नैदानिक संदर्भ में, स्थानीय अग्नाशय के कैंसर वाले रोगियों को अग्नाशय के कैंसर से गुजरना होगा जिसके बाद एडजुवेंट उपचार होगा। यहां रिपोर्ट किए गए इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य नग्न चूहों में इस नैदानिक परिदृश्य को मॉडलिंग करने की एक सुरक्षित और प्रभावी विधि स्थापित करना है, अग्नाशय के कैंसर के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के माध्यम से डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी के बाद।
अग्नाशय के कैंसर (पीसी) की सर्जरी के लिए विचार किया जा रहा रोगियों में adjuvant और/या neoadjuvant चिकित्सा का अध्ययन करने के लिए संतोषजनक पशु मॉडल की कमी है । इस कमी को दूर करने के लिए, हम पीसी के ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण को शामिल करते हुए एक माउस मॉडल का वर्णन करते हैं जिसके बाद डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी होती है। मॉडल को एडजुवेंट और नव एडजुवेंट सेटिंग्स में विभिन्न चिकित्सीय दृष्टिकोणों के अध्ययन के लिए सुरक्षित और उपयुक्त रूप से लचीला होने के लिए प्रदर्शित किया गया है।
इस मॉडल में, एक अग्नाशय ट्यूमर पहले मानव अग्नाशय के कैंसर कोशिकाओं (लूसिफ़ेरेस-टैग AsPC-1) और मानव कैंसर से जुड़े अग्नाशय स्टेलेट कोशिकाओं के एक मिश्रण को बाल्ब/सी एथिमिक न्यूड चूहों के डिस्टैल्ट अग्न्याशय में प्रत्यारोपित करके उत्पन्न होता है । तीन सप्ताह के बाद, कैंसर को फिर से लेप्रोटॉमी, डिस्टल अग्नाशय और स्प्लीनेक्टॉमी द्वारा पुन: प्राप्त किया जाता है। इस मॉडल में, बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग का उपयोग कैंसर के विकास की प्रगति और रिसेक्शन/उपचार के प्रभावों का पालन करने के लिए किया जा सकता है। रिसेक्शन के बाद, एडजुवेंट थेरेपी दी जा सकती है। वैकल्पिक रूप से, नियोएडजुवेंट उपचार पुनर्सेक्शन से पहले दिया जा सकता है।
45 चूहों से प्रतिनिधि डेटा प्रस्तुत कर रहे हैं। सभी चूहों को सफल डिस्टल अग्नाशय/स्प्लेनेक्टॉमी से गुजरना पड़ा, जिसमें हेमेस्तिस का कोई मुद्दा नहीं था । 43 (96%) में 5 मिमी से अधिक स्थूल समीपस्थ अग्नाशय का मार्जिन हासिल किया गया था चूहों। अग्नाशय केरिसेक्शन की तकनीकी सफलता दर 100% थी, जिसमें 0% प्रारंभिक मृत्यु दर और रुग्णता थी। रीसेक्शन के बाद सप्ताह के दौरान किसी भी जानवर की मौत नहीं हुई ।
संक्षेप में, हम चूहों में अग्नाशय के कैंसर के सर्जिकल रीसेक्शन मॉडल के लिए एक मजबूत और प्रजनन योग्य तकनीक का वर्णन करते हैं जो नैदानिक परिदृश्य की नकल करता है। मॉडल दोनों adjuvant और neoadjuvant उपचार के परीक्षण के लिए उपयोगी हो सकता है।
अग्नाशय डक्टल एडेनोकार्सिनोमा (अग्नाशय का कैंसर [पीसी]) एक खराब पूर्वानुमान1से जुड़ा हुआ है। सर्जिकल रीसेक्शन पीसी के लिए केवल संभावित उपचारात्मक उपचार रहता है और प्रारंभिक चरण की बीमारी के साथ पेश रोगियों के लिए विचार किया जाना चाहिए। दुर्भाग्य से, यहां तक कि आर 0 रीसेक्शन (यानी, ट्यूमर से मुक्त रीसेक्शन मार्जिन) के साथ, पुनरावृत्ति दर (स्थानीय या पता नहीं चला मेटास्टैटिक रोग से) उच्च2,3है। इसलिए, लगभग सभी रोगियों में प्रणालीगत एडजुवेंट थेरेपी इंगित की जाती है जो रिसेक्शन4से गुजरते हैं। इसके अलावा, जबकि नियोएडजुवेंट थेरेपी अब केवल सीमा रेखा-पुन: प्राप्त कैंसर के लिए अनुशंसित है, इसके संकेत इस तरह का विस्तार कर रहे हैं कि इसका नियमित उपयोग बहुत नैदानिक अनुसंधान5,6,7,8का ध्यान केंद्रित है। Resection शामिल पीसी के लिए उपन्यास चिकित्सकीय दृष्टिकोण विकसित करने के लिए, इन दृष्टिकोणों को पहले पूर्व-नैदानिक मॉडल में मूल्यांकन करने की आवश्यकता होती है जो नैदानिक सेटिंग्स को सही ढंग से पुन: रीकैपिटेट करते हैं।
पीसी के ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल का उपयोग अतीत में दवा उपचार 9,10का परीक्षण करने के लिए अक्सर कियाजातारहा है। इनमें से कई कैंसर कोशिकाओं के इंजेक्शन द्वारा अकेले माउस अग्न्याशय में उत्पादित किए गए थे, जिसके परिणामस्वरूप ट्यूमर में पीसी की विशेषता वाले प्रमुख स्ट्रोमा का अभाव था। हाल ही में, सह-इंजेक्शन ऑर्थोटोपिक मॉडल, जैसे कि हमने पहली बार मानव पीसी और मानव अग्नाशय के स्टेलेट कोशिकाओं (पीएससी, पीसी में कोलेजन स्ट्रोमा के प्राथमिक उत्पादकों) के मिश्रण को इंजेक्शन देकर विकसित किया था, नियमित उपयोग में आ गए हैं11,12। कैंसर और स्ट्रोमल कोशिकाओं के इस तरह के सह-इंजेक्शन द्वारा उत्पादित ट्यूमर कैंसर तत्वों और पीसी के लक्षण स्ट्रोमल (डेस्मोप्लास्टिक) घटक दोनों को प्रदर्शित करते हैं, और (ii) कैंसर सेल प्रसार और मेटास्टेसिस11को बढ़ाया जाता है। इस प्रकार, यह मॉडल मानव पीसी जैसा दिखता है। जबकि ऑर्थोटोपिक पीसी के कई रेसेक्शनल मॉडल13,14, 15,16वर्णित किए गए हैं, किसी ने भी मनुष्यों में अग्नाशय की रिसेक्शन की नैदानिक वास्तविकताओं को इस मॉडल के रूप में सटीक नहीं बताया है, और इसलिए एडजुवेंट या नियोडजुवेंट उपचारों के परीक्षण के लिए उप-स्थिर किया गया है।
प्रस्तुत माउस मॉडल के उद्देश्य के लिए कैसे प्रदर्शित करने के लिए थे: (i) सफलतापूर्वक प्रत्यारोपण ऑर्थोटोपिक अग्नाशय के कैंसर को कम करते हुए अनजाने पेरिटोनियल प्रसार को कम करने और (ii) बाद में पूरी तरह से कैंसर को पुनः काटना । कागज सुझावों और इस तकनीक के संभावित नुकसान पर प्रकाश डाला ।
अग्नाशय के कैंसर का एक रीसेक्शनल ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल महत्वपूर्ण है क्योंकि यह एडजुवेंट और नियोडजुवेंट उपचार के परीक्षण के लिए अनुमति देता है। यह अग्नाशय के कैंसर में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जहां…
The authors have nothing to disclose.
लेखकों को एवनर अग्नाशय के कैंसर फाउंडेशन से समर्थन मिला है ।
Animals, Materials and Equipment for Implantation Procedure | |||
AsPC-1 human pancreatic cancer cell line, luciferase tagged (luc+ gene from Promega PGL3 Basic plasmid) | American Type Culture Collection, Manassas, VA, USA | supplied by Professor Takashi Murakami, Saitama Medical University, Saitama, Japan | |
Autoclip wound clips, 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW, Australia | 500346 | |
Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | ||
Cancer associated human pancreatic stellate cells | Pancreatic Research Group cell bank | In house cell bank | |
Cryogenic tubes, 1.0 mL | Thermo Fisher Scientific Australia Pty Ltd, Scoresby, VIC, Australia | 366656 | |
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
Foetal bovine serum (FBS) | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 16000044 | |
Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
Homozygous athymic nude mice: Strain BALB/c-Fox1nu/Ausb, female | Australian Bioresources, Moss Vale, NSW, Australia | ||
Iscove's modified Dulbecco's medium (IMDM) with 4mM L-glutamine and no phenol red | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 21056023 | |
Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Penicillin 10,000 U/mL, streptomycin 10,000 μg/mL | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 15140122 | |
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
Reflex clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 with phenol red and 300 mg/L Lglutamine | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 11875085 | |
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Trypsin 0.05%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25300054 | For pancreatic stellate cells |
Trypsin 0.25%, EDTA 0.02% | Life Technologies Corporation, Tullamarine, VIC, Australia | 25200056 | For ASPC-1 cells |
U-100 insulin syringes, 0.5 mL with 29 G (0.33 mm) × 13 mm needle | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD, USA | ||
Equipment for Resection Procedure | |||
Alm self-retaining retractor | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Autoclip wound clips 9 mm | Becton Dickson Pty Ltd, North Ryde, NSW | 500346 | |
Basic Dressing Pack | Multigate Medical Products Pty Ltd, Villawood, NSW, Australia | 08-559NP | |
Disposable stainless-steel scalpel blade with handle, size 15 | Livingstone International, Mascot, NSW, | SCP15 | |
Gilles fine tooth forceps 12 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Hand-held high temperature fine tip cautery | Bovie Medical Corporation, Melville, NY, USA | AA01 | |
Heated mats to maintain body temperature during surgery and postoperative recovery | Generic | ||
IVIS Lumina II Bioluminescent Imaging Device | Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA | ||
Jewellers forceps 11.5 cm | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro needle holder (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Micro scissors (round handle) 15 cm straight | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Polyglycolic acid suture, size USP 5/0 on 13mm half-circle round-bodied needle | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | C1049407 | |
Portable weighing scale | Precision balances, Bradford, MA, USA | ||
Reflex wound clip applier and clip remover | World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA | 500345 | |
Round bodied vessel dilator 15 cm, 0.1 mm tip | Generic stainless steel microsurgical instrument set | ||
Titanium “Weck style” Ligaclip, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
Titanium Ligaclip applier for open surgery, small | HZMIM, Hangzhou, China | ||
Volatile anaesthetic machine, including vapouriser and induction chamber | Generic | Generic vapouriser and induction chamber | |
Drugs for Procedures | |||
70% w/w ethanol solution | Sigma-Aldrich Pty Ltd, Castle Hill, NSW, Australia | Applied topically as surgical skin preparation | |
Buprenorphine 0.3 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 0.05 mg/kg s.c. | |
D-Luciferin (1 U/g) | PerkinElmer, Inc., Waltham, MA, USA | 122799 | diluted in PBS to 15 mg/mL. Dose: 150 mg/kg i.p |
Enrofloxacin 50 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 5 mg/kg s.c. | |
Flunixin 50 mg/mL | Norbrook Laboratories Australia, Tullamarine, VIC, Australia | Dose: 2.5 mg/kg s.c. | |
Isoflurane | Zoetis Australia Pty Ltd., Rhodes, NSW, Australia | Dose (vapourised with oxygen): 4% induction, 3% maintenance | |
Ketamine 100 mg/mL | Maylab, Slacks Creek, QLD, Australia | Dose: 80 mg/kg i.p. | |
Povidone-Iodine 10% w/v solution | Perrigo Australia, Balcatta, WA, Australia | RIO00802F | Applied topically to the anterior abdomen as surgical skin preparation |
Refresh eye ointment (liquid paraffin 42.5% w/w, soft white paraffin 57.3% w/w) | Allergan Australia Pty Ltd, Gordon, NSW, Australia | Applied to both eyes | |
Sodium chloride 0.9% w/v | Braun Australia Pty Ltd, Bella Vista, NSW, Australia | 9481P | Dose: 900 μL s.c. |
Water for injections BP | Pfizer Australia, Sydney, NSW, Australia | For dilution of drugs | |
Xylazine 20 mg/mL | Troy Laboratories Pty Ltd, Glendenning, NSW, Australia | Dose: 10 mg/kg i.p. |