Högupplöst ultraljud kan hjälpa till att effektivisera experiment som kräver tidsbestämda gravida möss genom att bestämma graviditetstillstånd, graviditetsålder och graviditetsförluster. Presenteras här är ett protokoll för att illustrera metoder för att bedöma mus graviditeter samt potentiella fallgropar (bild artefakter) som kan efterlikna graviditet.
Musen är däggdjursdjurmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer. Utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter. Oftast paras möss över natten, och närvaron av en vaginal plugg bestäms; Det positiva prediktiva värdet av denna teknik är dock suboptimalt, och man måste vänta för att veta om musen verkligen är gravid. Högupplöst ultraljud biomikroskopi är ett effektivt och effektivt verktyg för avbildning: 1) Om en mus är gravid; 2) Vilket graviditetsstadium musen har nått; och 3) Om det finns intrauterin förlust. Förutom embryon och foster måste prövaren också känna igen vanliga artefakter i bukhålan för att inte missta dessa för en gravid livmoder. Den här artikeln innehåller ett protokoll för avbildning tillsammans med belysande exempel.
Musen är den föredragna däggdjursmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer1,2,3,4. Forskning inom utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter5,6,7,8. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter, särskilt när utredare studerar effekterna av en genmutation på utvecklingen. Vanligtvis parar utredare heterozygous möss över natten, letar efter en vaginal plugg tidigt nästa morgon och hoppas att en graviditet följer9. Att bestämma intrauterin förlust börjar vanligtvis med att kontrollera en nyfödd kull för mendelian förhållanden av genotyper, sedan arbeta bakåt genom att offra gravida möss i olika graviditetsstadier och återställa embryona. Utredare kan bestämma viktökning som ett mått på en positiv graviditet10,11; Men särskilt med genetiskt konstruerade möss kan kullarna vara mycket små och därefter resorbed när det finns intrauterin förlust på grund av vilken viktökningen kanske inte är uppenbar (särskilt tidigt i graviditeten, ~ E6.5-8.5). En mus kan verka falskt gravid på grund av till exempel en godartad buktumör. I grund och botten fungerar man “blind”.
Högupplöst ultraljud biomicroscopy möjliggör direkt visualisering av gravid livmodern och utveckla mus embryon12,13,14,15,16. Även om vi ursprungligen hade utvecklat metoder för att bedöma embryonal mus kardiovaskulär fysiologi16,17, kände vi igen nyttan av denna bildframställning modalitet för att effektivisera vår mus avel. Specifikt behövde vi inte längre vänta för att “se” om en mus var gravid, baserat på antingen den uppenbara viktökningen eller leveransen av en kull; vi kunde bestämma gravid tillstånd och re-mate möss snabbt om dammen inte var gravid. Dessutom kan intrauterin förlust också lätt avbildas, och en tidslinje över förlust kan bestämmas utan att offra musen (se figur 1 för ett schema). Tid, värdefulla modellmöss och medel kan därmed sparas.
Det viktigaste första steget i avbildningen är att identifiera slidan och sedan bestämma bifurcation av livmoderhornet till vänster och höger. Genom att följa varje livmoderhorn är det mindre troligt att bildaren felidentifierar tarmens slingor som livmodern. Dessutom är det viktigt att förstå variationerna i tarmens utseende (med / utan fekal materia) för att skilja dessa från livmodern; ibland kan fekala “bollar” i tarmslingor efterlikna en gravid (gravid) livmoder. Även om andra författare har beskrivit …
The authors have nothing to disclose.
ingen.
Depilatory cream | |||
Ethanol, 70% | |||
Fur clippers | |||
Gauze or KimWipes | |||
Isoflurane | |||
Medical oxygen (optional) | |||
Medical tape | |||
Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
Razor blade (not a safety razor) | |||
Scale (to weigh mouse) | |||
Ultrasound gel |