쥐의 자궁 이식을 위한 외과적 접근, 과제 및 해결 방법
Summary
본 프로토콜은 쥐의 성공적인 자궁 이식(UTx)을 위한 모든 필수 단계를 설명합니다. 래트 모델은 UTx의 임상적 구현을 촉진하는 데 적합한 것으로 입증되었습니다. 그러나 쥐 UTx는 신중한 지침이 필요한 매우 복잡한 절차입니다.
Abstract
자궁 이식(UTx)은 절대 자궁 인자 불임(AUFI)이 있는 여성을 치료하기 위한 새로운 접근 방식입니다. 여성의 약 3%-5%가 AUFI를 앓고 있습니다. 이 여성들은 UTx가 출현 할 때까지 아이를 가질 수있는 선택권을 박탈 당했습니다. UTx의 임상적 적용은 동물에 대한 실험적 연구에 의해 주도되었으며, 최초의 성공적인 UTx는 쥐에서 달성되었습니다. 생리학적, 면역학적, 유전적, 생식적 특성을 감안할 때 쥐는 이러한 이식에 적합한 모델 시스템입니다. 특히, 실험적 UTx의 일반적인 종점은 출산을 통한 성공적인 임신이기 때문에 짧은 임신 기간은 분명한 이점입니다. 쥐 모델의 가장 큰 과제는 고급 미세 수술 기술과 경험이 필요한 작은 해부학으로 남아 있습니다. UTx가 클리닉에서 임신으로 이어졌지만 절차가 확립되지 않았으며 지속적인 실험 최적화가 필요합니다. 여기에서는 쥐 UTx에 대한 필수 문제 해결을 포함하여 자세한 프로토콜이 제시되며, 이는 이러한 유형의 미세 수술에 대한 경험이 없는 사람들이 전체 절차를 더 쉽게 이해할 수 있도록 할 것으로 기대됩니다.
Introduction
자궁 이식(UTx)은 절대 자궁 인자 불임(AUFI)에 대한 새로운 치료법입니다. AUFI는 자궁의 부재(선천적 또는 후천적) 또는 기형으로 인해 발생하며 전 세계 여성의 3%-5%에 영향을 미칩니다1. 윤리적, 법적 또는 종교적 이유로 모성에 대한 욕구가 있지만 AUFI2로 고통받는 많은 여성의 입양이나 대리모를 배제합니다. 이 여성들에게 UTx는 자신의 가족을 시작할 수 있는 유일한 옵션으로 남아 있습니다. UTx는 엇갈린 성공을 거두었지만 클리닉에 적용되었습니다. 이 절차는 기술적으로 까다롭고 임상 확립을 위해 꾸준한 개선이 필요합니다.
2014년, 살아있는 기증자(LD)로부터 자궁을 이식하여 성공적인 임신을 이룩한 것은 스웨덴의 선구적인 그룹인 Brännström3에 의해 수행되었습니다. 사망한 기증자(DD)의 UTx 이후 첫 번째 출생은 2016년 브라질에서 보고되었습니다4. 2021년까지 전 세계적으로 80개 이상의 UTx가 수행되었지만 성공률은 약 50%이고 대다수는 LD에서 이식편이 나왔습니다1.
생명을 구하는 것은 아니지만 UTx는 자신의 자손에 대한 욕구를 충족시키기 위해 점점 더 인기 있는 절차입니다. 따라서 이식편에 대한 수요가 증가하여 DD 기증이 미래의 초점이 되고 있습니다. 그러나 DD 기증은 상당히 긴 추위(심장사의 경우 따뜻함) 허혈성 노출로 인해 복잡하여 이식편 기능 장애 및 거부 반응의 위험이 높아집니다 5,6. 수술 기술, 까다로운 호환성 일치 및 관련 면역 억제는 UTx 결과와 관련하여 중요한 문제로 남아 있습니다7.
클리닉에서 위의 위험을 관리하기 위해서는 허혈 및 면역 억제 탐색을 위한 적절한 동물 모델이 필요합니다. 동물 모델에 대해 임상적으로 가장 관련성이 높은 종점은 성공적인 출산입니다. 현재까지, 실험적인 UTx에 따른 임신은 생쥐, 쥐, 양, 토끼, 시노몰구스 원숭이8에서 이루어졌다. 더 큰 동물은 수술 기술을 습득하고 최적화하도록 예정되어 있지만 설치류는 짧은 임신 기간이라는 뚜렷한 이점이 있습니다. 따라서 설치류 모델은 실질적, 재정적, 윤리적 고려 사항에서 우수하다9. 그러나 생쥐에서 UTx의 주요 과제는 작은 해부학이며, 매우 까다로운 수술은 쥐 UTx10의 낮은 재현성과 관련이 있습니다. 대조적으로, 쥐는 외과적으로 더 쉽게 접근할 수 있고 짧은 임신 기간의 이점을 유지합니다. 따라서 쥐는 UTx9의 선택 모델이되었습니다. Wranning et al. 2008년에 동소 UTx의 쥐 모델을 도입했으며, 이 모델을 사용하여 UTx 및 자연 교배 후 첫 번째 출생이 보고되었습니다11,12,13. 후속 연구는 인간에서 UTx를 구현하는 데 결정적인 기여를 했습니다9.
그럼에도 불구하고 UTx는 쥐에게 여전히 도전적이며 아직 소수의 그룹만이 이 수술 기술을 마스터했습니다. 연구자들 사이에서 쥐 UTx의 확산에 대한 한 가지 관련 장애물은 개별 미세 수술 단계, 함정 및 문제 해결을 위한 적절한 조치에 대한 정확한 설명이 부족하다는 것입니다14. 이 프로토콜은 이 동물 모델을 향후 연구에 쉽게 구현할 수 있도록 이 매우 복잡한 미세 수술 절차에 대한 자세한 지침을 제공하는 것을 목표로 합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 제시된 프로토콜은 쥐의 자궁 이식 이면에 있는 외과적 접근에 대한 자세한 지침을 제공합니다. 이 프로토콜은 UTx 및 후속 짝짓기 후 출생 확률을 높이도록 최적화되었습니다. 원래 프로토콜은 Akouri et al.10의 마우스 작업에서 영감을 받아 Brännström 그룹12,13에서 인수되었으며 지난 몇 년 동안 저자의 경험을 기반으로 수정되었습니다.<sup class="xre…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 스위스 국립 과학 재단 (프로젝트 보조금 번호 310030_192736)의 지원을 받았습니다. 조직병리학적 지원을 해주신 취리히 대학교 수의병리학 연구소의 Frauke Seehusen 박사에게 감사드립니다.
Materials
| Angled to Side Scissor 5 mm | F.S.T | 15008-08 | |
| Big Paper Clip | No specific | Used as retractor | |
| Blunt Bend Needle G30 | Unimed S.A. | ||
| Bupivacain 0.5% | Sintetica | ||
| Buprenorphine 0.3 mg/mL | Temgesic | ||
| Dosiernadel G25 | H.SIGRIST& PARTNER AG | ||
| Dumont #5SF Forceps | F.S.T | 11252-00 | |
| Ethilon 10/0 | Ethicon | 2810G | |
| Ethilon 6/0 | Ethicon | 667H | |
| Ethilon 7/0 | Ethicon | EH7446H | |
| Ethilon 8/0 | Ethicon | 2808G | |
| Femal Brown Norway Rats (150-170 g) | Janvier | ||
| Femal Lewis Rats (150-170 g) | Charles River Deutschland | ||
| Fine Scissors – Sharp | F.S.T | 14060-09 | Any other small scissor works too |
| Halsey Micro Needle Holder | F.S.T | 12500-12 | Any other small needholder works too |
| Heparin Natrium 25000 I.E./ 5 mL | B. Braun | ||
| Institute Georges Lopez Perfusion Solution (IGL) | Institute Georges Lopez | Organ preservation solution | |
| Male Lewis Rats (300-320 g) | Charles River Deutschland | ||
| Micro Serrefines 13 mm | F.S.T | 18055-04 | |
| Micro Serrefines 16 mm gebogen | F.S.T | 18055-06 | |
| Micro-Serrefine Clamp Applicator with Lock | F.S.T | 18056-14 | |
| Mölnlyncke Op Towel | Mölnlyncke | 800300 | Sterile drape |
| NaCl 0.9% | B.Braun | ||
| Octenisept | Schülke | ||
| Paper Tape | Tesa | For fixing the animal | |
| Philips Avent Schneller Flaschenwärmer SCF358/02 | Philips | 12824216 | |
| Ringerfundin | B.Braun | ||
| Rompun 2% | Bayer | Xylazine | |
| Round Handled Needle Holders | F.S.T | 12075-12 | |
| Round Handled Needle Holders | F.S.T | 12075-12 | |
| S&T Vessel Dilating Forceps – Angled 45° | F.S.T | 00276-13 | |
| Sacryl Naht | KRUUSE | 152575 | |
| Scapel No 10 | Swann Morton | 201 | |
| Small Histo-Container | Any small histo-container works fine-for coldstorage of the graft | ||
| Small Plastik Bags | Any transparant plastic bags are fine | ||
| Steril Cotton swab | Lohmann-Rauscher | Any steril cotton swab is fine | |
| Sterile Gauze | Lohmann-Rauscher | Any steril gauze is fine | |
| Straight Scissor 8mm | F.S.T | 15024-10 | |
| Surgical microscope – SZX9 | Olympus | OLY-SZX9-B | |
| Sutter Non Stick GLISS 0.4 mm | Sutter | 78 01 69 SLS | |
| Suture Tying Forceps | F.S.T | 00272-13 | |
| ThermoLux warming mat | ThermoLux | ||
| Tissue Forceps for Skin | Any tissue forceps are fine | ||
| Vesseldilatator Forceps | F.S.T | 00125-11 | |
| Vicryl plus 4/0 | Ethicon | VCP292H |
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