pennaforte, J. L., Bouchard, A., Kazatchkine, M. D. Peripheral catabolism of CR1 (the C3b receptor, CD35) on erythrocytes from healthy individuals and patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Clinical & Experimental Immunology. 87 (3), 422-428 (1992).
  43. Nickells, M. W., Subramanian, V. B., Clemenza, L., Atkinson, J. P. Identification of complement receptor type 1-related proteins on primate erythrocytes. The Journal of Immunology. 154 (6), 2829-2837 (1995).
  44. Hebert, L. A., Birmingham, D. J., Shen, X. P., Cosio, F. G. Stimulating erythropoiesis increases complement receptor expression on primate erythrocytes. Clinical Immunology and Immunopathology. 62 (3), 301-306 (1992).
  45. Davis, K. A., Abrams, B., Iyer, S. B., Hoffman, R. A., Bishop, J. E. Determination of CD4 antigen density on cells: Role of antibody valency, avidity, clones, and conjugation. Cytometry. 33 (2), 197-205 (1998).
  46. Pannu, K. K., Joe, E. T., Iyer, S. B. Performance evaluation of QuantiBRITE phycoerythrin beads. Cytometry. 45 (4), 250-258 (2001).
  47. Barnett, D., Storie, I., Wilson, G. A., Granger, V., Reilly, J. T. Determination of leucocyte antibody binding capacity (ABC): the need for standardization. Clinical Laboratory Haematology. 20 (3), 155-164 (1998).
  48. Bikoue, A., et al. Quantitative analysis of leukocyte membrane antigen expression: normal adult values. Cytometry. 26 (2), 137-147 (1996).
  49. Serke, S., van Lessen, A., Huhn, D. Quantitative fluorescence flow cytometry: a comparison of the three techniques for direct and indirect immunofluorescence. Cytometry. 33 (2), 179-187 (1998).

Tags

ErythrocyteComplement Receptor 1Flow CytometryCell Receptor DensityImmunostainingBiotinylated AntibodyStreptavidin Phycoerythrin

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Kisserli, A., Audonnet, S., Duret, V., Tabary, T., Cohen, J. H. M., Mahmoudi, R. Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry. J. Vis. Exp. (159), e60810, doi:10.3791/60810 (2020).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image