Summary
本プロトコルは、PDXモデルがトランスレーショナルオンコロジーの分野で急速に標準になりつつあるため、未分化甲状腺癌(ATC)および頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)の患者由来異種移植片(PDX)モデルを確立し、特徴付けます。
Abstract
患者由来異種移植片(PDX)モデルは、原発腫瘍の組織学的および遺伝的特徴を忠実に保存し、その不均一性を維持します。PDXモデルに基づく薬力学的結果は、臨床診療と高い相関があります。未分化甲状腺癌(ATC)は、甲状腺癌の最も悪性の亜型であり、浸潤性が強く、予後が悪く、治療が限られています。ATCの発生率は甲状腺癌のわずか2%〜5%を占めていますが、その死亡率は15%〜50%と高くなっています。頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)は、最も一般的な頭頸部悪性腫瘍の1つであり、世界中で毎年60万人以上の新規症例があります。ここでは、ATCおよびHNSCCのPDXモデルを確立するための詳細なプロトコルが提示される。本研究では、モデル構築の成功率に影響を与える主要な要因を分析し、PDXモデルと原発腫瘍の病理組織学的特徴を比較しました。さらに、モデルの臨床的関連性は、首尾よく構築されたPDXモデルにおける代表的な臨床的に使用された薬物の in vivo 治療効果を評価することによって検証された。
Introduction
PDXモデルは、ヒト腫瘍組織を免疫不全マウスに移植し、マウス1が提供する環境下で増殖させる動物モデルである。従来の腫瘍細胞株モデルには、不均一性の欠如、腫瘍微小環境を保持できないこと、in vitro継代の繰り返し中の遺伝的変異に対する脆弱性、臨床応用の不備など、いくつかの欠点があります2,3。遺伝子改変動物モデルの主な欠点は、ヒト腫瘍のゲノム特性の潜在的な喪失、新しい未知の突然変異の導入、およびマウス腫瘍とヒト腫瘍の間の相同性の程度を特定することの難しさです4。さらに、遺伝子改変動物モデルの作製は、費用と時間がかかり、比較的非効率的です4。
PDXモデルには、腫瘍の不均一性を反映するという点で、他の腫瘍モデルに比べて多くの利点があります。組織病理学の観点からは、マウスの対応物は時間の経過とともにヒト間質に置き換わるが、PDXモデルは原発腫瘍の形態学的構造をよく保存する。さらに、PDXモデルは、原発腫瘍のメタボローム同一性を少なくとも4世代にわたって保存し、腫瘍細胞とその微小環境との間の複雑な相互関係をよりよく反映しているため、ヒト腫瘍組織の成長、転移、血管新生、および免疫抑制のシミュレーションにおいてユニークです5,6,7.細胞レベルおよび分子レベルでは、PDXモデルは、ヒト腫瘍の腫瘍間および腫瘍内の不均一性、ならびに遺伝子発現パターン、突然変異状態、コピー数、DNAメチル化およびプロテオミクスなどの元の癌の表現型および分子特性を正確に反映しています8,9。継代の異なるPDXモデルは薬物療法に対して同じ感受性を有し、PDXモデルの遺伝子発現が非常に安定していることを示している10,11。研究によると、薬物に対するPDXモデルの反応とその薬物に対する患者の臨床反応との間には優れた相関関係があります12,13。したがって、PDXモデルは、特に薬物スクリーニングと臨床予後予測のための強力な前臨床およびトランスレーショナル研究モデルとして浮上しています。
甲状腺がんは内分泌系の一般的な悪性腫瘍であり、近年発生率が急速に増加しているヒトの悪性腫瘍です14。未分化甲状腺癌(ATC)は最も悪性の甲状腺癌であり、患者の生存期間の中央値はわずか4.8か月です15。中国では毎年甲状腺がん患者の少数派のみがATCと診断されていますが、死亡率は100%に近い16,17,18です。ATCは通常急速に成長し、頸部の隣接組織や頸部リンパ節に浸潤し、患者の約半数が遠隔転移を起こしています19,20。頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)は、世界で6番目に多い癌であり、癌による死亡の主要な原因の1つであり、毎年推定60万人がHNSCCに罹患しています21,22,23。HNSCCには、鼻、副鼻腔、口、扁桃腺、咽頭、喉頭24の腫瘍を含む多数の腫瘍が含まれます。ATCとHNSCCは、主要な頭頸部悪性腫瘍の2つです。新規治療薬や個別化治療の開発を促進するためには、ATCやHNSCCのPDXモデルなど、堅牢で高度な前臨床動物モデルの開発が必要です。
本稿では,ATCとHNSCCの皮下PDXモデル確立の詳細な方法を紹介し,モデル構築における腫瘍採取率に影響を与える主要因子の解析を行い,PDXモデルと原発巣の病理組織学的特徴を比較した.一方、本研究では、臨床的関連性を検証するために、正常に構築されたPDXモデルを使用して in vivo 薬力学的試験を実施しました。
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Protocol
すべての動物実験は、四川大学西中国病院の施設動物管理および使用委員会によって承認された実験動物管理の評価および認定協会のガイドラインおよびプロトコルに従って実施されました。4〜6週齢(男女ともに)のNOD-SCID免疫不全マウスおよび4〜6週齢の雌Balb / cヌードマウスを本研究に使用しました。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。西中国病院の倫理委員会は、ヒトを被験者とした研究を承認しました(プロトコル番号2020353)。各患者は書面によるインフォームドコンセントを提供しました。
1.実験の準備
- 使い捨ての刃物や滅菌したハサミやピンセットなど、腫瘍移植に必要な器具を用意し、超清浄な作業台に置き、事前に紫外線を照射してください。
- 試験中に使用するための滅菌生理食塩水とペトリ皿を準備します。
2.新鮮な腫瘍組織の取得と輸送
- 手術室から新鮮な腫瘍サンプル(通常はサイズが5 mm x 5 mmを超える)を入手し、滅菌HTK溶液( 材料の表を参照)または生理食塩水を含む15 mLまたは50 mLの遠沈管に入れます。遠沈管にラベルを付けます。
注:新鮮な腫瘍サンプルは、ATCまたはHNSCCの患者からの外科的除去または穿刺によって取得されました。 - 遠沈管をあらかじめ用意したアイスボックスに入れます。
注:この間、移植オペレーターは移植に必要なアイテムを準備する必要があります( 材料表を参照)。 - サンプルの収集からPDX構築のためのラボへの輸送までの時間が2時間を超えないようにしてください。輸送中は、組織の活動を維持するために、組織を含むチューブを氷水混合物またはアイスパックで囲みます。
3.腫瘍移植
- 腫瘍組織が検査室に到着したら、それらを記録して番号を付け直します。
注:本研究では、患者情報は厳重に機密に保たれました。手順の残りのステップは、バイオセーフティレベル2(BSL-2)ラボで実行されました。研究室に入るときは、作業服や防護服の上にスモック、帽子、マスクを着用することをお勧めします。腫瘍組織の治療はバイオセーフティキャビネットで行われます。 - 腫瘍組織を含む遠沈管を75%アルコールで消毒し、手術台に置きます。滅菌した眼科用鉗子を使用して生理食塩水で満たされた6cmのペトリ皿に腫瘍組織を移します。次に、刃を使って約2 mm x 2 mmと3 mm x 3 mmの小片に切ります。
- 腫瘍組織片を適量の生理食塩水を含む6cmのペトリ皿に移し、皿をシーリングフィルムで包み、アイスボックスに入れ、必要な器具(はさみ、鉗子、接種針)とともに特定の病原体のない(SPF)動物室に運びます。
- 以下の手順に従って動物を準備します。
- 4〜6週齢の雌または雄のNOD-SCID免疫不全マウスの右側胸部の毛を取り除き、75%アルコールで皮膚を消毒します。80 mg / kgのケタミンと10 mg / kgのキシラジンの腹腔内注射によってマウスに麻酔をかけ( 材料の表を参照)、乾燥を防ぐために獣医軟膏で目を塗ります。ペダル反射の喪失による麻酔の深さを確認します。
- マウスの右外側胸郭の中央にある皮膚を通してハサミで2mmの切開を行います。
- ペトリ皿から腫瘍片を取り出し、鉗子で2.4 mm x 2.0 mmのトロカール針( 材料表を参照)に入れます。
- マウスを持ち、穿刺部位の皮膚を締め、腫瘍片を含むトロカールを使用して、最初の2 mmの皮膚切開から腫瘍を挿入し、肩の後ろに移動し、トロカールコアを押します。
- 腫瘍片が押し出され、トロカール穿刺によって形成された移行洞に残っていることを確認してから、トロカールを引き抜きます。
- 腫瘍を抜いたときに腫瘍が針と一緒に動く場合は、トロカールを使用して腫瘍をリセットし、切開部を縫合します。
注:この研究では、各マウスを背側前肢と後肢に接種しました。腫瘍サイズに基づいて各患者からの腫瘍サンプルあたり1〜3匹のマウスを接種した。
4.腫瘍組織の保存、固定、およびタンパク質凍結
注:残りの腫瘍組織は、それぞれ種子の保存、固定、およびDNA/RNA/タンパク質の凍結に使用されました。
- 腫瘍表面が過度に濡れていないことを確認するために、凍結保存チューブに入れる前に滅菌ガーゼで腫瘍表面から生理食塩水を取り除きます。
- 2 mm×2 mmの腫瘍組織を4〜6個入れ、90%ウシ胎児血清(FBS)と10%ジメチルスルホキシド(DMSO)からなる凍結保存液1 mLをチューブに加え、チューブをグラジエント冷却ボックスに入れ、-80°Cで一晩凍結し、最後に 液体窒素に移します。
- 病理学的検査のための組織固定のために、3 mm x 3 mmの腫瘍組織ブロックを10%緩衝ホルマリンに入れます。
- 3 mm x 3 mmの組織ブロックを2 mLの細胞凍結保存チューブに入れ、液体窒素ですばやく凍結した後、DNA/RNAおよびタンパク質抽出のために-80°C冷蔵庫に移します。
- 喫煙歴、腫瘍の大きさ、分化、病理学的サブタイプ、がんの悪性度、がんの病期、遠隔転移、起源、病歴、免疫組織化学、HNSCC患者のヒトパピローマウイルス(HPV)感染、治療薬などの患者の臨床情報を収集します。
5. PDXモデル腫瘍の継代・凍結保存・蘇生
- マウスの皮下腫瘍の長さと幅を週1回ノギスで測定し、腫瘍体積=長さ×幅2×腫瘍体積=0.5の式に従って腫瘍体積を算出する。腫瘍成長曲線を描きます。
- PDX腫瘍が2,000mm3に達したら、次世代のマウスに継代し、腫瘍再移植を行う。手順4に従って機器の準備を実行します。
- 80 mg / kgのケタミンで麻酔した後、子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させます。
- 75%アルコールで皮膚を消毒します。次に、ハサミで腫瘍周囲の皮膚を切り取り、鉗子で腫瘍を取り除き、シャーレに入れます。
- ステップ3に続いて腫瘍移植手順を実行します。
- ステップ4に続いてPDXモデル腫瘍の保存と凍結保存を行う。
- 腫瘍組織の蘇生のために、ゆっくり凍結と速い溶解の原則に従ってください。液体窒素からクライオバイアルを取り出した後、37°Cの水浴にすばやく入れて迅速に溶解させます。
- 水浴中でクライオバイアルを静かに振って、解凍プロセスを加速します。
- 解凍し、腫瘍片を洗浄のために準備された通常の生理食塩水に移し、次に次世代のマウスに接種する。具体的な手術については、ステップ3の組織移植手順をご覧ください。
6. ATC PDXモデルにおけるレンバチニブとシスプラチンの治療効果の決定
注:ATC PDXモデルを使用して、チロシンキナーゼ阻害剤レンバチニブと化学療法薬シスプラチン25、26、27の治療効果をテストしました。
- ATC PDXモデル(THY-017)のP5世代腫瘍組織を選択し、2〜4 mm 3組織片に切断し、4〜6週間の雌Balb/cヌードマウス10匹の右背面に皮下接種(ステップ3 )します。
- 腫瘍体積が50〜150 mm 3のマウスを15匹選択し、それらを3つのグループに分けます。
- レンバチニブ(10 mg / kg)を1群に1日1回15日間胃内投与し、シスプラチン(3 mg / kg)を3日ごとに1群に腹腔内投与し、合計6回投与し、対照群には同量の生理食塩水を投与します。.
- マウスの体重と腫瘍体積を週に2回測定します。
- 試験の最後に、マウスを安楽死させ(ステップ5.3)、腫瘍の重量を量る。
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Representative Results
甲状腺癌標本18例を移植し,未分化甲状腺癌4例,未分化甲状腺癌1例を含む5つのPDXモデルの構築に成功した(腫瘍採取率27.8%)。モデル構築の成功率と年齢,性別,腫瘍径,腫瘍悪性度,分化との相関を分析した。グレード4の腫瘍サンプルのモデル成功率は低グレードのサンプルよりも高く、未分化腫瘍サンプルの成功率も高分化サンプルよりも高かったが、相関分析の結果、これらの要因はPDXモデルの成功率と関連していないことが示された(表1).17個のHNSCCサンプルを接種し、HNSCCCの4つのPDXモデルを構築することに成功した。モデル構築における腫瘍採取率と腫瘍サンプルの臨床パラメータとの相関分析により、分化の程度はモデルの成功率と関連しているが、年齢、性別、喫煙歴、腫瘍直径、がん悪性度、転移、およびHPV感染は腫瘍採取率に影響しないことが示された(表2)。
各PDXモデルの腫瘍増殖曲線をプロットして、異なる患者からのPDXモデルの増殖速度をよりよく理解した(図1、 図2、および 表3)。世代P0からP5までのTHY-004の平均造腫瘍周期(接種から腫瘍サイズ1,000 mm3までの時間)は、それぞれ68日、87日、29日、34日、28日、および26日でした。世代P0からP5までのTHY-012の平均造腫瘍周期は、それぞれ119日、61日、66日、55日、87日、および116日でした。世代P0からP5までのTHY-017の平均腫瘍化サイクルは、それぞれ27日、17日、30日、13日、22日、および15日でした。世代P0からP3までのTHY-018の平均腫瘍形成サイクルは、それぞれ134日、70日、48日、および48日でした。世代P0からP3までのTHY-021の平均造腫瘍周期はそれぞれ53日、66日、35日、および49日でした。世代P0からP4までのOTO-017の平均造腫瘍周期は、それぞれ118日、86日、67日、129日、および88日でした。世代P0からP5までのOTO-022の平均腫瘍化サイクルは、それぞれ155日、55日、32日、37日、27日、および46日でした。世代P0からP2までのOTO-030の平均造腫瘍周期はそれぞれ133日、93日、および104日でした。世代P0からP5までのOTO-031の平均造腫瘍周期は、それぞれ144日、58日、33日、34日、52日、および50日でした。ATC検体はP3世代以降に安定して受け継がれたが,HNSCC検体はP1世代に移行した後に腫瘍を形成できなかった2例であった。一部のサンプルの成長速度はP0世代では比較的遅かったが、P1以降の世代に移行した後、それらの増殖速度は加速された。患者腫瘍の病理組織学的特徴と異なる世代のPDXモデルの特徴を比較した。その結果、PDX腫瘍と患者由来原発腫瘍は形態的にほぼ類似しており(図3)、患者とPDXの世代が異なる場合のサンプリング領域の不均一性によるわずかな違いが見られました。
レンバチニブ(進行甲状腺がん28の治療薬として承認されたマルチターゲットチロシンキナーゼ阻害剤)の抗腫瘍効果をATCのPDXモデルで評価した。 図4Aに示されるように、レンバチニブ治療は、正常生理食塩水対照群と比較して、ATC PDXモデルにおける腫瘍増殖を有意に阻害した(P < 0.05)。実験の最後に、腫瘍組織を切除し、重量を測定して腫瘍重量を決定した。対照群と比較して、レンバチニブ治療群の腫瘍重量は低かったが、統計学的差は達成されなかった(図4B)。さらに、レンバチニブで治療したマウスでは、全身状態および体重の明らかな変化は観察されなかった(図4C)。実験中のシスプラチン投与の過剰な頻度のために、マウスは体重減少および死さえも明らかにする重大な毒性を示した。シスプラチンの抗腫瘍効果を 補足図1に示す。
図1:異なる患者からのATC PDXモデルの腫瘍成長曲線。 各色は指定された世代を表し、各曲線は単一の腫瘍を表します。1〜3匹のマウスを継代0(P0)世代で接種し、5匹のマウスをその後の継代(P1-P5)で接種した。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図2:異なる患者からのHNSCC PDXモデルの腫瘍成長曲線。 各色は指定された世代を表し、各曲線は単一の腫瘍を表します。P0世代では1〜3匹のマウスを接種し、P1以降の世代では5匹を接種した。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図3:病理組織学的研究。 患者の原発腫瘍とATC(THY-012、THY-017)およびHNSCC(OTO-017)(ヘマトキシリン-エオジン染色、100x)の対応するPDX(継代1および継代3)との組織病理学的比較。THY-012およびTHY-017の病理学的サブタイプは未分化甲状腺癌であり、OTO-017の病理学的サブタイプは扁平上皮癌であった。スケールバー = 100 μm。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
図4:ATC PDXモデルにおけるレンバチニブの治療効果。 レンバチニブ(10 mg / kg)で処理した後のATC PDX保有マウスの(A)腫瘍体積、(B)腫瘍重量、および(C)体重の変化。レバチニブと対照を比較するためにT検定を用いて統計解析を行った。*対照に対するP < 0.05は統計学的に有意であると考えられた。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| パラメーター | クラス | 腫瘍採取率(%) | P |
| 年齢(年) | <60 | 16.67 (1/6) | 0.615 |
| ≥60 | 33.33 (4/12) | ||
| ジェンダー | 男性 | 16.67 (1/6) | 0.615 |
| 女性 | 33.33 (4/12) | ||
| 腫瘍径 | <6センチメートル | 37.50 (3/8) | 0.608 |
| ≥6センチメートル | 20.00 (2/10) | ||
| 病理学的TNMステージ | 私 | 0.00 (0/1) | 1 |
| Ш | 0.00 (0/1) | ||
 |
31.25 (5/16) | ||
| 区別 | 高い | 0.00 (0/7) | 0.059 |
| 貧しい | 25.00 (1/4) | ||
| 未分化 | 57.14 (4/7) |
表1:ATC腫瘍の採取率と患者の臨床的特徴との相関。
| パラメーター | クラス | 腫瘍採取率(%) | P |
| HPV | － | 33.33 (2/6) | 1 |
| 不明または陽性 | 36.36 (4/11) | ||
| 年齢(年) | <60 | 33.33 (3/9) | 1 |
| ≥60 | 37.50 (3/8) | ||
| ジェンダー | 男性 | 50.00 (5/10) | 0.304 |
| 女性 | 14.29 (1/7) | ||
| 喫煙状況 | 曾て | 44.44 (4/9) | 0.62 |
| なし | 25.00 (2/8) | ||
| 腫瘍径 | <3センチメートル | 40.00 (4/10) | 1 |
| ≥3センチメートル | 28.57 (2/7) | ||
| 病理学的TNMステージ | 私 | 75.00 (3/4) | 0.423 |
 |
25.00 (2/8) | ||
| Ш | 0.00 (0/1) | ||
|
33.33 (1/3) | ||
| 遠隔転移 | Y | 28.57 (2/7) | 0.633 |
| N | 44.44 (4/9) | ||
| 区別 | 高い | 12.50 (1/8) | 0.036* |
| 中程度から高い | 100.00 (2/2) | ||
| 適度 | 0.00 (0/2) | ||
| 中程度から悪い | 66.67 (2/3) | ||
| * P < 0.05 |
表2:HNSCC腫瘍の受診率と患者の臨床的特徴との相関関係。 *P < 0.05
| サンプル名 | ジェネレーション P から P0 | ジェネレーション P0 から P1 | ジェネレーションP1からP2 | ジェネレーションP2からP3 | ジェネレーションP3からP4 | ジェネレーションP4からP5 |
| THY-004 | 68 | 87 | 29 | 34 | 28 | 26 |
| THY-012 | 119 | 61 | 66 | 55 | 87 | 116 |
| THY-017 | 27 | 17 | 30 | 13 | 22 | 15 |
| THY-018 | 134 | 70 | 48 | 48 | - | - |
| THY-021 | 53 | 66 | 35 | 49 | - | - |
| OTO-017 | 118 | 86 | 67 | 129 | - | - |
| OTO-022 | 155 | 55 | 32 | 37 | 27 | 46 |
| OTO-030 | 133 | 93 | 104 | - | - | - |
| OTO-031 | 144 | 58 | 33 | 34 | 52 | 50 |
表3:ATCおよびHNSCCモデルの平均腫瘍形成サイクル(接種から腫瘍サイズ1,000mm3までの時間)。
補足図1:ATC PDXモデルにおけるシスプラチンの治療効果。 シスプラチン(3 mg/kg)投与後のATC PDX担持マウスの(A)腫瘍体積、(B)腫瘍重量、(C)体重の変化。T検定を用いて統計解析を行い、シスプラチンと対照を比較した。*対照に対するP < 0.05は統計学的に有意であると考えられた。 このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。
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Discussion
本研究により、ATCとHNSCCの皮下PDXモデルの確立に成功しました。PDXモデル構築の過程で注意すべき点はたくさんあります。腫瘍組織が患者から分離されたら、それをアイスボックスに入れ、できるだけ早く接種のために検査室に送るべきです。腫瘍が検査室に到着した後、オペレーターは無菌フィールドの維持に注意を払い、無菌手順を実践する必要があります。針生検サンプルの場合、腫瘍組織が特に小さいため、サンプルをマトリックスゲルと混合した後の接種は、モデルの確立により役立ちます。原発腫瘍組織も、将来の研究のために可能な限り保存、固定、および凍結する必要があります。接種中は、使用前に腫瘍片をトロカールに入れた後、トロカール内の空気をできるだけ排出する必要があります。腫瘍接種後、腫瘍の成長はマウスで1〜4か月間観察されるべきであり、6か月以上腫瘍の成長がないマウスは安楽死させることができます29。
免疫不全マウスは、一般に、PDXモデル構築のための宿主として選択される29、30。P0世代からP2世代にかけては、非肥満糖尿病重症免疫不全(NOD-SCID)マウスまたはNOD Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ(NSG)マウスが一般的に用いられる。P3世代以降では、サンプルは安定して通過すると考えられるため、ヌードマウスは通常宿主としても機能し、腫瘍も正常に増殖する可能性があります。さらに、患者の総手術時間、腫瘍分離時間、無病生存率、および全生存率、腫瘍の悪性度、および組織学的サブタイプはすべて、PDXモデルの造腫瘍性と関連していた31、32、33、34。移植部位はPDXモデリングの成功率にも影響を与え、腎被膜移植と直交異方性移植は腫瘍形成率が高いことが研究によって示されています33,35。加えて、マトリゲルの使用はまた、腫瘍形成率を改善し得る36、37。ヒトパピローマウイルス(HPV)感染は、HNSCC腫瘍の移植の成功率に影響を与えることが報告されています。HPV陰性腫瘍は、HPV陽性腫瘍と比較して優れた採取率を有する38,39。この研究は、おそらくサンプル数が少なく、HPV感染に関する情報が不完全であるため、同じ結論に達しませんでした。
同所性および腎被膜移植モデルとは異なり、皮下モデルは腫瘍の成長を観察するのにより便利であり、手術40,41,42にも役立ちます。ATCおよびHNSCC PDXモデルの腫瘍増殖データに基づいて、異なる患者からの腫瘍の増殖速度は、腫瘍間の不均一性を反映して一貫していないことを発見しました。ほとんどのPDXモデルからのP0世代の腫瘍増殖速度は、後者の継代よりも比較的遅く、これはおそらくマウス微小環境の適応によるものであった。特に、一部の患者由来腫瘍からの増殖率は、P1世代後の異なる継代で増加し、Pearsonらによって報告された継代間隔の短縮と一致しています43。病理組織学的検査の結果,PDX腫瘍は原発巣の形態学的特徴を保持していた。PDXモデルと臨床ATC患者との相関は、in vivo薬力学的試験の結果にも反映されており、レンバルチニブが良好な抗腫瘍効果を示したことが実証され、臨床報告と一致した25、26、27。
ただし、PDXモデルにはいくつかの欠点もあります。例えば、腫瘍形成時間は比較的長く、これは進行性または侵攻性の腫瘍を有する患者には不適当である。さらに、ハイスループット薬物スクリーニングの時間と金銭的コストは高すぎます44。実際、PDXモデルを腫瘍オルガノイドと組み合わせ、PDXモデルに対応する患者由来オルガノイド(PDO)モデルを確立することで、この欠陥を補うことができる44,45,46。同所性移植モデルは、腫瘍の病因および転移メカニズムを研究するために使用することができる40、41、47。機能的な免疫系の欠如はPDXモデルのもう一つの欠点であるため、腫瘍免疫学研究のためのPDXモデルを構築するためにヒト化マウスを使用する実験が増えています48,49,50。
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Disclosures
潜在的な利益相反は開示されていません。
Acknowledgments
この作業は、四川省科学技術支援プログラム(助成金番号2019JDRC0019および2021ZYD0097)、卓越性分野のための1.3.5プロジェクト、四川大学西中国病院(助成金番号ZYJC18026)、卓越性分野のための1.3.5プロジェクト-四川大学西中国病院臨床研究インキュベーションプロジェクト(助成金番号2020HXFH023)、中央大学の基礎研究資金(SCU2022D025)、 成都科学技術局の国際協力プロジェクト(助成金番号2022-GH02-00023-HZ)、四川大学のイノベーションスパークプロジェクト(助成金番号2019SCUH0015)、および西中国病院-電子科学技術大学の医工統合のための人材訓練基金(助成金番号HXDZ22012)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2.4 mm x 2.0 mm trocar | Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd | 18-9065 | |
| Balb/c nude mice | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | 401 | |
| Biosafety cabinet | Suzhou Antai | BSC-1300IIA2 | |
| Blade | Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd | 18-0823 | |
| Centrifuge tube | Corning | 430791/430829 | |
| Cryopreservation tube | Chengdu Dianrui Experimental Instrument Co., Ltd | / | |
| Custodiol HTK-Solution | Custodiol | 2103417 | |
| Dimethyl sulfoxide(DMSO) | SIGMA-ALORICH | D5879-500mL | |
| Electronic balance | METTLER | ME104 | |
| Electronic digital caliper | Chengdu Chengliang Tool Group Co., Ltd | 0-220 | |
| fetal bovine serum(FBS) | VivaCell | C04001-500 | |
| IBM SPSS Statistics 26 | IBM | ||
| Ketamine | Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd | 100761663 | |
| Lenvatinib | ApexBio | A2174 | |
| NOD-SCID immunodeficient mice | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. | 406 | |
| Pen-Strep Solution | Biological Industries | 03-03101BCS | |
| Petri dish | WHB | WHB-60/WHB-100 | |
| Saline | Sichuan Kelun | W220051705 | |
| Scissor | Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd | 18-0110 | |
| Tweezer | Shenzhen Huayang Biotechnology Co., Ltd | 18-1241 | |
| Vet ointment | Pfizer Inc. | P10015353 | |
| Xylazine | Dunhua Shengda Animal Medicine Co., Ltd | 070031777 |
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