ラットにおける脱細胞化腎臓足場の調製
Summary
このプロトコルは、脱細胞化ラット腎臓を用いた足場を開発する方法を導入する。このプロトコルには、バイオアベイラビリティを確認するための脱細胞化および再細胞化プロセスが含まれます。脱細胞化は、トリトンX-100およびドデシル硫酸ナトリウムを用いて行われる。
Abstract
組織工学は、バイオメディシンの最先端の分野です。細胞培養技術は、疾患や損傷した臓器を置き換えるために機能組織および器官の再生に適用することができる。足場は、生体内で分化した幹細胞を用いて3次元の器官または組織の生成を容易にするために必要とされる。本報告では、脱細胞化ラット腎臓を用いた血管化足場の新しい開発方法について述べている。8週齢のスプレイグ・ドーリーラットがこの研究で使用され、ヘパリンを心臓に注入して腎血管への流入を促進し、ヘパリンが腎血管に浸透することを可能にした。腹腔を開き、左腎臓を採取した。採取した腎臓を、トリトンX-100やドデシル硫酸ナトリウムなどの洗剤を用いて9時間透過し、組織を脱細胞化した。脱細胞化された腎臓足場を1%ペニシリン/ストレプトマイシンとヘパリンで穏やかに洗浄し、細胞の破片および化学残渣を除去した。脱細胞化された血管足場を用いて幹細胞を移植することは、新しい臓器の生成を促進することが期待される。したがって、血管化足場は、将来的に臓器移植片の組織工学の基礎を提供し得る。
Introduction
細胞培養技術は、疾患や損傷した臓器を置き換えるために機能組織および器官の再生に適用される。アレルギー性臓器移植は、現在、不可逆的な臓器損傷のための最も一般的な治療法です。しかし、このアプローチでは、移植された臓器の拒絶反応を防ぐために免疫抑制を使用する必要があります。さらに、移植免疫学の進歩にもかかわらず、移植レシピエントの20%が5年以内に急性拒絶反応を経験することがあり、移植後10年以内に、レシピエントの40%が移植片を失うか、または1を死ぬ可能性がある。
組織工学技術の進歩は、分化した幹細胞を用いた免疫拒絶反応を伴わない新しい臓器移植のための新しいパラダイムを生み出した。幹細胞分化後、合成細胞外マトリックスと呼ばれる足場は、3次元器官の生成を容易にし、新しい組織がレシピエント内で繁栄することを可能にするために必要とされる。脱細胞化された在来器官からの足場は、細胞の樹立および幹細胞増殖の増強のためのより効果的な環境を含む利点を有するが、これらのメカニズムは完全に解明されていない2。特に、腎臓は、豊富な循環と幹細胞の確立のためのニッチを有するため、足場生成に適した器官である。さらに、腎臓の構造が複雑なため、臓器移植のために腎臓を人工的に再生することは困難である。
本報告では、組織工学の目的で将来の動物研究を容易にするために、ラットモデルで脱細胞化された臓器を用いて血管化足場を開発する方法を紹介する。
Protocol
Representative Results
Discussion
臓器や組織の脱細胞化には、さまざまなプロトコルが用いられてきた。最適な脱細胞化プロトコルは、細胞外マトリックス(ECM)の3次元アーキテクチャを維持する必要があります。一般に、このようなプロトコルは、物理的な処理またはイオン溶液によって細胞膜を融解し、細胞質および核を酵素処理または洗剤によってECMから分離し、次いで組織3から細胞の破片を除去する…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、釜山国立大学病院の生物医学研究所グラントによって支援されました。
Materials
| 1 cc syringe (inject probes and vehicle solutions | Becton Dickinson | 305217 | |
| 10-0 ethilon for vessel anastomosis | Ethicon | 9032G | |
| 25 gauge inch guide needle(for vascular catheters) | Becton Dickinson | 305145 | |
| 3-0 PDS incision closure rat | Ethicon | Z316H | |
| 3-0 Prolene incision closure rat | Ethicon | 8832H | |
| 3-0 silk spool vascular access/ligation in rat | Braintree Scientific | SUT-S 110 | |
| 4-0 PDS incision closure mouse | Ethicon | Z773D | |
| 4-0 Prolene incision closure mouse | Ethicon | 8831H | |
| 5-0 silk spool vascular access/ligation in mouse | Braintree Scientific | SUT-S 106 | |
| Fine Scissors to cut fascia/connective tissue | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Halsey needle holder | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Kelly Hemostat for rats: muscle clamp to minimize bleeding when cut | Fine Science Tools | 13018-14 | |
| Polyethelyne 50 tubing, catheter tubing 100 ft | Braintree Scientific | .023" × .038” | |
| Schwartz microserrefine vascular clamps | Fine Science Tools | 18052-01 (straight) | |
| 18052-03 (curved) | |||
| Surgical Scissors to cut skin | Fine Science Tools | 14002-12 | |
| Vannas-Tubingen Spring scissors for arteriotomy | Fine Science Tools | 15003-08 |
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