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Behavior

囲まれたY迷路を使用して爬虫類の化学感覚挙動を評価する

Published: April 7, 2021 doi: 10.3791/61858
Automatic Translation
*1, *2, 3, 2, 2, 1, 1, 4, 3, 4
1Department of Biology, James Madison University, 2U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center, 3U.S. Department of Agriculture, National Wildlife Research Center, 4U.S. Geological Survey, Fort Collins Science Center
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

Y迷路は、動物の行動、特に様々なソースからの孤立した化学的手がかりを駆動する特定の刺激の関連性を決定することを可能にする。慎重な設計と計画は、堅牢なデータ(例えば、差別、探査の程度、多数の行動)をもたらすことができます。この実験装置は行動および生態学的な質問に強力な洞察を提供できる。

Abstract

爬虫類は、食品や特異性によって生成された化学香りのトレイルなどの動物の行動を知らせ、駆動するために、さまざまな環境の手がかりを利用しています。脊椎動物、特に侵略的な種の香りトレーリング行動を解読すると、探索的行動を誘発する手がかりの発見を可能にし、貴重な基本的および適用された生物学的ツールの開発に役立ちます。しかし、化学的手掛かりと競合する他の競合する環境の手がかりによって支配的に駆動される行動を正確に特定することは困難な場合があります。Y迷路は、さまざまな分類体に及ぶ脊椎動物の化学感覚行動を定量化できる動物行動研究で使用される一般的なツールです。外部刺激を減らすことによって、Y迷路は交和因子を除去し、二項選択を有する焦点動物を提示する。私たちのY迷路研究では、香りの動物は香りの道を残すために迷路の片腕に制限され、香り敷設パラメータが満たされると削除されます。そして、試験の種類に応じて、焦点動物が迷路に入ることを許可されるか、競合する香りの軌跡が作成されます。その結果、提示された化学的手掛かりを区別しながら、焦点動物の選択と行動の記録が得られます。ここでは、異なる侵襲的爬虫類種に合わせた2つのY迷路装置:アルゼンチンの黒と白のテグトカゲ(サルバトールメリアナエ)とビルマのニシキヘビ(Pythonビビクタトゥス)が説明され、これらのY迷路の操作と清掃を概説する。また、さまざまなデータ生成、実験的な欠点および解、および示唆されたデータ分析フレームワークが要約されている。

Introduction

Y迷路は、動物の行動の研究で、さまざまな質問に対処できる一般的で簡単なツールです。研究室で広く使用されているだけでなく、Y迷路は、比較的遠隔地で野生動物を研究するために、様々なフィールド環境と機能的に互換性があります。研究者は、同様に多様なフィールドアプリケーション(例えば、ランプレー1;シクリッド魚2;毒カエル3;ラセラチドトカゲ4;ガーターヘビ5)にわたる多種多様な分類法でY迷路を使用して野生の脊椎動物の挙動を調べました。

多くの研究者は、化学手掛かりが生殖、空間、採餌生態学における動物行動をどの程度駆動するかに焦点を当てています6.種々の化学刺激は、Y迷路や微細スケールで、濃度7でわずかに異なる2つの化学トレイル、または標的種8の生殖状態に基づく検出能力などで試験することができる。化学トレイル(Y迷路試験で使用される主要な刺激)は、特異性によって自然に作成されるか、または定義された化学源1、5を使用して研究者によって環境に特別に配置することができます。刺激はまた、キュープレゼンテーションのコンテキストを変更する(空中対基質トレイル9;ビジュアルと化学キュー10)などのキューのマルチモーダルな影響を決定するために、ユニークな組み合わせでテストすることができます。爬虫類の化学感覚応答を評価する方法は他にもたくさんありますが(討論セクションを参照)、Y迷路は検索行動を評価し、複数の時間的および空間的尺度で検索することを可能にし、より高いレベルの行動推論につながる可能性があります。

爬虫類は、生殖および採餌生態学における化学的手がかりへの依存について広く試験されており、研究者はこれらの研究11,12でY迷路をしばしば採用している。爬虫類の化学生態学は、野生動物管理者にとって価値のある様々な進化的および行動的な質問に対処するためにY迷路を採用した研究によって解読され続けています。例えば、最近の実験では、浸潤性ヘビとトカゲ種の研究は、化学手掛かりだけでは、Y迷路13、14、15の新しい環境内での選択と時間割り当てに影響を与える可能性があることを明らかにした。

適度な大きさの焦点動物(例えば、大きな体の爬虫類)のための大きなY迷路の使用は、一般的に焦点動物を長期的に容易に収容できる実験室の設定に制限され、実験因子(例えば、気候、光、外部刺激)を制御することができ、インフラ(例えば、電力、流水)へのアクセスは無制限である。しかし、野生動物に関する研究は、多くの場合、様々な理由(例えば、物流、許可)のために特定の場所に制限されています。その結果、一貫性のある同等の結果を維持するために、創造的な問題解決と方法論的調整を通じて対処しなければならない課題が生じます。

ここでは、Y迷路と遠隔監視ツールを使用して、野生捕獲、捕虜、捕虜のアルゼンチンの黒と白のテグトカゲ(サルバトールメリアナ)、野生捕捉されたビルマのニシキヘビ(Python Bivitus)の異なる分野シナリオで、侵襲的なスカメイト爬虫類(ヘビおよびトカゲ)の生殖化学生態学を評価するために説明されている。その名前で示されるように、Y迷路装置は動物が主通路(Yの基部)に入る実験環境を作り出します。「ベース」)は、2つの発散通路(Yの腕)につながります。「腕」)。これらの実験では、香りを敷設する動物(迷路の制限区域で刺激の香りを提供する)と焦点動物(データは香りの道を探索する際にこの動物に収集される)の2種類の動物が単一の試験に使用されます。

化学生態学的研究の実験装置として、Y迷路は、内部の動物を容易に除去し、徹底的な洗浄とリセットのために混乱させることができる方法で構築されなければならない。また、方法論的な調整を促すこれらの異なる試験環境(例えば、日当り動物と夜行性動物、インフラの違い)に固有の制約についても説明します。テグトカゲとビルマのニシキヘビに焦点を当てましたが、これらのデザインは爬虫類種の広い範囲に適用することができます。侵略爬虫類に関するこの研究では、Y迷路は、特定の種がもたらす侵略の脅威と一緒にステップをシフトする管理目標を知らせるためにデータの迅速な収集を可能にするため、推論の速度と規模に利益をもたらします。特に、外来種の化学学を研究することは、効果的な化学制御ツールの開発にとって重要です。

差別は、焦点動物が2つの刺激の間で選択し、意思決定プロセスが評価されるY迷路を使用した経験的試験からの重要な観察である。また、裁判中のY迷路試験(ライブ)や裁判後(ビデオ)で多くの行動を採点して、没収力を拡大することができます。特定の研究の先行目標の複雑さは、ライブ観測またはアーカイブされた記録がデザインに最も適しているかどうかを決定します。ここでは、Y迷路法が、特に化学生態学において爬虫類の行動に関する類似の質問に関心を持つ研究者による将来の研究を知らせるために、化学生態学的な質問に対処するために詳細に説明されている。

Protocol

生きた脊椎動物の使用に関するすべての手順は、米国農務省と米国地質調査所の施設動物管理および使用委員会によって承認されました。

注: これらの研究は侵略的な脊椎動物に焦点を当てているため、封じ込め基準への準拠も満たされ、実験の設計と実行に特定の制約が課されます。これらの方法の多くは、2つの研究場所と日経性の研究のタイミングとの間で類似しているが、以下の2つのセクションのそれぞれで明確な方法が説明されている。

1.米国農務省(USDA)動物植物健康検査サービス(APHIS)野生動物サービス国立野生動物研究センターフロリダフィールドステーションのためのY迷路のセットアップと日希釈プロトコル:野生捕獲、捕虜テグの現場試験

注: Y 迷路と格納構造のすべてのコンポーネントのプランは、補足ファイル 1に記載されています。

  1. Y迷路の寸法とデザイン
    1. Y迷路を固定するために底部(1.22 m x 2.44 mの繊維セメントサイディングパネル)を使用してください。最上層に穴を開けて、キャリッジボルトが迷路片のアタッチメントのために上方に通過できるようにします。具体的な手順については、補足ファイル 1を参照してください。
    2. 白いPVCトリムボードから迷路の壁を構築します。ベースの内部寸法は120 cm L(側壁)x 42 cm W x 14 cm Hです。
      注:通路の幅は2倍の焦点の動物の幅を収容するように設計されていた。余分な幅は2つの、動物が堆積した香りの道を作成する柔軟性を可能にする。
    3. 腕の内部寸法が120cmL(側面)x 40cm W x 14 cm Hであることを確認してください。
    4. 試験を実行する前に、個別の底部、側面、および上部コンポーネントを使用して迷路を組み立てます。迷路内の動物の視覚化を可能にするために明確なアクリルのトップを作ります。具体的な手順については、補足ファイル 1を参照してください。
      1. 1 つの香り跡が作成されたら、ベース内の内部パーティションを使用して、香りが敷設されたテグのスペース アクセスを制限します。具体的な手順については、補足ファイル 1を参照してください。
      2. 2つの香りのトレイルが順番に異なる動物によって堆積される場合は、パーティションのシステムを使用して迷路の交互の腕をブロックし、各動物をベースの交番の半分から除外します。具体的な手順については、補足ファイル 1を参照してください。
    5. Y迷路試験で使用される動物の輸送と収集を可能にするためにボックスを使用してください。すべてのボックスが不透明で、取り外し可能なふたと簡単に固定されたアクリルドアが取り付けられていることを確認してください。
      1. ベースボックス(109cm L x 56 cm W x 46 cm H)がY迷路のベースの開口部にあることを確認します。迷路に香りや焦点動物を転送し、ドアを開けて迷路に動物の自発的なアクセスを許可する前に順応するために使用します。
      2. アームボックス(83cm L x 50 cm W x 44 cm H)がY迷路の腕の端端にあることを確認して、香りまたは焦点動物の捕獲を容易にします。
      3. コンストラクションとアセンブリの具体的な手順については、「補足ファイル 1」を参照してください。
  2. ディウナルビデオ取得のためのカメラ設定
    1. カメラ仕様: プロジェクトカメラが可変光条件下で連続映像を録画でき、温度と湿度の条件下での屋外での使用に適していることを確認します。
      1. カメラをスタディエンクロージャの下側に取り付けた状態で、Y迷路全体をカメラの視野に収めることができます。視野を拡大または縮小するには、カメラのレンズまたは高さを調整します。視野が設定されている場合は、舌フリックなどの十分な動作の詳細をキャプチャできることを確認します。
        注:スタディエンクロージャの高さが固定されている場合(例えば、180 cm H)、それによって視野への調整を制限し、複数のカメラを使用してY迷路内部の完全なカバレッジを得ることができます。屋外アプリケーションで使用する場合は、カメラが「ワイドダイナミックレンジ」を有効にするように設定されていることを確認します。
    2. 電源仕様:各カメラに、計画された試験期間中の連続ビデオを録画するための十分な電源が必要であることを確認します(例えば、バックアップバッテリを内蔵した無停電電源装置(UPS)を使用して連続電力を確保します)。
      注: AC 電源が使用できない場合、デジタル ビデオ レコーダー(DVR)またはネットワーク ビデオ レコーダー(NVR)が使用されている POE スイッチに接続されたネットワーク ケーブルを介して、POE (イーサネット上の電源) カメラを電源を供給できます。
    3. 録画仕様: DVR または NVR を選択する場合は、十分なストレージ容量と、使用するカメラの数に対応できる十分な POE コネクタ (DVR) またはカメラ チャネル (NVR) を含むプロジェクト要件を満たしていることを確認します。ビデオ品質に合わせて、データファイルのサイズを考慮して、ビデオ品質に合わせて選択します(H264圧縮率と10フレーム/秒の画像レート[FPS])。
    4. ビデオを取得および処理するためのプロトコル:
      1. 動物が迷路に入り始めた瞬間から、キャプチャまたはプリセットの時間枠(1.3.3.4)の瞬間までビデオの録画を開始します。
      2. 1台以上のコンピュータにインストールでき、ライブまたは録画されたビデオの視聴が可能なソフトウェアを使用して、選択したビデオ形式を使用してファイルをエクスポートします。
      3. 複数のフィードを同時に確認できるように、各カメラで同じ時間枠とビデオの期間をエクスポートしてください。
      4. DVR/NVRファイルの保存容量が制限されている場合、多くのシステムが古いデータを新しいデータで上書きするので、データを定期的にエクスポートしてください。
  3. 香りを敷設動物を実行するためのプロトコル
    1. バイアスの評価
      1. 実験試験を実施する前に、以下に説明するように迷路を組み立てることによって、Y迷路の偏りを評価しますが、紙に香りを提示しません。焦点動物を順応し、試験を開始します。
        注:研究の設計に応じて(例えば、毎回同じ焦点動物を使用して繰り返し測定と新しい焦点動物のテスト)、バイアス試験は迷路自体が、設計上、焦点動物の選択に偏りないことを確立する。多くの要因は、標高、太陽光、視覚マーカーなどのバイアスに影響します。
      2. 迷路の他の物理的な側面を再調整しても、サイドバイアスが除去されない場合は、指定された試験で実験的な香りを受け取るように指定された腕をランダム化します。
        注: 一定の試行回数を超えて、偏りのない迷路は、どちらの腕の選択確率 0.5 で、二項検定が実行されます (図 2)。
    2. 試験準備とY迷路アセンブリ
      1. 動物が香りの汚染を避けるために探検できる表面を扱うときは、全体にニトリル手袋を着用してください。複数の香りトレイルが作成されている場合は、トライアルの間とトライアルのセットアップ内で手袋を変更します。
      2. きれいな表面に新しい、きれいな香りの紙(白い肉屋の紙、最低61 cm幅)を準備します。各セクションの用紙がYの接合部で重なり合い、ベースの端部と腕を越えて箱の下に収まるように適切な長さにカットします。
      3. 迷路の底を掃いてから、直接紙で覆うか、紙と底部の境界層(例えば、プラスチックシート)で覆い、動物が迷路内で排便またはムスクを除去する場合にクリーンアップを容易にします。
      4. 下部にキャリッジボルトを付けて紙を固定し、一方の端から端まで作業して表面を滑らかにします。接合部の用紙を重ねて、ベースペーパーが上に置きます。
      5. 迷路の側面をキャリッジボルトの上の位置に配置しますが、底部に固定しないでください。
      6. 試験の種類をテストするために必要なパーティションを挿入して保護します (シングルセント 1.3.3 対ダブル香りの試験 1.3.4 を参照)。
      7. アクリルの上の部分をスロットにスライドさせ、平らなヘッドネイルで固定します。
      8. 翼のナットをキャリッジボルトに締めて、側面を底面に固定します。
      9. 清潔なアームボックスを所定の位置に置き、つまみねじで固定します。ケーブルタイを使用して箱蓋を固定します。ドアが取り外されていることを確認します。
    3. シングル・センズ・トライアル
      注:これらの試験の目的は、1つの腕を通してベースから走るY迷路に単一の香りの軌跡を提示することです。
      1. アクリルトップを取り付ける前に、未処理のアームをブロックするためにパーティションを固定します。香りのアームをランダムに選択します(コイントス、乱数発生器など)。
      2. 香りを置く動物を清潔で乾燥したベースボックスに入れます。ベースボックス(ケーブルタイ、ボルトなど)とドア(例えば、つまみねじ)の蓋を固定します。保持ボックスをスタディエンクロージャに運び、Y迷路の底部の端までつまみねじで固定します。
        メモ:動物をロードする前に、ベースボックスのドアが所定の位置にあることを確認してください。
      3. セット、一貫した期間(例えば、60分)のために箱の中に動物を順応します。ベースボックスのドアを取り外し、動物が迷路に自由に入ることができるようにします。
      4. ビデオフィードを使用して動物の活動をリモートで監視します(下記参照)。動物がベースボックスからアームボックスに移動した後、香りが完了すると迷路から動物を取り除きます。
        1. 動物が箱の中にある場合は、取り外し可能なドアを挿入して固定し、箱を取り外し、動物を囲いに戻します。
        2. 動物が迷路に戻ってきた場合は、動物が箱に戻ってくるのが見えるまで迷路の近くで待ってから、箱を取り外します。
          注:スクワメートは防御的に排便し、テストされている香りを汚染するアラームキューを作成するので、動物を驚かないようにしてください。
        3. 動物が箱に戻らない場合は、ゆっくりと迷路に近づき、視覚的な手がかりを使用して、箱の中に動物を励まし、ボックスを削除します。
      5. ベースボックス(1.5.5)を清掃して乾燥させます。
      6. 排便が発生した場合は、ペーパータオルでできるだけ多くを収集し、吸収しますが、広がりを防ぐために拭き取らないでください。
      7. 迷路を部分的に分解して内部のパーティションを取り除き、再組み立てします。パーティションをクリーニングします (1.5.5)。
      8. フォーカル動物を実行するためのプロトコルについては、セクション1.4に進みます。
    4. ダブル香りのトライアル
      注:これらの試験の目的は、Y迷路で同時に2つの異なる香りの軌跡を提示し、両方がベースからそれぞれのランダムに選択された腕を通って走り出す。
      1. アクリルトップを取り付ける前に、最初の香りとブロックされたアームと反対のベースの半分のために選択されていない腕をブロックするためにパーティションを固定します。
      2. 1 つの香りの試し(1.3.3 から 1.3.3.8)の場合は、上記の手順に従ってください。アクリルドアが取り外されると(1.3.3.3)、ブロックされたままの側の開口部にハーフサイズのドアを挿入して、香りの動物が迷路の開いた部分でのみ移動できるようにします。
      3. 迷路を部分的に分解し、パーティションを削除し、クリーン(1.5.5)します。清潔なタオルで乾かします。
      4. パーティションを再インストールしますが、それらを反転して、迷路の現在の香りの領域をブロックします。アクリルの上を再インストールします。
      5. 2番目の香り敷設動物について、ステップ1.3.4.2を繰り返します。
      6. 迷路を部分的に分解し、パーティションを削除します。迷路を組み立て直します。
      7. フォーカル動物を実行するためのプロトコルについては、セクション1.4に進みます。
  4. 日単位の時間の間に焦点動物を実行するためのプロトコル
    1. その試験のために計画されている焦点動物とのステップ1.3.3.2から1.3.3.3に従ってください。
    2. ビデオを使用して動物の活動をリモートで監視します。探索時間の設定されたウィンドウを観察する場合は、動物がベースボックスから完全に出現したときにタイマーを開始します。
    3. 試験が完了したら、動物を取り除きます (1.3.3.4).
  5. 内訳とクリーンアップ
    1. 迷路から残りのボックスを取り外し、すべてのボックスを分解します。分解と清掃を通して新鮮なニトリル手袋を着用してください。
    2. アクリルトップピースを取り外し、傷や割れを避けるためにクリーニングのための安全な場所に置きます。削除時に傷を付けないようにしてください(ビデオ監視動作の視野をクリアする必要があります)。迷路の側面を分解し、クリーニングのためにそれらを脇に置きます。
      注: Y 迷路マテリアルを常にシェーディングして、傷や UV 劣化を最小限に抑えます。
    3. 底部の汚染を避けるために、紙(およびプラスチック)を一貫した動きで取り外し、廃棄します。
    4. 無臭の実験室グレードの石鹸と柔らかいスクラブブラシやマイクロファイバーの布を使用して、Y迷路片のすべての表面とすべてのボックスをきれいにします。同じ石鹸でアクリルトップピースと取り外し可能なドアを清掃しますが、柔らかいスポンジやマイクロファイバーの布で傷を防ぎます。
      注:スクアメート爬虫類における既知の化学信号は、脂質溶性化合物であり、洗剤で洗浄することは、地上脊椎動物研究11、12、21におけるポリマーベースの装置から脂質キューやその他の香りを洗浄するための標準プロトコルである。
      メモ: 現場のアプリケーションでは、衛生プロトコルが必要な場合があります。その場合は、迷路のすべての内側の表面(床、壁、仕切り、アクリルピース、ボックス)に適切な衛生溶液をスプレーし、10分間座らせてからマイクロファイバーの布で拭きます。
    5. 清潔で濡れたマイクロファイバータオルで表面を拭いて洗浄した部品を水で洗い流し、すすがりの前に石鹸残渣を乾燥させないようにします。迷路に水を注ぐな。
    6. 新鮮なマイクロファイバーの布で空気乾燥したり、軽くたたいたりします。
    7. 乾いたら、すぐに別のトライアルを実行する場合は迷路のピースを組み立て直します。

2.米国地質調査所(USGS)試験のためのY迷路のセットアップとクレプス的なタイミングプロトコルは、国立公園局と共同で:野生捕捉ビルマのニシキヘビの比較的遠隔試験

注:Y迷路と封じ込め構造のすべてのコンポーネントのプランは、補足ファイル2に記載されています。

  1. USDA 設計の変更に関する Y 迷路コンポーネントと根拠
    注:記載されているY迷路は、潜在的な研究種を拡大するために、孤立した条件で大幅に変更されました。さまざまな種に対応するために縦の深さを増やし、屋外の耐久性と清掃を改善するために異なる材料と工法を使用しました。完成した迷路の視覚化については、図 1を参照してください。コンストラクションとアセンブリの具体的な指示については、補足ファイル 2を参照してください。
    1. 白いポリプロピレンからY迷路成分をカットし、永久に固定されるすべてのカットピース(例えば、迷路底壁と側壁)を熱溶接します。
      1. デッキねじで固定された合板シートで作られたY迷路(244cm L x 122 cm W)の底を固定し、迷路の外壁の底に沿ってリベットされたアルミニウム山かっこを介して取り付けます。
      2. Y迷路のベースが120cm L x 42cm W x 23 cm Hであり、各外腕側壁が120 cm Lであり、内側の腕側壁が108 cm Lであることを確認してください(特定の方向については、補足ファイル2を参照してください)。
      3. 30 cm ごとにネジで側壁に固定されたアルミニウム角度を使用してアクリルトップを所定の位置にスロットします(特定の方向については、補足ファイル2を参照してください)。
        注: Y迷路側壁の上端に一定の間隔で配置されたネジは、試験からビデオを分析する際に静的な視覚的なマーカーとしても機能し、スケールを提供します。
      4. Y迷路(ベース、アーム)の各開口部には、ベースプレートが中央開口部(34cm W x 16 cm H;具体的な方向)をフレームするように、ボックスに取り付ける側壁の端に追加のベースプレート(42 cm W x 30 cm H)があることを確認してください。
      5. パーティションピースを使用して、香りの動物のアクセスを制限します(特定の方向については、補足ファイル2を参照してください)。ファスナーテープを使用して、ブロッキングプレート(46cm W x 22 cm H)を固定します。即興で簡単に清掃された重量(例えば、水で満たされたプラスチック水差し;2.3.6;;図 1)。
      6. アクリル部分が迷路の上部(0.6 cmの厚さ、明確)を構成していることを確認してください。具体的な手順については、補足ファイル 2を参照してください。
    2. Y迷路試験で動物の輸送と収集を可能にするために容易に固定されているスライドドアと蓋を取り付けた不透明な箱を使用してください(図1)。
      1. 下部にドレインホールを備えたボックス(21.6 cm L x 27.9 cm W)を変更し、小さなネジとナットで蓋をフィットさせ、入力/出力(ドア)に単一の開口部を提供します。具体的な手順については、補足ファイル 2を参照してください。
      2. ボルトとウィングナットまたはロックを使用して、ボックスのフェイスプレートを Y 迷路のフェイスプレートに取り付けることで、ボックスを Y 迷路の端に固定します。
        注:ボックスは、所定の位置にアクリルの上の部分を固定します。
  2. クレプシュカル ビデオ取得のカメラ設定: カメラの視野のスナップショットについては、図 1を参照してください。
    1. カメラ仕様: プロジェクトカメラが、眼球および夜行性の研究種に対応するために、可変光と温度条件下で連続的なビデオを録画できることを確認します。
      1. プロジェクトカメラをエンクロージャの天井のクロスビームに取り付けた状態で、Y迷路全体をカメラの視野内で捉えることができるようにします。テントの高さを上げたり下げたりして視野を増減します(プロジェクトカメラは高さ〜3m)。アクリル上部のカメラから放出される赤外線の反射が、夜間の映像のフレームの重要な部分を隠さないようにします。
    2. 電源仕様:各プロジェクトカメラに、夜間撮影(約20時間)の連続ビデオを録画するための十分な電源が必要であることを確認します。
      メモ:AC電源が利用できない場合、深サイクル密閉鉛蓄電池12ボルト電池(例えば、12-V 20-Ahゲル電池2本を並列に配線)を使用して電源を供給できます。
    3. 記録仕様: ファイルストレージの音量を最小限に抑えるには、Y迷路で舌フリックをカウントするのに十分な品質のビデオを記録します。
      注: 高解像度のフッテージには大容量のストレージが必要であり、解像度を下げることは、ファイルサイズを管理しやすくする非常に効果的な方法です。
      1. フッテージのフレームレート(フレーム/秒、FPS)を、舌フリックの検出に必要な最小数に制限します(例えば、最大フレームレート25 FPSの800 x 450の記録解像度は、トライアルごとに約.120 GBの映像になります)。
    4. ビデオの取得と処理のためのプロトコル
      1. 各香りイベント(2.3.10)の開始時にカメラをアームし、フォーカルイベントの最後まで連続して記録させます(約20時間)。
      2. 各トライアルが完了したら、カメラの電源を切り、SDカード(2.4.4)を取り出します。フッテージを目的の保管場所に転送します。
      3. SDカードは録画デバイスに5分間のクリップで映像を記録するよう頻繁に強制するので、処理を容易にするためにムービー処理ソフトウェアを使用してこれらのクリップを組み合わせます。
      4. 可変再生速度とカスタマイズ可能な前方ジャンプ間隔を可能にするメディアファイルレビュープログラムを使用して映像をレビューします。
        注: ビデオ処理中に微細な解像度が必要ない場合、レビュー時間が約 20 時間から最大 1 時間に短縮されます。
  3. 香りを敷設動物を実行するためのプロトコル
    注: このセクションの手順は、野生の爬虫類の順応時間が長くなるため、完了までに約 1.5 日かかります。
    1. セクション1.3.1のバイアスの前書きを参照して、迷路に偏りが見つからないことを確認します。
    2. 表面を扱う際はニトリル手袋を着用するか、動物を研究して香りの汚染を避けてください。
    3. 順応のための試験の少なくとも24時間前に、その箱に香りや焦点動物を置きます。
      注: ストレス効果を最小限に抑えるために、ボックスは、清掃やその他の操作によって妨げられることなく、迷路にできるだけ近いシェーディングされた領域に残されます。テストされたすべての動物(香り、焦点)がこのように順応していることを確認してください。
    4. 新しいきれいな香りの紙をきれいな表面に準備し、Yの接合部で重なるのに十分な長さの(2つの腕紙= 121.9 cm;1ベースペーパー= 152.4cm)底面全体を覆います。
    5. 箱の近くの紙の端を固定し、Y接合部をマスキングテープで固定します。
    6. 長いパーティションでベースアーム(左側または右側)の半分をブロックするためにパーティションをインストールし、短いパーティションで反対側の腕への入り口をブロックします。障壁を取り付ける時は、香りの紙を裂かないでください。大きな香りの動物の場合、バリア障害を防ぐためのブレースとしてバリアの後ろに簡単に取り外して清掃できる重い物体を貼り付けます(2.1.1.5)。
      注:香りのトレイルは、常にベースの片側から始まり、焦点動物の選択が明確になるように反対側の腕に渡る必要があります。
    7. アクリルトップを一度に1つのセクションずつ所定の位置にスライドさせ、角度が完全に合致していることを確認します。隙間をカバーするために透明なプラスチックテープを使用してください。
    8. ウイングナットや南京錠を使用してフェイスプレートを接続して、両方のアームボックスを迷路に取り付け、ドアがロックされていることを確認します。
    9. 日没の2時間前に、ベースボックス(香りの動物を含む)を取り付け、動物へのストレスを最小限に抑えるために、すべての動きがゆっくりと安定していることを確認します。
    10. カメラをアームし、両方のバレルボルトロックを使用してドアを所定の位置にラッチして、ベースボックスにドアを開けます。動物の視界から外れたまま、エリアを終了します。
    11. 3時間後(日没後1時間)、迷路内の動物の位置だけでなく、周囲の条件に注意してください。動物が輸送中の場合は、箱に入るまで待ちます。
      1. 動物がいずれかの箱に入っている場合は、箱のドアを閉めて固定し、箱を取り外してから、箱の中に防御的な香りの堆積を防ぐために、動物を取り除きます。
      2. 動物が迷路の体内で動かない場合は、視覚的な手がかり(例えば、長い棒や手を振る)を使用して、箱の中で動きを刺激します。動物が残っている場合は、アクリルトップを取り外すことができるようにアームボックスを取り外し、動物を手動で収集してバッグに移します。
        注:適切な個人用保護具(PPE)は、大型動物(例えば、穿刺耐性手袋、眼保護)を扱うときに常に着用されるべきである。
    12. 部分的に内部のパーティションの除去を可能にするために迷路を分解し(香りの紙を邪魔することを避ける)、その後、組み立て直します。排便が発生した場合は、できるだけきれいなマイクロファイバーの布で収集し、吸収しますが、領域を洗浄しないでください。
    13. フォーカル動物を実行するためのプロトコルについては、セクション2.4に進みます。
  4. クレプキュラー焦点動物を動かするためのプロトコル
    注: このセクションの手順は、完了するまでに約 2 日を要し、セクション 2.3 の開始時刻と同じ時間に開始する必要があります。
    1. 迷路で実行される前に、少なくとも24時間ボックス内のスケジュールされた焦点動物を順応します。
      1. 焦点動物の順応の最後の時間の間に、次のステップ(2.3.9)に移動する前に、香り敷設動物を実行します。
        注:香りの劣化を減らすために迷路に焦点動物の導入の時間にできるだけ近い香り敷設ステップ時間。
    2. Y迷路の底部にウィングナットや南京錠を使用して、ベースボックス(焦点動物を含む)を取り付けます。焦点動物へのストレスを最小限に抑えるために箱を保持/輸送するとき、ゆっくりと安定した動きを使用してください。
      1. 両方のアームボックスドアがラッチで開かれていることを確認します。バレルボルトを使用してベースボックスのドアを開けてラッチすることで、フォーカルトライアルを開始します。動物の視界から外れたまま、エリアを出ます。
        注:野生の夜行性爬虫類の試験では、焦点動物は迷路を探索するために一晩与えられます。
    3. 日の出から4時間後、迷路に戻り、セクション2.3.11.1に従って焦点動物を取り除きます。
    4. カメラのSDカードを収集し、必要に応じてバッテリーを充電します。迷路から使用済み紙を捨てて、クリーニングに進みます(セクション1.5)。

Figure 1
図 1.USGS Y迷路のレイアウト。 左側の図は、投影図に、投影図を使用して、投影図を使用して、Y迷路のコンポーネントを、遠近法の縮尺バーを使用して示しています。右側のビデオ カメラのスナップショットは、行動記録の視野を示しています。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Representative Results

多数の変数を Y 迷路試験から記録またはスコア付けできます。研究の設計は、主に望ましい結果/成果物によって駆動されるべきです。また、研究が繰り返し測定(例えば、同じ焦点動物の繰り返し使用)に依存している場合、適切な試験および分析構造が必要である。例えば、USDA試験は焦点テグの繰り返し試験に依存していたので、実験的試験の計画は完全に無作為化された。

選択データ: Y迷路を使用した研究の大半は、単純なバイナリ選択データを報告し、二項検定などのパラメトリック統計で結果を分析します。ここでの主な制限はサンプルサイズで、統計的分析の力に直接影響します。図 2では、統計的に有意な結果を得るために、特定の二項検定で発生する必要がある「成功」の数を示す、調査サンプルサイズごとの一連の統計的閾値が示されています。これらは数学的に派生しているため、Y迷路検定に一般化できます。二項統計は、オンラインフリーウェアを使用して生成するのは簡単です.確率の計算には、事前根拠が与えられた場合は片尾分布が使用されます。それ以外の場合は、両側分布を使用する必要があります。

腕の選択は、多くの場合、焦点動物が与えられた腕の中で移動する距離によって決定されます。このしきい値を設定する最も簡単な方法は、迷路内にランドマークを設定する方法です。ほとんどのY迷路研究では、ランドマークはアームボックスの入り口です。爬虫類は頭部の前部の化学感知器官とすべての化学感覚評価を行うので、頭部は試験中の焦点である。例えば、ビルマのニシキヘビは迷路自体全体よりも長いことが多いため、選択は最良であり、最も効率的にはランドマークを過ぎた頭の動きによって決定されます。選択を決定するための他のオプションは、腕に費やされた時間と箱に焦点動物の完全な動きです。故障は、特定の期間内に選択をしない焦点動物によって決定されます。

Y迷路の選択データから、より細かい解像度解析を導き出すことができます。例えば、研究者は選択ペナルティスコア16を生成することができます。ここでは、研究者は、焦点動物が迷路の非標的腕を探索した度合いを追跡する必要があります。非標的は、研究者が、試験された代替仮説に基づいて焦点動物が選択しない先験を決定する腕として定義することができる。ターゲットでないアームの最も単純な例は、片方の腕にターゲットの香りが含まれている場合の無香料アームです。より複雑な例は、同じソースからの2つの香りの間の選択であろうが、異なる濃度7で提示される。実験計画がマルチレベルである場合や、選択ペナルティと同様にデータがバイナリからインクリメンタルに変われるときは、分散の反復測定分析(ANOVA)や連続または比例データセットで使用されるその他の方法など、適切な統計的アプローチを使用する必要があります。

動作:焦点動物が観察される実験の期間を通して、様々な個々の行動を定量化することができる。この変数の数は、16の既知の事に応じて事前に決定されるか、データ14,15のサブセットに対する予備的な観測に続く事後に決定することができます。研究目標とその解像度の程度は、迷路内で行うべき行動評価を決定します(すなわち、多くの研究では、選択データのみが17)挙動は迷路、セクション、または特定の期間内に評価することができます。例えば、ベースや腕の接合部でのみ見られる行動は、優先順位が8.ビデオ録画は、ビデオの解像度とその長さ (データ 記憶域の制約を課す要因) を実験を開始する前に考慮する必要がありますが、動作スコアリングを容易にします。

時間変数: 行動変数と同様に、動物のパフォーマンスの多くの時間的側面は、Y迷路試験中に定量化することができます。たとえば、研究者は遅延時間を時間を設定できます (例えば、ボックス8から発生する待機時間)。ほとんどの時間変数は、合計トレーリング時間や各腕に費やされた時間など、迷路の探索に関連付けられています。これらの変数は通常、多次元分散分析などの多要素分析で分析されます。

オブザーバーバイアス:動物の行動を含むあらゆる研究では、観察者の偏りはデータ収集18に大きく影響する。したがって、観察者は検査中の治療に目がくらむべきである。これを行う最も簡単な方法は、ビデオファイルを数値でコード化し、それらをオブザーバーに割り当てる前にランダムに(乱数ジェネレータなど)それらをソートすることです。ライブデータ収集が唯一の選択肢である場合、観察者バイアスの制御は不可能に難しくなります。フィールド設定では、これには治療に盲目のオブザーバーと裁判を設定するコーディネーターの2人の協力者が必要です。広範なレビューは、実験者バイアスが行動および生態学的研究におけるデータ収集と解釈に及ぼす影響をまとめた18,19。

Figure 2
図 2.Y迷路結果からの二項検定のサンプルサイズとP値。 各サンプルサイズは、Y(ターゲットアーム)の片方のアームで香りがテストされ、もう一方がコントロール(非ターゲット)である可能性がある一連の試行回数を表します。各バーの上の上の数字は、ターゲットアームの選択の数の片裾P値であり、底部は2つの尾です。トップバー内の数値は、従来も統計的に有意な非ターゲット選択の最大数を表します(P < 0.05)。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

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Discussion

Y迷路は爬虫類の化学生態学を調査するための非常に強力なツールですが、その限られた設計は、調査の他の道を妨げる可能性があります。しかし、他のオプションの多様性は、11、12、20、21、22を使用できます。例えば、舌フリックアッセイは、制御臭23、24、25、26に対して一連の化学的刺激に示された行動を実行し、同時に評価することを可能にするのが簡単である。オープンフィールドテストは、焦点動物が化学的手掛かりの源に遭遇するまで自由に囲いを探索し、その行動反応が27、28にスコア付けされるもう一つの選択肢です。これらのアプローチの組み合わせは、refugia29と共に人工臭と自然臭の組み合わせを提示するなど、様々な文脈における爬虫類の差別的能力を評価することができる。Y迷路はまた、単独で、または基質を媒介するキュー16、30と組み合わせて動物を空中化学キューに曝すために改変することができ、かつ、アーカイブされたビデオデータが利用可能であれば、ポストホック推論を使用してデータ収集を再設計することができる31。バイオアッセイは、特に特定の手がかり源が評価されている場合(例えば、化学的手掛け21)のデータ収集を簡素化し、相反する刺激を最小限に抑えるように設計されるべきである。

動物行動の研究者は、新しい人工環境(例えば、特徴のない風景を持つ囲まれた迷路)における焦点動物の反応を観察し、定量化することが多く、特定の動物が自然、探索的行動対回避、攪拌、または同様の苦痛を与える行動を示しているかどうかを評価するために注意する必要があります。実験装置における苦しんでいる動物行動は、主に新知恐怖症に起因する:新規性の恐怖32.例としては、焦点動物が関節または装置の端に押し付けて出口を達成するエスケープ挙動があります。もう一つの例は、焦点動物が迷路に入るのを嫌がることを示す恥ずかしがり屋であり、その程度は迷路の入り口の待ち時間によって定量化することができる。装置(再)設計は苦痛のこれらの交感の影響を避けるために焦点動物の関与を促進することができる。最も一般的なアプローチは、試験開始前に環境の新しさを除去する装置への焦点動物の導入を繰り返し行い、現代の統計モデル(例えば、一般化された線形混合モデル)は、試験動物を複数の試験で使用することを可能にする。行動検査における生態学的考察に関連する重要な脇には、減少した新生物恐怖症が侵略的な種33の成功に関連している。したがって、問題の種の先入りの知識に応じて、新恐怖症は実験設計の検討事項として可変的な重要性を有し得る。

ビデオから行動データを取得すると、実験タイムラインの主要なボトルネックとなる複数の制約が課されます。たとえば、特定の試行の長さによって、データ抽出時間が指数関数的に増加する可能性があります。1 つの回避策は、しきい値が満たされるまで (たとえば、合計アクティブ時間) の動作を分析することです。しきい値は、特定のトライアルで使用可能な最長のビデオに基づいて設定できます。あるいは、機械ベースの観測(例えば、人工知能)を開発することができますが、これは時間とリソースを消費し、品質管理に必要なかなりの労力を要します。もう 1 つの問題はデータ管理です: ビデオは、動作のスコア付けと評価を可能にするのに十分な品質を持つ必要があり、データ ストレージの制約が生じます。クラウド ストレージにアクセスできるようになりましたが、特にリモート フィールドの場所でデータの取得が行われる場合は、アップロード/ダウンロードの速度が問題となることが多くなります。行動観察の完全性に影響を与える記録ツールの限界には、追加の課題が現れます。動物の行動の焦点を明確に観察することは常に必要ですが、視界は、多くの場合、制御不能な要因(例えば、水分、昆虫、風の動き)によって妨げられます。また、記録が単一の視点(例えば、鳥瞰図)から来る場合、垂直面で起こる行動(例えば、頭が14を上げる)を評価することは困難である。解決策は、試行ごとに複数のカメラアングルを提供することです。最後に、時刻は行動記録に大きく影響します。夜間の行動分析では、Y迷路表面の閉塞的なまぶしさや、カメラフィードを中断する可能性のある昆虫の魅力を避けるために、夜間モードと最小限の光投影を備えたカメラが必要です。上記を考慮すると、研究部位または種生物学の予知は、どの制約がどの頻度で起こる可能性が高いかを知らせ、したがって望ましいサンプルサイズを知らせることができる。

行動は生理学と密接に結合しており、さまざまな種における行動内分泌学の評価のためのY迷路の有用性が実証されている。しかし、この論文では、対象種、研究課題、資源に応じて、これらの実験の実施に多少のばらつきが見られます。したがって、各試験セットアップの材料と寸法の選択は、その後の研究拡大の可能性について慎重に検討する必要があります。セクション2では、テグを用いた将来のより複雑な行動試験に対応するために組み込まれたセクション1で概説された資料に対する変更について説明する。エバーグレーズ迷路の垂直深さの増加は、野生捕捉テグの化学生態学に関する新しい質問に、プロジェクトの設計とセットアップを過度に長引かせることなく答えることを可能にし、この実験装置の翻訳可能性をさらに実証する。

比較的リモート設定 (セクション 2 を参照) で上記の手法を採用する場合、考慮する必要がある制限要因がいくつかあり、プロジェクト計画が最も重要です。所定の治療実験に必要な統計的パワーと標的種の生物学的タイミング(例えば、季節性)に応じて、必要な資源および労働力が影響を受ける。また、焦点動物の単一または繰り返し使用が望まれる場合は、潜在的なストレッサーを減らすことに注意が必要である。これらの要因のそれぞれは、プロジェクトのタイムラインを拡張するか、労力、スペース、および材料を増やす必要があります。例えば、セクション2は、野生捕獲された雄の別のグループに続く焦点動物としての野生捕獲された雄のニシキヘビの使用を提示し、そのすべてがストレス効果を最小限に抑えるために箱を保持する静かな順応時間の約24時間を必要とする。これらの順応期間は試験期間を2日以上に延長したが、捕虜と取り扱いによるストレスは野生動物の行動に影響を及ぼし、クリーンなデータセット34,35を生成するために最小限に抑える必要がある。

要約すると、Y迷路は、広く変動する条件下で多様な野生生物の化学生態学を調査するために使用できる強力で適応可能なツールです。適切な質問を選択し、所定の課税条件に対する実験セットアップを適切に設計するには、慎重に検討する必要があります。研究者やマネージャーは、動物の化学感覚生物学をよりよく理解するためにY迷路を使用することで大きな恩恵を受けることができます。

Disclosures

何一つ

Acknowledgments

最初のY迷路の開発は、ジェームズ・マディソン大学(JMU)とUSDA動物植物健康検査サービスとの協力協定(15-7412-1155-CA、16-7412-1269-CA、および17-7412-1318-CA)によって支えられた。エバーグレーズ国立公園のY迷路の開発は、JMUと国立公園局との間の協力協定(P18AC00760)によって資金提供されました。私たちは、エバーグレーズNPでこのプロジェクトを促進し、許可と資金の支援のためにT.ディーンとB.フォークに感謝します。USGS Y迷路の建設に協力してくれたW.ケローに感謝します。C.ロマーゴサ、L.ボーンウェル、R.リードは管理および後方支援を提供しました。私たちは、有益なフィードバックを提供した2人の匿名のレビュー担当者に感謝します。エバーグレーズの研究と現物支援のための資金は、米国地質調査所(USGS)グレーターエバーグレーズ優先生態系科学プログラム、国立公園局(P18PG00352)、USGS侵略種プログラムによって提供されました。貿易、会社、または製品名の使用は記述目的のものであり、米国政府による承認を意味するものではありません。この出版物の調査結果と結論は、米国農務省によって正式に普及しておらず、USDAの決定または政策を表すものと解釈されるべきではない。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1" Steel zinc-plated corner brace Everbilt, The Home Depot 13619 See Supplemental File 1, Step 2.1 "90 degree 2.5 cm steel corner brace"
121.92cm W x 304.8cm  L x 1.27cm H white polypropylene Extended Range High-Heat UHMW Sheet TIVAR UHMNV SH See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1. "white polpropylene")
182.88 cm L x 81.28 cm W x 0.64 cm Thick Clear Acrylic Sheet Plexiglass 32032550912090 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1.6. "Acrylic pieces")
2.54 cm W x 2.54 cm H x 243.84 cm L Mill-Finished Aluminum Solid Angle Steelworks 11354 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1.1. "aluminum angle bracket")
4.5 kg spool of 5 mm Round Polypropylene Welding Rods HotAirTools AS-PP5N10 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1. "heat weld")
5 mm Plain Aluminum Rivets Arrow RLA3/16IP See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1.1. "rivet")
Aluminum angle, 1.9 cm Everbilt, The Home Depot 802527 See Supplemental File 1, Step 1.2 "aluminum angle (1.9 cm x 1.9 cm x 0.16 cm thick)"
Aluminum angle, 2.5 cm Everbilt, The Home Depot 800057 See Supplemental File 1, Steps 1.2 and 2.2.2 "aluminum angle (2.5 cm x 2.5 cm x 0.16 cm thick)"
Aluminum angle, 3.2 cm Everbilt, The Home Depot 800037 See Supplemental File 1, Step 1.2 "aluminum angle (3.2 cm x 3.2 cm x 0.16 cm thick)"
Aluminum flat bar 1" x 1/8" thick Everbilt, The Home Depot 801927 See Supplemental File 1, Step 3.2.1 "aluminum strap"
Avigilon 2.0 MP camera Avigilon, a Motorola Solutions Company 2.0C-H4SL-BO1-IR See "1.5 Camera set-up and video acquisition" (step 1.5.1 "Avigilon 2.0 MP")
Avigilon NVR Avigilon, a Motorola Solutions Company HD-NVR3-VAL-6TB-NA See "1.5 Camera set-up and video acquisition" (step 1.5.3 "NVR")
Clear acrylic sheet (5.6 mm thick) United States Plastic Corp. 44363 See Supplemental File 1, Step 1.3 "clear acrylic sheet" and step 3.2.1 "clear acrylic door"
Fillet Weld Nozzle 3/16" x 15/32" / 4.5 x 12 mm TRIAC 107.139 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1. "heat weld")
Hanging File Folder Box Sterilite 18689004 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.2.1. "Boxes")
HardiePanel HZ10 James Hardie Building Products 9000525 See Supplemental File 1, Step 1.1 "fiber cement siding"
Heat Welding Gun TRIAC 141.227 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.1. "heat weld")
Kraft Butcher Paper Roll, 24" Bryco Goods 24 inch x 175 FT See "1.2 Protocol for running scent-laying tegus" (step 1.2.1.2 "butcher paper")
Kraft Butcher Paper Roll, 46 cm wide Bryco Goods BGKW2100 See "2.3. Protocol for running scent-laying pythons" (step 2.3.4. "scenting paper")
Micro-90 Concentrated Cleaning Solution  International Products Corporation M-9050-12 See "1.4 Breakdown and clean-up" (step 1.4.4 "laboratory-grade soap")
MKV ToolNix - Matroska tools for linux/Unix and Windows Moritz Bunkus v.48.0.0 See "2.2. Camera setup and video acquisition" (step 2.2.4.2. "movie processing software")
Network Camera Axis Communications M3104-LVE See "2.2. Camera setup and video acquisition" (step 2.2.1. "Project camera")
Palight ProjectPVC 1/4" Palram 159841 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.2.3. "faceplate")
Palight ProjectPVC 1/8" Palram 156249 See "2.1. Y-maze components and rationale for changes to USDA design " (step 2.1.2.1. "door")
Privacy windscreen (green) MacGregor Size to fit See Supplemental File 1, Step 4.2 "green heavy duty shade cloth"
Protective Glove, Full-Finger ArmOR Hand HS1010-RGXL See "2.3. Protocol for running scent-laying pythons" (step 2.3.11.2. NOTE: "puncture-resistant glove")
REScue Disinfectant Virox Animal Health 44176 See "1.5. Breakdown and clean-up." (step 1.5.4. NOTE "sanitation solution")
Reversable PVC trim, 1/2" x 24" UFP Industries, Veranda products H120XWS17 See Supplemental File 1, Step 2.1 "PVC board partition", and step 3.2.1 "thinner PVC trim boards"
S4S / Veranda HP TRIM UFP Industries, Veranda products H190OWS4 See Supplemental File 1, Steps 1.2, 2.2.2, and 2.2.3 "PVC board"
S4S / Veranda HP TRIM (1" x 8" Nominal) UFP Industries, Veranda products 827000005 See Supplemental File 1, Steps 3.2.1 "PVC trim board"
ScotchBlue 24 in. Pre-taped Painter’s Plastic 3M PTD2093EL-24-S See "1.2 Protocol for running scent-laying tegus" (step 1.2.1.3 "plastic sheeting")
Sterilite 114 L tote box Sterilite Company 1919, Steel See Supplemental File 1, Step 3.2 "arm box"
Sterilite 189 L tote box Sterilite Company 1849, Titanium See Supplemental File 1, Step 3.2 "Base box"
Super Max Canopy ShelterLogic 25773 See Supplemental File 1, Step 4.3 "white canopy"
VLC Media Player  VideoLAN v.3.0.11 See "2.2. Camera setup and video acquisition" (step 2.2.4.3. "media file reviewing program")
White Pavilion Tent King Canopy BJ2PC See Supplimental File 2 "3. Enclosure materials and consideratons" (step 3. "pavilion tent")

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References

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行動 問題 170 動物行動 民族学 化学生態学 侵略的な種 バイオアッセイ スクワメート トカゲ ヘビ テグ ビルマのニシキヘビ エバーグレーズ

Erratum

Formal Correction: Erratum: Using Enclosed Y-Mazes to Assess Chemosensory Behavior in Reptiles
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Amy A. Yackel Adams

囲まれたY迷路を使用して爬虫類の化学感覚挙動を評価する
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Parker, M. R., Currylow, A. F.,… More

Parker, M. R., Currylow, A. F., Tillman, E. A., Robinson, C. J., Josimovich, J. M., Bukovich, I. M. G., Nazarian, L. A., Nafus, M. G., Kluever, B. M., Adams, A. A. Y. Using Enclosed Y-Mazes to Assess Chemosensory Behavior in Reptiles. J. Vis. Exp. (170), e61858, doi:10.3791/61858 (2021).

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