यहां, हम FAM83A नॉकडाउन के लिए प्रक्रियाएं दिखाते हैं; गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर कोशिकाओं के प्रसार, प्रवास और आक्रमण पर इसके प्रभावों का पता लगाने के लिए; और सिस्प्लैटिन के लिए इन कोशिकाओं का संवेदीकरण। यह अध्ययन गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर के लिए एक आशाजनक लक्ष्य जीन और आगे की दवा अनुसंधान के लिए एक संदर्भ प्रदान करता है।
गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर की रोकथाम और उपचार के लिए ट्यूमर लक्ष्य जीन की खोज सर्वोपरि महत्व रखती है। इस अध्ययन में, हम गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर में ट्यूमर लक्ष्य जीन FAM83A की पहचान में शामिल चरणों की रूपरेखा तैयार करते हैं। सबसे पहले, कैंसर जीनोम एटलस डेटासेट को महिलाओं में FAM83A की अभिव्यक्ति और रोगनिरोधी महत्व को मान्य करने के लिए नियोजित किया गया था। एक छोटे से हस्तक्षेप आरएनए (siRNA) HeLa और C33a कोशिकाओं में FAM83A जीन की दस्तक के लिए इस्तेमाल किया गया था. अगला, 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) धुंधला ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार क्षमताओं पर प्रभाव निर्धारित करने के लिए आयोजित किया गया था. घाव भरने और झरझरा झिल्ली डालने assays ट्यूमर सेल प्रवास और आक्रमण क्षमताओं का मूल्यांकन करने के लिए प्रदर्शन किया गया.
वेस्टर्न ब्लॉटिंग का उपयोग एपोप्टोसिस से संबंधित प्रोटीन के स्तर को निर्धारित करने के लिए किया गया था। जेसी -1 धुंधला माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन परिवर्तनों का मूल्यांकन करने के लिए नियोजित किया गया था। इसके अलावा, सिस्प्लैटिन (डायमिनेडिक्लोरोप्लैटिनम, डीडीपी) हस्तक्षेप का उपयोग लक्ष्य जीन की चिकित्सीय क्षमता का आकलन करने के लिए किया गया था। जीन की एंटीकैंसर विशेषताओं को और अधिक मान्य करने के लिए फ्लो साइटोमेट्री और कॉलोनी गठन परख आयोजित किए गए थे। नतीजतन, FAM83A नॉकडाउन को गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर कोशिकाओं के प्रसार, प्रवास और आक्रमण को रोकने और इन कोशिकाओं को सिस्प्लाटिन के प्रति संवेदनशील बनाने के लिए दिखाया गया था। ये व्यापक पद्धतियां सामूहिक रूप से FAM83A को ट्यूमर से जुड़े लक्ष्य जीन के रूप में मान्य करती हैं, जो गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर की रोकथाम और उपचार में संभावित चिकित्सीय लक्ष्य के रूप में वादा करती हैं।
सर्वाइकल कैंसर एक वैश्विक चिंता का विषय है क्योंकि यह दुनिया भर में स्त्री रोग संबंधी दुर्दमता के अग्रणी प्रकारों में से एक हैऔर महिलाओं में कैंसर से संबंधित मृत्यु दर का प्रमुख कारण है। रेडिकल सर्जरी और केमोरेडियोथेरेपी प्राथमिक चरण में उच्च इलाज दर से जुड़े हैं। हालांकि, गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर के उन्नत चरण में रोगियों के लिए उपचार के परिणाम जो मेटास्टेटिक बीमारी विकसित करते हैं, बहुत प्रतिकूल हैं2. इसलिए, गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर कोशिकाओं के प्रवास और आक्रमण को अंतर्निहित जैविक तंत्र को और समझना और इस बीमारी की रोकथाम और उपचार के लिए संभावित चिकित्सीय लक्ष्यों की पहचान करना महत्वपूर्ण है।
कैंसर की प्रगति में शामिल लक्ष्य जीन की पहचान करना और उनकी अभिव्यक्ति या कार्रवाई को रोकने के तरीके खोजना आशाजनक उपचार विकल्प प्रस्तुत करता है। इस अध्ययन में, हमने FAM83 को कैंसर पैदा करने वाले जीन के रूप में पहचाना और C33a और HeLa कोशिकाओं पर इसके निरोधात्मक प्रभावों की जांच की। FAM83 परिवार oncogenes (FAM83A-H) व्यापक रूप से मानव कैंसर 3,4 में रिपोर्ट कर रहे हैं. हाल ही में, FAM83A को फेफड़े5, स्तन6, डिम्बग्रंथि7, और अग्नाशयी8 कैंसर में अपग्रेड किया गया था, यह दर्शाता है कि FAM83A ट्यूमर कोशिकाओं में प्रसार, आक्रमण, स्टेम-सेल जैसे लक्षणों और दवा प्रतिरोध को बढ़ावा देने के माध्यम से कैंसर की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। महत्वपूर्ण रूप से, FAM83A को गर्भाशय ग्रीवा घाव प्रगति और कार्सिनोजेनेसिस9 से जुड़े उपन्यास उम्मीदवार जीनों में से एक के रूप में पहचाना गया था। मानव गर्भाशय ग्रीवा कैंसर कोशिकाओं में ऊंचा FAM83A अभिव्यक्ति की पुष्टि के बावजूद, गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर में FAM83A का विशिष्ट प्रभाव और अंतर्निहित तंत्र स्पष्ट नहीं है।
इस अध्ययन में, हम गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर में एक ट्यूमर लक्ष्य जीन के रूप में FAM83A की पहचान में शामिल प्रोटोकॉल की रूपरेखा और HeLa और C33a कोशिकाओं में FAM83A जीन के दस्तक के लिए एक छोटे से हस्तक्षेप आरएनए (siRNA) का उपयोग करें. 5-एथिनिल-2′-डीऑक्सीयूरिडाइन (ईडीयू) धुंधला ट्यूमर सेल प्रसार पर प्रभाव निर्धारित करने के लिए किया गया था, जबकि घाव भरने और झरझरा झिल्ली डालने वाले परख ने ट्यूमर सेल माइग्रेशन और आक्रमण क्षमताओं का मूल्यांकन करने में मदद की।
पश्चिमी सोख्ता एपोप्टोसिस से संबंधित प्रोटीन के स्तर को निर्धारित करने के लिए किया गया था, और जेसी -1 धुंधला माइटोकॉन्ड्रियल समारोह परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए नियोजित किया गया था। इस प्रकार, हमने बताया कि FAM83A कोशिका प्रसार, मेटास्टेसिस और गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर में आक्रमण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। PI3K/AKT-पाथवे-जुड़े माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन और एपोप्टोसिस के माध्यम से, FAM83A नॉकडाउन ने सर्वाइकल कैंसर कोशिकाओं को सिस्प्लैटिन (डायमिनेडिक्लोरोप्लैटिनम, DDP) के प्रति संवेदनशील बनाया। यह अध्ययन गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर और संभवतः अन्य कैंसर के लिए एक नया लक्ष्य प्रदान करता है और कुछ कीमोथेरेपी दवाओं के लिए कैंसर कोशिकाओं के प्रतिरोध को दूर करने के लिए रणनीतियों के विकास के लिए एक संदर्भ प्रदान करता है।
गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर की रोकथाम और उपचार दोनों के लिए ट्यूमर लक्ष्य जीन की जांच अत्यंत महत्वपूर्ण है। गर्भाशय ग्रीवा के कैंसर के विकास और प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने वाले विशिष्ट जीन को सम?…
The authors have nothing to disclose.
इस काम को जिंगझोउ साइंस एंड टेक्नोलॉजी ब्यूरो फाउंडेशन (नंबर 2020HC06) द्वारा समर्थित किया गया था।
Cells and Medium Formulation | |||
C33a | American Type Culture Collection | ||
Hela | American Type Culture Collection | ||
Modified medium | 10% fetal bovine serum and + antibiotics (100 U/mL penicillin and 100 U/mL streptomycin) | ||
Antibody Information | |||
AKT | 4691, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
Bcl2 | 26593-1-AP, Proteintech Group, Inc | ‘1:1,000 | |
Caspase 3 | 19677-1-AP, Proteintech Group, Inc | ‘1:2,000 | |
cleaved-caspase3 | abs132005; Absin Bioscience Inc. | ‘1:1,000 | |
Cytc | 10993-1-AP; Proteintech Group | ‘1:1,000 | |
GAPDH | 10494-1-AP, Proteintech Group, Inc. | ‘1:8,000 | |
mTOR | 2983, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
PI3K | 4292, Cell Signaling Technology Inc | ‘1:1,000 | |
p-AKT | 4060, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
p-mTOR (Ser2448) | #5536, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
p-PI3K p85 subunit | 17366, Cell Signaling Technology Inc. | ‘1:1,000 | |
Secondary antibodies | GB23303, Servicebio | ‘1:2,000 | |
Materials | |||
6-well plate | Corning, NPY | ||
Alexa Fluor 555 | Beyotime | ||
BCA Protein assay kit | Beyotime, China | P0011 | |
ChemiDoc XRS Imager System | BioRad | ||
Enhanced chemiluminescence detection kit | Servicebio, Inc.,China | cat. no. G2014 | |
Fluorescence microscope | Olympus Corporation, Tokyo, Japan | ||
Hifair II 1st Strand cDNA Synthesis Super Mix | 11123ES60, Yeasen Biotech o., Ltd., China | ||
Inverted microscope | Olympus, Tokyo, Japan; | ||
Millicell transwell inserts | Millipore,Bedford, MA, USA | ||
Mitochondrial membrane potential assay kit | Beyotime, China | ||
PMSF | ST506, Beyotime Biotech, Jiangsu, China | #ST506 | |
Real-time quantitative PCR instrument | Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific. China. | ||
RIPA Lysis Buffer | Beyotime Biotech, Jiangsu, China | ||
TRIzol reagent | Invitrogen | 15596026 | |
TRIzol reagent | Takara Bio Inc., Otsu, Japan | ||
Software | |||
Image-Pro | plus 6.0 |