滑液分析以识别骨关节炎
Summary
透射、偏振和补偿光学显微镜下的滑液分析用于通过简单的步骤评估样品的炎症或非炎症性质。在骨关节炎中，检测钙晶体和识别更严重的骨关节炎亚群特别有用。
Abstract
滑液 （SF） 分析对于诊断骨关节炎 （OA） 很重要。宏观和微观特征，包括总白细胞和分类白细胞 （WBC） 计数，有助于确定 SF 的非炎症性质，这是 OA 的标志。在OA患者中，SF样本中的WBC通常不超过每微升2000个细胞，并且炎症细胞（如中性粒细胞）的百分比非常低或不存在。钙晶体常见于从OA患者收集的SF。尽管它们在OA发病机制中的作用尚不清楚，但它们与轻度炎症过程和更严重的疾病进展有关。最近，钙晶体在OA的早期和晚期都有描述，表明它们可能在诊断OA的不同临床亚群和药物治疗中发挥重要作用。OA中SF分析的总体目标是双重的：确定SF的非炎症程度和突出钙晶体的存在。
Introduction
骨关节炎 （OA） 是一种复杂的多因素慢性关节疾病，估计 15 岁及以上受试者的全球综合患病率为 16%，40 岁及以上受试者的汇总患病率为 23%。由于人口老龄化和肥胖和代谢综合征等危险因素的增加，OA的发病率预计将增加2。
与OA相关的主要问题包括在早期阶段诊断疾病的困难，以及目前可用的治疗方法仅限于疼痛管理和症状性慢效药物（SYSADOA），如糖胺聚糖。骨关节炎的诊断基于临床症状和影像学表现。然而，两项评估之间缺乏相关性可能导致OA诊断和治疗开始延迟数年2。OA的特征是退行性过程和低度炎症，可以通过滑液（SF）分析 轻松 研究。SF是一种富含透明质酸的粘性血浆透析液，可润滑关节空间，为软骨提供营养和氧气，并清除代谢废物。SF还充当减震器，从而在应力和应变期间保护接头3。
SF分析是一种简单可靠的方法，在对有肌肉骨骼症状和关节积液的患者进行初始评估时必须始终进行3。美国风湿病学会、英国风湿病学会等的建议包括 SF 分析，包括风湿性疾病诊断测试，必须主要在评估急性单关节炎时进行4，5。从SF分析中获得的总白细胞计数和差异白细胞计数提供了关节中发生的病理过程的快照，从而对炎症程度进行分类。在偏振光下鉴定致病晶体，例如尿酸单钠 （MSU） 和焦磷酸钙 （CPP） 晶体，对于晶体性关节炎（例如痛风和假痛风）的诊断和治疗至关重要。此外，微生物的存在提示化脓性关节炎的诊断。
钙晶体在OA6患者采集的样本中很常见。据报道，在 OA6 患者的约 22% 和 23% 的 SF 样本中分别存在碱式磷酸钙 （BCP） 晶体和 CPP。虽然它们的作用尚不清楚，但这些晶体与更严重的OA7 形式有关，并且被认为是病理过程本身的附带现象。在接受膝关节置换术的OA患者的组织样本中100%检测到钙晶体8。此外，据推测，钙晶体可能因其炎症作用而参与OA的发病机制，几项研究9 证明了这一点，并且至少部分介导了NLRP3炎症小体10。
最近，钙晶体在OA的早期和晚期6中都有描述，表明它们可能在诊断OA 的不同临床亚群和药物治疗中发挥重要作用。
SF分析的总体目标是双重的：确定SF的炎症程度，并通过鉴定特定的晶体或微生物来诊断晶体或化脓性关节炎。它是诊断OA的一种特别有用，简单和可靠的工具，因为典型的非炎症模式，中性粒细胞的百分比非常低或没有。
相对于替代技术的优势
SF分析包括简单的程序，包括总白细胞计数和差异白细胞计数以及晶体搜索。由专业实验室技术人员进行的手动细胞计数3，11 仍然是滑液和其他体液细胞学分析的黄金标准。然而，由于该方法的时间限制以及观察者之间和观察者内部的可变性，自动细胞计数仪已逐渐取代大型常规临床实验室中的手动计数，其中血液和尿液分析仪已被调整为SF分析11，12。然而，手动计数在特定环境中具有一些优势：（1）在门诊中，按时获得总和差异WBC值;（2）识别自动计数器无法识别的细胞类型，例如噬细胞单核（Reiter）细胞或滑膜细胞等非造血细胞;（3）当样品太小而无法用仪器处理时;（4） 建立易于用于研究目的的本地实验室登记册。手动计数的另一个优点是活体上染色，这种方法可以在载玻片制备后立即非常快速地分化细胞。相比之下，传统的染色，如Wright和May-Grünwald-Giimsa程序，需要风干的SF涂片和时间来染色细胞13。虽然不适合时间敏感的常规分析，但这些染色方法揭示了样品中更详细的细胞群，包括红细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、多形核白细胞、淋巴细胞和血小板。
最后，使用基于偏振光显微镜的简单技术对晶体进行常规SF分析，该技术可提供快速结果14。替代方法，如扫描和电子显微镜，产生更准确和灵敏的结果，但由于成本高且耗时的样品制备和分析，它们在日常临床实践中的使用是不可行的。
Protocol
Representative Results
Discussion
在OA中，SF分析通过简单的步骤帮助确定疾病特征：白细胞总数和差异白细胞计数以及搜索晶体，包括CPP和BCP。此外，MSU 晶体的检测可能突出重要的合并症。
尽管成本低且执行简单，但由于分析师经验不足，测试的敏感性和结果的可靠性可能会受到影响 – 主要是因为它与晶体鉴定有关。分析师的培训和经验对于区分CPP和MSU晶体的形状和双折射以及将其形状与其双折射程度相匹…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者希望感谢Leonardo Punzi教授在滑液分析领域的宝贵指导以及帕多瓦大学医院的支持。
Materials
| Alizarin red S | Merck | A5533 | For BCP crystal search |
| Burker chamber | Merck | BR718905 | For total white blood cell count |
| Cover glasses | Merck | C7931 | For microscopic examination |
| EDTA tubes | BD | 368861 | For SF collection |
| Glass slides | Merck | S8902 | For crystal search |
| Lambda filter (compensator) | Any | Refer to microscope company | For crystal identification |
| Malassez-Potain pipette | Artiglass | 54830000 | For dilution of synovial fluid |
| Methylene blue solution | Merck | 3978 | For total white blood cell count |
| Polarized microscope | Leica, Nikon, others | Depending on the model and company | For complete synovial fluid analysis |
| Polarizing lens | Any | Refer to microscope company | For crystal identification |
| Testsimplet | Waldeck | 14386 | Supravital staining for cell differentiation |
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