JoVE Journal > Cancer Research
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Automatic Translation
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Cancer Research

حقن الوريد البابي لسرطان القولون والمستقيم العضوي لدراسة سدى ورم خبيث في الكبد

Published: September 03, 2021
doi:
10.3791/62630
, , , , , , , , , , , , , , , ,
1Adelaide Medical School,University of Adelaide, 2South Australian Health and Medical Research Institute (SAHMRI), 3Department of Pathology,Nagoya University Graduate School of Medicine, 4Division of Molecular Pathology, Center for Neurological Disease and Cancer,Nagoya University Graduate School of Medicine, 5Department of Gastroenterology, Graduate School of Medicine,The University of Tokyo, 6Translational and Clinical Research Institute,Newcastle University, 7International Center for Cell and Gene Therapy,Fujita Health University

Summary

حقن الوريد البابي من سرطان القولون والمستقيم (CRC) العضوية يولد ورم خبيث الكبد الغنية بالسدى. يمثل نموذج الفأر هذا من الانبثاث الكبدي CRC أداة مفيدة لدراسة تفاعلات الورم والسدى وتطوير علاجات جديدة موجهة للسدى مثل العلاجات الجينية المرتبطة بالفيروسات الغدية.

Abstract

يعد الانبثاث الكبدي لسرطان القولون والمستقيم (CRC) سببا رئيسيا للوفاة المرتبطة بالسرطان. تلعب الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) ، وهي مكون رئيسي في البيئة الدقيقة للورم ، دورا حاسما في تطور CRC النقيلي والتنبؤ بسوء تشخيص المريض. ومع ذلك ، هناك نقص في نماذج الفئران المرضية لدراسة الحديث المتبادل بين الخلايا السرطانية النقيلية و CAFs. هنا ، نقدم طريقة للتحقيق في كيفية تنظيم تطور ورم خبيث في الكبد بواسطة مكانة النقيلي وربما يمكن تقييده عن طريق العلاج الموجه بالسدى. ولد حقن الوريد البابي للعضويات CRC تفاعلا ديسموبلاستيكيا ، والذي لخص بأمانة الأنسجة الغنية بالخلايا الليفية لنقائل الكبد البشرية CRC. كان هذا النموذج خاصا بالأنسجة مع وجود عبء ورم أعلى في الكبد عند مقارنته بنموذج الحقن داخل الطحال ، مما يبسط تحليلات بقاء الفئران. عن طريق حقن الأعضاء العضوية للورم المعبر عن اللوسيفيراز ، يمكن مراقبة حركية نمو الورم عن طريق التصوير في الجسم الحي . علاوة على ذلك ، يوفر هذا النموذج قبل السريري منصة مفيدة لتقييم فعالية العلاجات التي تستهدف اللحمة المتوسطة للورم. نحن نصف طرقا لفحص ما إذا كان التسليم بوساطة الفيروس المرتبط بالفيروس الغدي لجين لحمي مثبط للورم إلى خلايا الكبد يمكن أن يعيد تشكيل البيئة الدقيقة للورم ويحسن بقاء الفئران. يتيح هذا النهج تطوير وتقييم استراتيجيات علاجية جديدة لمنع الانبثاث الكبدي ل CRC.

Introduction

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو سبب رئيسي لوفيات السرطان في جميع أنحاء العالم1. يصاب أكثر من نصف مرضى CRC بورم كبدي يحدث من خلال نشر الوريد البابي1. حاليا ، لا توجد علاجات فعالة يمكنها علاج ورم خبيث متقدم في الكبد ، ومعظم المرضى يستسلمون للمرض النقيلي.

يلعب المكان النقيلي أو البيئة الدقيقة للورم دورا رئيسيا في تطعيم ونمو خلايا CRC المنتشرة2. الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) ، وهي عنصر بارز في البيئة الدقيقة للورم ، تعزز أو تقيد تطور السرطان من خلال إفراز عوامل النمو ، وإعادة تشكيل المصفوفة خارج الخلية (ECM) ، وتعديل المناظر الطبيعية المناعية وتكوين الأوعيةالدموية 3،4،5. تمنح CAFs أيضا مقاومة للعلاجات الكيميائية والعلاجات المناعية3. علاوة على ذلك ، تنظم CAFs بدء وتطور ورم خبيث في الكبد CRC وتتنبأ بالتشخيص في المرضى الذين يعانون من CRC3،6،7،8. وبالتالي ، يمكن استغلال العوامل المتعلقة ب CAF لتطوير استراتيجيات علاجية لمنع ورم خبيث في الكبد CRC. ومع ذلك ، فإن عدم وجود نماذج مرضية للفئران لدراسة سدى الورم النقيلي كان عقبة رئيسية أمام تطوير علاجات تستهدف السدى.

حاليا ، تشمل النماذج الحيوانية لدراسة ورم خبيث في الكبد CRC نماذج CRC الأولية التي تطور تلقائيا ورم خبيث كبدي ونماذج زرع الخلايا السرطانية في الكبد. نادرا ما تظهر نماذج الفئران CRC الأولية ، مثل نماذج الفئران المعدلة وراثيا وحقن القولون للخلايا السرطانية ، ورم خبيث في الكبد9،10،11،12. علاوة على ذلك ، حتى لو لوحظ ورم خبيث في الكبد ، فإن هذه النماذج تظهر كمونا طويلا من تحريض الورم الأولي إلى ورم خبيث ، وربما تموت من عبء الورم الأولي12. لتوليد نقائل الكبد CRC بكفاءة ، يتم زرع خلايا CRC المستزرعة في الكبد باستخدام ثلاث طرق حقن: الحقن داخل الطحال ، والحقن المباشر داخل المتني في الكبد ، وحقن الوريد البابي. تنتشر الخلايا السرطانية المحقونة داخل الطحال في الوريد الطحالي ، الوريد البابي ، وفي النهاية إلى الكبد13,14. ومع ذلك ، فإن الحقن داخل الطحال ينتج نسبة أقل من أخذ الورم مقارنة بنماذج الزرع الأخرى15,16. مع الحقن داخل الطحال ، يتم إجراء الاستئصال الجراحي للطحال لتجنب نمو السرطان في الطحال ، والذي يمكن أن يضر بنضج الخلايا المناعية17. علاوة على ذلك ، يمكن أن يؤدي الحقن داخل الطحال أيضا إلى نمو الورم غير المقصود في الطحال وتجويف البطن18 ، مما يعقد تحليلات ورم خبيث الكبد. الحقن المباشر داخل المتني في الكبد يحفز بكفاءة ورم خبيث كبدي16،19،20. ومع ذلك ، فإن هذا النهج لا يلخص تماما خطوة بيولوجية من ورم خبيث في الكبد يحدث بشكل طبيعي من خلال نشر الوريد البابي. باستخدام الحقن المباشر في الكبد ، ودخول الخلايا السرطانية إلى غير البوابة ، ولكن الدورة الدموية الجهازية يمكن أن يؤدي أيضا إلى العديد من النقائل الرئوية الكبيرة16. على الرغم من أن غالبية المرضى الذين يعانون من ورم خبيث في الكبد CRC يظهرون عقيدات ورم متعددة في الكبد21 ، إلا أن الحقن المباشر في فص كبد معين يولد كتلة ورم واحدة 19,20. يسمح حقن الوريد البابي أو حقن الوريد المساريقي ، على الرغم من تحديه تقنيا ، بتوصيل الخلايا السرطانية بكفاءة إلى الكبد بطريقة تلخص أنماط النمو التي شوهدت في المرضى17. يمكن لهذه الاستراتيجية أن تقلل من إمكانية النقائل الثانوية وتمكن من النمو السريع للخلايا السرطانية في الكبد ، مما يبسط تحليلات بقاء الفئران.

تاريخيا ، تم استخدام خطوط خلايا سرطان القولون والمستقيم مثل الفأر MC-38 و HT-29 البشري و SW-620 لتوليد نماذج الفئران من ورم خبيث كبدي22,23. ومع ذلك ، فإن خطوط خلايا سرطان القولون والمستقيم هذه لا تحفز رد فعل اللحمية الديسموبلاستيكية. المحتوى اللحمي المنخفض في الأورام يجعل من الصعب التحقيق في الأدوار البيولوجية للخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان. قدمت التطورات الحديثة في المواد العضوية CRC وزرعها منصات مفيدة لتقييم الأدوار الحيوية للسدى في تطور السرطان24. يولد زرع الكبد من المواد العضوية CRC بيئة دقيقة غنية بالخلايا الليفية للورم وقد قدم رؤى جديدة في الأبحاث اللحمية 6,25. حاليا ، أصبح حقن الوريد البابي أو المساريقي للعضويات نهجا قياسيا ذهبيا لتوليد ورم خبيث في الكبد CRC 6,25,26,27,28. ومع ذلك ، على حد علمنا ، لم تصف أي أوراق سابقة طرقا مفصلة لحقن الوريد البابي لأورام القولون والمستقيم. هنا ، نقدم منهجية لاستخدام حقن الوريد البابي من المواد العضوية CRC لتطوير علاج جديد بوساطة الفيروس الغدي (AAV) بوساطة السدى.

خلايا الكبد هي مكون مهم للبيئة الدقيقة للورم النقيلي في الكبد وتلعب دورا حاسما في تطور السرطان النقيلي29. مستوحاة من نجاح أساليب العلاج الجيني AAV للحث على التعبير عن البروتين في خلايا الكبد في المرضى غير الورمية30,31 ، قمنا بالتحقيق في نهج مماثل ولكن يهدف إلى تعديل البيئة الدقيقة لورم الكبد في CRC25. على هذا النحو ، نصف أيضا هنا حقن الوريد الذيل من AAV8 للحث على التعبير عن البروتينات المضادة للأورام لتعديل البيئة الدقيقة لورم الكبد. يؤدي النمط المصلي AAV8 ، المعين من خلال اختيار بروتين القفيصة الفيروسية أثناء إنتاج الفيروس ، إلى كفاءة نقل عالية خاصة لخلايا الكبد (أي التعبير الجيني المستهدف في البيئة الدقيقة لورم الكبد)32. لقد أظهرنا سابقا أن Islr (عائلة الغلوبولين المناعي التي تحتوي على تكرار غني بالليوسين) هو جين خاص ب CAF يحفز إشارات البروتين المورفوجيني العظمي (BMP) ، ويقلل من نمو الورم CRC ، ويعزز تمايز الخلايا الجذعية المعوية Lgr5 + 25. لقد اختبرنا ما إذا كان الإفراط في التعبير بوساطة AAV8 عن الجين اللحمي المقيد للسرطان ، Islr ، في خلايا الكبد يمكن أن يخفف من تطور ورم خبيث كبدي عن طريق إجراء حقن الوريد البابي للأورام CRC في الفئران المعالجة ب AAV8-Islr.

في هذه الورقة ، نصف أولا إجراء حقن الوريد الذيل ل AAV المدارية الكبدية. بعد ذلك ، نصف طريقة لإعداد الخلايا السرطانية وحقن الوريد البابي في الفئران المعالجة ب AAV. أخيرا ، نقدم طرقا لمراقبة تطور الورم النقيلي لتقييم فعالية العلاجات الموجهة بالسدى.

Protocol

تمت مراجعة جميع الإجراءات الحيوانية في هذه المقالة والموافقة عليها من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان التابعة لمعهد جنوب أستراليا للصحة والبحوث الطبية (رقم الموافقة ، SAM322). 1. حقن الوريد الذيل من الفيروس المرتبط بالغدية ملاحظة: ينبغي التعامل مع الفيروس المرتبط بالأ…

Representative Results

للحث على التعبير المفرط بوساطة AAV عن جين لحمية مقيد للورم ، Islr 4,25,43,44 ، في خلايا الكبد ، قمنا بحقن AAV8 المشفر عن طريق الوريد. تم حقن 1.0 × 1011 جينوم فيروسي (vg) من AAV8-Islr ، أو كعنصر تحكم ، AAV8-mRuby2 ، في وريد ذيل الفأر ا…

Discussion

في هذه الدراسة ، أظهرنا أن حقن الوريد البابي للفئران CRC العضوية يولد بشكل متكرر نقائل الكبد الغنية بالخلايا الليفية التي تحاكي السمات النسيجية للنقائل الكبدية CRC البشرية. علاوة على ذلك ، عندما يقترن هذا النموذج قبل السريري بالعلاجات الموجهة بالسدى مثل العلاج الجيني بوساطة AAV8 ، فإنه يعمل ك…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح من المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية (APP1156391 إلى D.L.W.، S.L.W.) (APP1081852 إلى D.L.W.، APP1140236 إلى S.L.W.، APPP1099283 إلى D.L.W.،)؛ مجلس السرطان SA فاز مشروع السرطان نيابة عن الجهات المانحة وحكومة ولاية جنوب أستراليا من خلال وزارة الصحة (MCF0418 إلى S.L.W., D.L.W.)؛ منحة معونة للبحث العلمي (B) (20H03467 إلى M.T) بتكليف من وزارة التعليم والثقافة والرياضة والعلوم والتكنولوجيا في اليابان ؛ AMED-CREST (الوكالة اليابانية للبحث والتطوير الطبيين ، البحوث الأساسية للعلوم والتكنولوجيا التطورية (19gm0810007h0104 و 19gm1210008s0101 إلى A.E.) ؛ مشروع أبحاث السرطان والتطور العلاجي (P-CREATE) من AMED (19cm0106332h0002 إلى A.E.) ؛ الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم برنامج التحدي في الخارج للباحثين الشباب (إلى H.K.) ، زمالة مؤسسة تاكيدا للعلوم (إلى المملكة المتحدة) ، منحة Greaton الدولية للدكتوراه (إلى H.K.) ، منحة مؤسسة Lions Medical Research Foundation (إلى K.G).

نشكر الدكتور ليزيك ليسوفسكي في مرفق هندسة النواقل والجينوم (VGEF) ، معهد البحوث الطبية للأطفال (CMRI) (نيو ساوث ويلز ، أستراليا) لإنتاج ناقلات AAV المؤتلفة.

Materials

10% Formalin Sigma HT501128
15 mL centrifuge tube Corning 430791
33-gauge needle TSK LDS-33013 For portal vein injection
4-0 vicryl suture ETHICON J494G
40-µm cell strainer Corning 431750
5 mL Syringe BD 302130 Used to apply saline to the intestine after portal vein injection
50 mL centrifuge tube Corning 430829
50 mL syringe TERUMO SS*50LE Luer lock syringe for perfusion fixation
70% Isopropyl alcohol wipe Briemar 5730
Anaesthesia machine Darvall 9356
αSMA antibody DAKO M0851 Clone 1A4. 1/500 dilution for immunohistochemistry
Buprenorphine TROY N/A ilium Temvet Injection, 300 µg/ml Buprenorphine
Cotton buds Johnson & Johnson N/A Johnson's pure cotton bud applicators. Need to be autoclaved before use.
D-luciferin Biosynth L-8220
Electric shaver Sold by multiple suppliers
Forceps Sold by multiple suppliers
Hamilton syringe HAMILTON 81020 For portal vein injection
Heat box (animal warming chamber) Datesand MK3
Heat lamp Sold by multiple suppliers
Hemostatic sponge Pfizer 09-0891-04-015 Gelfoam absorbable gelatin sponge, USP, 12-7 mm
India ink Talens 44727000
Injection syringe and needle BD 326769 For tail vein injection
Islr probe (RNAscope) ACD 450041
Isoflurane Henry Schein 988-3244
IVIS Spectrum In Vivo Imaging System Perkin Elmer 124262
Living Image Software Perkin Elmer 128113
Matrigel Corning 356231
MRI fibrosis tool N/A N/A https://github.com/MontpellierRessourcesImagerie/imagej_macros_and_scripts/wiki/MRI_Fibrosis_Tool
Phosphate-buffered saline (PBS) Sigma D8537
RNAscope kit ACD 322300
Rodent restrainer Sold by multiple suppliers
Rosa26-Cas9 mouse The Jackson Laboratory 024858
Saline Pfizer PHA19042010
Scissors Sold by multiple suppliers
Skin staplers Able Scientific AS59028 9 mm wound clips
Stapler applicator Able Scientific AS59026 9 mm wound clip applicator
Stapler remover Able Scientific AS59037 Wound clip remover
Surgical drape Multigate 29-220
Surgical gauze Sentry Medical GS001
Topical anesthesia cream EMLA N/A EMLA 5% cream, 25 mg/g lignocaine and 25 mg/g prilocaine
TrypLE Express Gibco 12605028 Recombinant cell-dissociation enzyme mix
Y-27632 Tocris 1254
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Zarour, L. R., et al. Colorectal cancer liver metastasis: Evolving paradigms and future directions. Cell and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (2), 163-173 (2017).
  2. Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastases. Nature Reviews. Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
  3. Kobayashi, H., et al. Cancer-associated fibroblasts in gastrointestinal cancer. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 16 (5), 282-295 (2019).
  4. Mizutani, Y., et al. Meflin-positive cancer-associated fibroblasts inhibit pancreatic carcinogenesis. Cancer Research. 79 (20), 5367-5381 (2019).
  5. Gieniec, K. A., Butler, L. M., Worthley, D. L., Woods, S. L. Cancer-associated fibroblasts-heroes or villains. British Journal of Cancer. 121 (4), 293-302 (2019).
  6. Tauriello, D. V. F., et al. TGFbeta drives immune evasion in genetically reconstituted colon cancer metastasis. Nature. 554 (7693), 538-543 (2018).
  7. Calon, A., et al. Dependency of colorectal cancer on a TGF-beta-driven program in stromal cells for metastasis initiation. Cancer Cell. 22 (5), 571-584 (2012).
  8. Shen, Y., et al. Reduction of liver metastasis stiffness improves response to cevacizumab in metastatic colorectal cancer. Cancer Cell. 37 (6), 800-817 (2020).
  9. Romano, G., Chagani, S., Kwong, L. N. The path to metastatic mouse models of colorectal cancer. Oncogene. 37 (19), 2481-2489 (2018).
  10. Roper, J., et al. In vivo genome editing and organoid transplantation models of colorectal cancer and metastasis. Nature Biotechnology. 35 (6), 569-576 (2017).
  11. Lannagan, T. R. M., et al. Genetic editing of colonic organoids provides a molecularly distinct and orthotopic preclinical model of serrated carcinogenesis. Gut. 68 (4), 684-692 (2019).
  12. Lannagan, T. R., Jackstadt, R., Leedham, S. J., Sansom, O. J. Advances in colon cancer research: in vitro and animal models. Current Opinion in Genetics & Development. 66, 50-56 (2021).
  13. Soares, K. C., et al. A preclinical murine model of hepatic metastases. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (91), e51677 (2014).
  14. Yazdani, H. O., Tohme, S. Murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59748 (2019).
  15. Frampas, E., et al. The intraportal injection model for liver metastasis: advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
  16. O’Rourke, K. P., et al. Transplantation of engineered organoids enables rapid generation of metastatic mouse models of colorectal cancer. Nature Biotechnology. 35 (6), 577-582 (2017).
  17. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A portal vein injection model to study liver metastasis of breast cancer. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (118), e54903 (2016).
  18. Lee, W. Y., Hong, H. K., Ham, S. K., Kim, C. I., Cho, Y. B. Comparison of colorectal cancer in differentially established liver metastasis models. Anticancer Research. 34 (7), 3321-3328 (2014).
  19. Kollmar, O., Schilling, M. K., Menger, M. D. Experimental liver metastasis: standards for local cell implantation to study isolated tumor growth in mice. Clinical & Experimental Metastasis. 21 (5), 453-460 (2004).
  20. McVeigh, L. E., et al. Development of orthotopic tumour models using ultrasound-guided intrahepatic injection. Scientific Reports. 9 (1), 9904 (2019).
  21. Engstrand, J., Nilsson, H., Stromberg, C., Jonas, E., Freedman, J. Colorectal cancer liver metastases – a population-based study on incidence, management and survival. BMC Cancer. 18 (1), 78 (2018).
  22. Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: a practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9, 29 (2009).
  23. Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), 682-688 (2016).
  24. Lau, H. C. H., Kranenburg, O., Xiao, H., Yu, J. Organoid models of gastrointestinal cancers in basic and translational research. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 17 (4), 203-222 (2020).
  25. Kobayashi, H., et al. The balance of stromal BMP signaling mediated by GREM1 and ISLR drives colorectal carcinogenesis. Gastroenterology. 160 (4), 1224-1239 (2021).
  26. Fumagalli, A., et al. Genetic dissection of colorectal cancer progression by orthotopic transplantation of engineered cancer organoids. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (12), 2357-2364 (2017).
  27. Fumagalli, A., et al. Plasticity of Lgr5-Negative Cancer Cells Drives Metastasis in Colorectal Cancer. Cell Stem Cell. 26 (4), 569-578 (2020).
  28. de Sousa e Melo, F., et al. A distinct role for Lgr5(+) stem cells in primary and metastatic colon cancer. Nature. 543 (7647), 676-680 (2017).
  29. Lee, J. W., et al. Hepatocytes direct the formation of a pro-metastatic niche in the liver. Nature. 567 (7747), 249-252 (2019).
  30. Dunbar, C. E., et al. Gene therapy comes of age. Science. 359 (6372), 4672 (2018).
  31. George, L. A., et al. Hemophilia B gene therapy with a high-specific-activity factor IX variant. The New England Journal of Medicine. 377 (23), 2215-2227 (2017).
  32. Colella, P., Ronzitti, G., Mingozzi, F. Emerging issues in AAV-mediated in vivo gene therapy. Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 8, 87-104 (2018).
  33. Fripont, S., Marneffe, C., Marino, M., Rincon, M. Y., Holt, M. G. Production, purification, and quality control for adeno-associated virus-based vectors. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (143), e58960 (2019).
  34. Sands, M. S. AAV-mediated liver-directed gene therapy. Methods in Molecular Biology. 807, 141-157 (2011).
  35. O’Rourke, K. P., Ackerman, S., Dow, L. E., Lowe, S. W. Isolation, culture, and maintenance of mouse intestinal stem cells. Bio-protocol. 6 (4), 1733 (2016).
  36. Ellerstrom, C., Strehl, R., Noaksson, K., Hyllner, J., Semb, H. Facilitated expansion of human embryonic stem cells by single-cell enzymatic dissociation. Stem Cells. 25 (7), 1690-1696 (2007).
  37. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  38. Oshima, G., et al. Advanced animal model of colorectal metastasis in liver: Imaging techniques and properties of metastatic clones. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54657 (2016).
  39. Anker, J. F., Mok, H., Naseem, A. F., Thumbikat, P., Abdulkadir, S. A. A bioluminescent and fluorescent orthotopic syngeneic murine model of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (133), e57301 (2018).
  40. Baklaushev, V. P., et al. Luciferase expression allows bioluminescence imaging but imposes limitations on the orthotopic mouse (4T1) model of breast cancer. Scientific Reports. 7 (1), 7715 (2017).
  41. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3564 (2012).
  42. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  43. Hara, A., et al. Roles of the mesenchymal stromal/stem cell marker meflin in cardiac tissue repair and the development of diastolic dysfunction. Circulation Research. 125 (4), 414-430 (2019).
  44. Hara, A., et al. Meflin defines mesenchymal stem cells and/or their early progenitors with multilineage differentiation capacity. Genes to Cells. 26 (7), 495-512 (2021).
  45. Wang, H., et al. RNAscope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (85), e51426 (2014).
  46. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 62 (10), 751-758 (2014).
  47. Lugli, A., et al. Recommendations for reporting tumor budding in colorectal cancer based on the International Tumor Budding Consensus Conference (ITBCC) 2016. Modern Pathology. 30 (9), 1299-1311 (2017).
  48. Sangisetty, S. L., Miner, T. J. Malignant ascites: A review of prognostic factors, pathophysiology and therapeutic measures. World Journal of Gastrointest Surgery. 4 (4), 87-95 (2012).
  49. Jung, B., Staudacher, J. J., Beauchamp, D. Transforming growth factor beta superfamily signaling in development of colorectal cancer. Gastroenterology. 152 (1), 36-52 (2017).
  50. Hapach, L. A., Mosier, J. A., Wang, W., Reinhart-King, C. A. Engineered models to parse apart the metastatic cascade. NPJ Precision Oncology. 3, 20 (2019).
  51. Jackstadt, R., et al. Epithelial NOTCH signaling rewires the tumor microenvironment of colorectal cancer to drive poor-prognosis subtypes and metastasis. Cancer Cell. 36 (3), 319-336 (2019).
  52. Lo, Y. -. H., Karlsson, K., Kuo, C. J. Applications of organoids for cancer biology and precision medicine. Nature Cancer. 1 (8), 761-773 (2020).
  53. van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. 161 (4), 933-945 (2015).
  54. Ben-David, U., et al. Genetic and transcriptional evolution alters cancer cell line drug response. Nature. 560 (7718), 325-330 (2018).
  55. Kattenhorn, L. M., et al. Adeno-associated virus gene therapy for liver disease. Human Gene Therapy. 27 (12), 947-961 (2016).

Tags

Keywords: Portal VeinColorectal CancerLiver MetastasisTumor StromaOrganoidsTumoroidsCASTumor MicroenvironmentMouse ModelSurgical ProcedureBuprenorphineAnesthesiaIncisionPeritoneum
check_url/62630?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Kobayashi, H., Gieniec, K. A., Ng, J. Q., Goyne, J., Lannagan, T. R. M., Thomas, E. M., Radford, G., Wang, T., Suzuki, N., Ichinose, M., Wright, J. A., Vrbanac, L., Burt, A. D., Takahashi, M., Enomoto, A., Worthley, D. L., Woods, S. L. Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma. J. Vis. Exp. (175), e62630, doi:10.3791/62630 (2021).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image