Du-Moxibustion i en musemodel af ankyloserende spondylitis
Summary
Dette papir beskriver detaljeret de operationsprocedurer og forholdsregler, der skal tages under Du-moxibustion til behandling af ankyloserende spondylitis hos forsøgsmus.
Abstract
Ankyloserende spondylitis (AS) er en gradvis forværring og invaliderende form for arthritis, der primært påvirker det aksiale skelet. Denne sygdom involverer hovedsageligt rygsøjlen og sacroiliac joint. Fusion af rygsøjlen og sacroiliac leddet kan forekomme i den senere fase af sygdommen, hvilket resulterer i spinal stivhed og kyphosis samt vanskeligheder med at gå, hvilket alvorligt påvirker kvaliteten af arbejdet og dagligdags aktiviteter og pålægger en tung byrde for patienten, familien og samfundet. Der er blevet lagt stigende vægt på ikke-farmakoterapi som en alternativ behandling for AS. Moxibustion er en gammel terapeutisk teknik, der anvendes i traditionel kinesisk medicin (TCM). Du-moxibustionsterapi, en unik og innovativ ekstern behandling udviklet på basis af almindelig moxibustion, har en bestemt terapeutisk effekt på AS. Du-moxibustion kombinerer dygtigt de kompatible teknikker fra TCM til at integrere meridianer, akupunkter, kinesisk urtemedicin og moxibustion. Dette papir beskriver operationsprocedurerne og forholdsreglerne, der skal tages under Du-moxibustion i eksperimentelle mus i detaljer for at tilvejebringe et eksperimentelt grundlag for undersøgelsen af mekanismen for Du-moxibustion i behandlingen af AS.
Introduction
Ankyloserende spondylitis (AS) er en gradvis forværring og invaliderende form for arthritis, der primært påvirker det aksiale skelet. Ifølge den seneste epidemiologiske undersøgelse lider ~ 0,01% -1,8% af mennesker i verden af denne tilstand1, hvoraf de fleste er unge mænd (forholdet mellem mænd og kvinder er ~ 2-3: 1)2. Forekomsten af AS i den kinesiske befolkning er 0,2% -0,4%. Denne sygdom involverer hovedsageligt rygsøjlen og sacroiliac joint. Fusion af rygsøjlen og sacroiliac leddet kan forekomme i de senere stadier af sygdommen, hvilket resulterer i rygstivhed og kyphosis samt vanskeligheder med at gå, hvilket alvorligt påvirker kvaliteten af arbejdet og dagligdags aktiviteter og pålægger patienten, familien og samfundeten tung byrde 1. I øjeblikket er der ingen endelig løsning for AS, og de leverede behandlinger, både farmakologiske og ikke-farmakologiske, fokuserer primært på at lindre smerter, bremse sygdomsprogression og forbedre livskvaliteten. I de senere år, fordi farmakoterapeutiske muligheder har været meget begrænsede3, er der blevet lagt stigende vægt på ikke-farmakoterapi, som er blevet en alternativ behandling for AS. I Kina foretrækker patienter ofte ekstern behandling bestående af traditionel kinesisk medicin (TCM), som har mindre bivirkninger og stor bekvemmelighed under behandlingen.
Moxibustion er en gammel terapeutisk teknik, der anvendes i TCM. Du-moxibustion er en ekstern behandlingsteknik bestående af “medicineret moxibustion med skum” på rygsøjlesegmentet af Du-meridianen. Det bruges hovedsageligt til behandling af AS og har vist sikkerhed og effektivitet. Sammenlignet med almindelig moxibustion har Du-moxibustion egenskaberne ved et bredt moxibustionsområde, en stor moxakegle, stærk ildkraft og høj temperatur4. En systematisk gennemgang og metaanalyse tyder på, at moxibustion er en effektiv komplementær behandling for AS5. En nylig undersøgelse bekræftede, at de kliniske symptomer og nogle inflammatoriske faktorer hos AS-patienter blev forbedret ved moxibustion6. Undersøgelser har vist, at Du-moxibustion kan øge hjernens indhold af β-endorfin og udøve en central smertestillende effekt7, nedregulere ekspressionen af HLA-B27-genet 8 og forsinke tilbagefaldshastigheden for AS. Du-moxibustion har også en forbedrende effekt på udviklingen af AS ved at reducere inflammationsindekset ESR (ESR) og niveauerne af C-reaktivt protein (CRP), C-terminalt peptid af type I kollagen (CTX-I) og Dickkopf1 protein (DKK1)9,10.
En anden klinisk undersøgelse viste, at Du-moxibustion yderligere kan justere de uordnede T-celleundergrupper, Ig, og supplere C3 for at afbalancere immunmekanismen11. Med hensyn til knoglemetabolisme kan moxibustion hæmme stigningen af serum alkalisk fosfatase (ALP) og serumfosfor (S-P), øge serumcalcium (S-Ca), knoglemineraltæthed (BMD) og knoglestyrke12. Desuden kan Du-moxibustion reparere rygmarvsfunktionen på flere punkter for at lindre træthedssymptomer hos AS-patienter13. Nogle dyreforsøg har afsløret den potentielle mekanisme for moxibustion i behandling af AS. En undersøgelse viste, at moxibustion signifikant forbedrede den generelle sundhedsstatus, reducerede niveauerne af potetykkelse og reducerede niveauerne af IL-1β, PGE2, IL-6 og TNF-α i ledbåndvævsprøverne i rygsøjlen. Metabolisk vejanalyse forbandt de identificerede metabolitter til TCA-cyklussen såvel som lipid, aminosyre, tarmflora og purinmetabolisme14. En anden undersøgelse viste, at moxibustion undertrykte ekspressionen af proinflammatoriske cytokiner, IL-1β, TNF-α, IL-17 og IL-6; reducerede mRNA-niveauerne af RANKL, RANK, ALP og OCN; og forbedrede de histopatologiske træk i AS-mus15.
Mens disse undersøgelser tyder på, at moxibustion kan være effektiv til behandling af AS, er der behov for mere forskning for at bekræfte disse resultater og bestemme den optimale behandlingsprotokol for moxibustion hos patienter med AS. Vores team skabte og modificerede moxibustionsterapien baseret på den grundlæggende teori og praktiske drift af traditionel kinesisk moxibustion, som er blevet bredt udført og anvendt i kinesisk klinisk praksis i over 35 år. Selv om der kun findes få undersøgelser af høj kvalitet om behandling af AS ved Du-moxibustion, er dets indikation ved behandling af AS blevet understøttet af evidens. Imidlertid er mekanismen til behandling af AS med Du-moxibustion værd at undersøge yderligere. Dyreforsøg er en vigtig metode til at udforske mekanismen for Du-moxibustion i behandlingen af AS. Den kliniske drift af Du-moxibustion er relativt moden, men anvendes sjældent i undersøgelsen af mekanismen i dyreforsøg. Dette papir beskriver detaljeret operationen og forholdsreglerne, der skal tages under Du-moxibustion i behandlingen af AS-forsøgsmus.
Protocol
Representative Results
Discussion
AS er klinisk manifesteret som ryg-, lænde- og ledhævelsessmerter, og spinal deformitet og ledstivhed kan forekomme i alvorlige tilfælde26. Tidlig diagnose og behandling kan forbedre livskvaliteten, reducere invaliditetsraten og forbedre prognoserne for patienter med AS. Ifølge traditionel kinesisk medicin (TCM) menes AS at være forårsaget af mangel på Yang i nyrerne og Du-meridianen samt en ophobning af koldt onde internt. TCM er af den opfattelse, at moxibustion, baseret på begrebet meri…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dette arbejde blev støttet af det generelle program for National Natural Science Foundation of China (nr. 82174491) og Qilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project (nr. Lu Weihan [2020] 132). Tak til laboratoriedyrcentret ved Shandong University of Traditional Chinese Medicine for at give os eksperimentelle forhold.
Materials
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| alcohol pads | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, China | ||
| anesthesia machine | Medical Supplies & Services INT. LTD, Keighley, UK | ||
| centrifuge tubes | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| complete Frech's adjuvant (CFA) | aladdin,Shanghai, China | F393378 | |
| cotton ball | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cotton gauze | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd.,Xinxiang, China | ||
| cutting board | self-preparation | ||
| decorin from bovine articular cartilage | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| depilatory cream | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Shanghai, China | ||
| electronic scale | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| Eppendorf tube | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| eye lubricant | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Beijing, China | ||
| ginger | self-preparation | ||
| GraphPad Prism 7 software | GraphPad Software,Boston, USA | ||
| hair clipper | Super human Group CO LTD, Jinhua, China | ||
| heating pads | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd.,Shenzhen, China | ||
| incomplete Freund’s adjuvant (IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection syringe | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, China | ||
| isoflurane | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, China | R510-22-10 | |
| joss stick | Shijiazhuang Lidu Fragrant Industry Co., LTD.,Shijiazhuang, China | ||
| juicer | Braun (Shanghai) Co., Ltd.,Shanghai, China | ||
| knife | self-preparation | ||
| lighter | Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | ||
| mortar | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD.,Luoyang, China | ||
| Mouse IL-17 ELISA Kit | absin, Shanghai, China | abs520009-96T | |
| Mouse TNF-α ELISA Kit | Wuhan Sanying, Wuhan, China | KE10002 | |
| mulberry paper | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China | ||
| OFT | Xinruan,Shanghai, China | XR-XZ301 | |
| paper cup | self-preparation | ||
| pipettes | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC.,Oxford, UK | ||
| refined moxa velvet | self-preparation | ||
| rotarod | Xinruan,Shanghai, China | XR-6C | |
| scientz-48L cryogenic high throughput tissue grinder | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| scissors | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, China | ||
| semi-automatic paraffin sectioning machine | Leica Camera AG, Watznach, Germany | ||
| SPSS 25.0 software | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM powder | self-preparation | ||
| tips | Biosharp, Labgic, Beijing, China | ||
| writing brush | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, China |
References
- Sieper, J., Poddubnyy, D. Axial spondyloarthritis. Lancet. 390 (10089), 73-84 (2017).
- Lee, W., Reveille, J. D., Weisman, M. H. Women with ankylosing spondylitis: a review. Arthritis Rheum. 59 (3), 449-454 (2008).
- Sari, &. #. 3. 0. 4. ;., Öztürk, M. A., Akkoç, N. N. of ankylosing spondylitis. Turk J Med Sci. 45 (2), 416-430 (2015).
- Zhang, L., et al. Governor vessel moxibustion: Ancient Chinese medical technology with new vitality. Chin J Integr Med. 23 (5), 396-400 (2017).
- Hu, J., et al. Moxibustion for the treatment of ankylosing spondylitis: a systematic review and meta-analysis. Ann Palliat Med. 9 (3), 709-720 (2020).
- Liu, Y., Wang, P., Sun, Y. Y., Qu, J., Li, M. Efficacy of thunder-fire moxibustion in treating ankylosing spondylitis of kidney deficiency and governor meridian cold and its influence on TNF-α and RANKL: study protocol for a prospective, nonblinded, single-center, randomized controlled trial. Trials. 23 (1), 344 (2022).
- Chong, G. Q., Ma, Y., Sun, H. S., Zhang, T., Peng, W. Study on clinical and analgesic mechanism of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. J Clin Acupunct Moxib. (06), 48-49 (1999).
- Liu, W. Q., Lu, X. H. Clinical observation of Melilotus extract tablets combined with Dujiu for treating ankylosing spondylitis. Pharm Res. 35 (03), 182-184 (2016).
- Zhang, Y. L., Lin, J. H., Zhou, Y. Y., Zhao, G. Q., He, Y. T. Clinical observation of Bushen Qiangdu Zhilou decoction combined Du-moxibustion in treating ankylosing spondylitis. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 21 (10), 190-194 (2015).
- Guo, L. J., et al. Clinical effect of moxibustion at governor vessel combined with Bushen Quhan Huashi prescription for ankylosing spondylitis and its effect on levels of CTX-I and DKK1 in serum. New Chin Med. 53 (10), 117-121 (2021).
- Deng, Y. X. Governor moxibustion treatment of ankylosing spondylitis the adjustment of the T-cell subsets observed. J Practical Tradi Chin Inter Med. 26 (18), 77-78 (2012).
- Wang, Y. Q. Mechanism of exercise combined with moxibustion in the treatment of osteoporosis in castrated rats. Chin J Gerontol. 37 (04), 839-840 (2017).
- Ren, J. Y., Li, F., Yan, J., Wan, C., Cai, L. Clinical study of Du-moxibustion combined with needling Huatuo Jiaji acupoint in the treatment of AS of kidney-Yang deficiency. J Clin Acupunct Moxib. 35 (06), 41-44 (2019).
- Xu, X., et al. Metabolomic analysis of biochemical changes in the tissue and urine of proteoglycan-induced spondylitis in mice after treatment with moxibustion. Integr Med Res. 10 (1), 100428 (2021).
- Xu, X., et al. Moxibustion attenuates inflammation and alleviates axial spondyloarthritis in mice: Possible role of APOE in the inhibition of the Wnt pathway. J Tradit Complement Med. 12 (5), 518-528 (2022).
- Li, X., et al. Inflammation intensity-dependent expression of osteoinductive wnt proteins is critical for ectopic new bone formation in ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 70, 1056-1070 (2018).
- Cui, H., et al. CXCL12/CXCR4-Rac1-mediated migration of osteogenic precursor cells contributes to pathological new bone formation in ankylosing spondylitis. Sci Adv. 8 (14), eabl8054 (2022).
- Braem, K., Lories, R. J. Insights into the pathophysiology of ankylosing spondylitis: contributions from animal models. Joint Bone Spine. 79 (3), 243-248 (2012).
- Mikecz, K., Glant, T. T., Poole, A. R. Immunity to cartilage proteoglycans in BALB/c mice with progressive polyarthritis and ankylosing spondylitis induced by injection of human cartilage proteoglycan. Arthritis Rheum. 30, 306-318 (1987).
- Li, Z., et al. Tenascin-C-mediated suppression of extracellular matrix adhesion force promotes entheseal new bone formation through activation of Hippo signalling in ankylosing spondylitis. Ann Rheum Dis. 80 (7), 891-902 (2021).
- Glant, T. T., Cs-Szabo´, G., Nagase, H., Jacobs, J. J., Mikecz, K. Progressive polyarthritis induced in BALB/c mice by aggrecan from human osteoarthritis cartilage. Arthritis Rheum. 41, 1007-1018 (1998).
- Hu, B., Li, Y., Tan, J. Research progress of moxibustion in the treatment of ankylosing spondylitis. Rheum & Arthritis. 11 (05), 77-80 (2022).
- Yang, Y., Dong, Q., Li, R. Matrine induces the apoptosis of fibroblast-like synoviocytes derived from rats with collagen-induced arthritis by suppressing the activation of the JAK/STAT signaling pathway. Int J Mol Med. 39 (2), 307-316 (2017).
- Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. J Neurosci Methods. 189 (2), 180-185 (2010).
- Liu, P., et al. A mouse model of ankle-subtalar joint complex instability induced post-traumatic osteoarthritis. J Orthop Surg Res. 16 (1), 541 (2021).
- Taurog, J. D., Chhabra, A., Colbert, R. A. Ankylosing spondylitis and axial spondyloarthritis. N. Engl. J. Med. 374, 2563-2574 (2016).
- Schett, G., et al. Enthesitis: From pathophysiology to treatment. Nat. Rev. Rheumatol. 13, 731-741 (2017).
- Duan, W. X., et al. Effect of different concentrations of Moxa-smoke on lung function and TNF-α and IL-1 β levels in serum and lung tissues in normal rats. Zhen Ci Yan Jiu [Acupuncture Research]. 43 (2), 98-103 (2018).
- Callhoff, J., Sieper, J., Weiß, A., Zink, A., Listing, J. Efficacy of TNFα blockers in patients with ankylosing spondylitis and non-radiographic axial spondyloarthritis: a meta-analysis. Ann Rheum Dis. 74 (6), 1241-1248 (2015).
- Schinocca, C., et al. Role of the IL-23/IL-17 pathway in rheumatic diseases: an overview. Front Immunol. 12, 637829 (2021).
- Gravallese, E. M., Schett, G. Effects of the IL-23-IL-17 pathway on bone in spondyloarthritis. Nat Rev Rheumatol. 14 (11), 631-640 (2018).
- Kenna, T. J., et al. Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive γ/δ T cells in patients with active ankylosing spondylitis. Arthritis Rheum. 64 (5), 1420-1429 (2012).
- Poddubnyy, D., Sieper, J. Treatment of axial spondyloarthritis: what does the future hold. Curr Rheumatol Rep. 22 (9), 47 (2020).
- van der, H. D., et al. Ixekizumab, an interleukin-17A antagonist in the treatment of ankylosing spondylitis or radiographic axial spondyloarthritis in patients previously untreated with biological disease-modifying anti-rheumatic drugs (COAST-V): 16 week results of a phase 3 randomised, double-blind, active-controlled and placebo-controlled. Lancet. 392 (10163), 2441-2451 (2018).
- Fu, Y. S., et al. Pharmacological properties and underlying mechanisms of curcumin and prospects in medicinal potential. Biomed Pharmacother. 141, 111888 (2021).
- Hassan, A. S., Hofni, A., Abourehab, M. A. S., Abdel-Rahman, I. A. M. Ginger extract-loaded transethosomes for effective transdermal permeation and anti-inflammation in rat model. Int J Nanomedicine. 18, 1259-1280 (2023).
